利用16S rDNA序列鉴定常见嗜尸性蝇类种属

目的通过分析16S rDNA 551bp基因序列,鉴定常见嗜尸性蝇类种属。方法随机采集17个地区放置于室外草地的家兔尸体上7个种24只嗜尸性苍蝇样本,经形态学鉴定种类后,提取胸肌DNA,对16S rDNA 551bp基因片段进行PCR扩增,产物纯化、测序后上传GenBank;利用MEGA 4.0软件构建序列间的系统发育树,分析建立种内及种间进化分歧表。结果 24只样本16S rDNA序列分析显示7种蝇类可以较好聚类;其中棕尾别麻蝇种内进化分歧整体均数为2.8%,家蝇为1.5%,丽蝇科的5个种均在0.7%以内。上述7个蝇种的种间进化分歧均数在1.6%～7.1%之间。其中,棕尾别麻蝇、家蝇与其它蝇类的种间分歧均数在4.0%～7.1%之间。结论本文分析结果显示,蝇种间同源性相差明显,采用mtDNA 16S rDNA中551bp基因序列分析,可进行蝇种鉴定。     

用PCR和ESI-TOF-MS技术检测线粒体DNA的异质性

目的用PCR和ESI-TOF-MS分型技术检测线粒体DNA（mtDNA）D环高变区,通过碱基组成分析mtDNA的异质性。方法从华东汉族群体选取12名无关个体,用PLEX-ID平台进行mtDNA分型。该平台使用12对引物,对mtDNA高变区1（HVⅠ,引物所跨区域为15893~16451）进行碱基组成分析;使用另外12对引物,对mtDNA高变区2（HVⅡ,引物所跨区域为5~603）进行碱基组成分析,考察mtDNA异质性频率。结果 mtDNA多态性区域的碱基组成信息反映出区段内有无异质性。在高变区Ⅰ的12个区段中,有3个区段表现出多聚C长度异质性：在mtDNA高变区Ⅱ（31~576）的12个区段中,有3个区段检见点异质性,另外5个区域检见Poly C长度异质性。结论群体调查表明,mtDNA的序列异质性多见于高变区Ⅱ的103~267区段,多聚C长度异质性多见于高变区Ⅰ的16124~16201、16157~16201、16182~16250区段和高变区Ⅱ的234~367、431~576区段。将mtDNA标记用于母系关系检验和（或）个体识别时,需要格外留意这些异质性信息,以免结论错误。     

粪便DNA提取及检验

目的　研究人类粪便DNA的提取和检验方法。方法　 8人份粪便样本 ,磁珠法提取DNA后 ,进行STR复合扩增和mtDNAHVI区测序分析。结果　用 2种方法提取的粪便DNA ,STR复合扩增检验均未获成功 ;方法1提取的粪便DNA有 6个样本、方法 2有 7个样本获得了清晰可读的mtDNAHVI区序列 ,并与唾液对照样本DNA的序列完全一致。结论　用本文建立的方法提取粪便DNA ,不适于STR分析 ,可通过mtDNA测序分析进行检验。     

4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1和nad1基因的序列分析

收集黑龙江省大庆地区牛源、绵羊源、绒山羊源和山羊源土耳其斯坦东毕吸虫,以SDS-蛋白酶K法抽提其基因组DNA,用特异性引物通过PCR扩增土耳其斯坦东毕吸虫成虫细胞色素C氧化酶亚基1基因(cox1)和烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶亚基1基因(nad1)并进行测序,应用Chromas和DNAStar软件分析扩增产物的变异情况.结果表明,大庆地区4种终末宿主土耳其斯坦东毕吸虫cox1基因均为1 125 bp,nad1基因均为518 bp;且其线粒体基因存在差异,cox1的同源性为99.0%～99.7%,nad1的同源性为98.3%～99.4%.     

潍坊地区11个mtSNP位点单倍型频率调查

本研究采用Vallone等报道的用等位基因特异引物延伸技术建立的11个线粒体SNP位点（mtSNP）复合检测方法，对潍坊地区的11个mtSNP位点频率进行了调查。现报道如下。 1 材料与方法     

线粒体DNA在年龄推断中的应用

线粒体是机体ATP产生的场所,近年来研究发现线粒体DNA(MitochondrialDNA)的损伤程度会随着年龄的增长而增加。深入研究并将mtDNA的损伤程度应用在法医学软组织的年龄推断中将有重要意义。     

500年木乃伊的DNA分析

目的对干尸DNA的分析,为法医进行陈旧检材分析积累经验。方法用经典的酚/氯仿提取DNA,WizardDNAclean-upsystem纯化,用PromegaPowerplus16system进行PCR,扩增STR,将线粒体DNAhv1区分别用三对重叠的引物进行全序列测定。结果STR位点图谱清楚,线粒体DNA测序结果理想。结论此法用于陈旧检材DNA分析,结果理想。     

血细胞线粒体DNA4977缺失与年龄的相关性

目的检测不同年龄组人活体血细胞线粒体DNA4977碱基缺失情况及其与年龄的相关性。方法根据Anderson标准序列设计mtDNA恒定区和mtDNA4977特异缺失区引物,采用实时荧光定量PCR技术,对110份不同年龄组人活体血细胞mtDNA4977缺失水平进行检测。结果在23岁以下个体中未检出mtDNA4977缺失,在大于23岁的被检个体中检测到mtDNA4977缺失,年龄越大,越容易检测到缺失。结论人mtDNA4977缺失与年龄有一定的相关性。     

大鼠乌头碱中毒心肌酶的细胞化学研究(Ⅱ)——线粒体细胞色素C氧化酶(CCO)的定位

作者通过大鼠乌头碱中毒心肌线粒体 CCO 的超微结构定位,观察到乌头碱引起 CCO 的定位紊乱。由于损害程度不同,出现三种情况:(1)CCO 失去在线粒体嵴膜和内膜上的定位,酶反应产物呈自由扩散状态,酶反应强度对照组有所增强或相似;(2)CCO 失去在线粒体嵴膜和内膜上的定位,酶反应强度较对照组明显减弱;(3)在同一线粒体中部分保持 CCO 的嵴膜、内膜定位,部分失去 CCO 在嵴膜和内膜上的定位。实验结果表明,乌头碱干扰了心肌细胞呼吸链的电子传递,抑制氧化磷酸化的正常进行,导致心肌能量代谢障碍。     

肉鸡线粒体型硫氧还蛋白的原核表达及抗氧化特性评价

为了研究肉鸡线粒体型硫氧还蛋白(GgTrx2)的功能,提取肉鸡肝总RNA,经RT-PCR扩增去除信号肽序列的GgTrx2基因,构建原核表达载体pET-28a(+)-GgTrx2,转化入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达;以Ni-NTA纯化重组蛋白并评价其活性;分析GgTrx2对脂多糖(LPS)诱导的鸡肝细胞氧化应激的影响。结果显示,构建的原核表达载体pET-28a(+)-GgTrx2在37℃经1.0mmol/L IPTG诱导4h蛋白表达效果最好,经Ni-NTA柱纯化后纯度达90%以上,质量浓度为5.0mg/mL。该重组蛋白具有较高的还原胰岛素二硫键的能力,并呈现浓度效应。抗氧化功能分析表明,GgTrx2预处理能显著降低LPS诱导的鸡肝细胞膜脂过氧化和保护抗氧化酶SOD和CAT的活性。结果表明,本研究原核表达的GgTrx2蛋白具有良好的生物学活性和抗氧化应激特性,为进一步阐明其生物学功能和用于治疗氧化应激性疾病奠定了基础。