KingFisher磁珠纯化仪在提取脱落细胞检材DNA上的应用

目的验证利用KingFisher磁珠纯化仪提取脱落细胞DNA的效率。方法使用磁珠法及KingFisher磁珠纯化仪的富集浓缩程序和纯化程序提取脱落细胞DNA,并进行STR检验和结果统计。结果对45例脱落细胞生物检材进行DNA提取检验,获得完整STR分型的29例,成功率达到64%。结论 KingFisher磁珠纯化仪提取脱落细胞检材DNA,方法简单快速,成功率高,可以用于案件DNA检验应用。     

利用COI序列序列鉴定常见嗜尸性蝇种

目的 检测嗜尸性蝇类线粒体DNA(mtDNA)细胞色素氧化酶辅酶Ⅰ(COI)中278bp序列,鉴定蝇科3属5种嗜尸性蝇,解决其形态学种类鉴定的难题,为死亡时间推断提供技术支持.方法 从15省、市(地区)室外草地家兔尸体上采集蝇科3属5种共计18个蝇类成蝇样本,提取mtDNA进行PCR扩增,序列测定且上传GENBANK,...     

一次性牙刷上脱落细胞的DNA提取及STR分型

目的研究一次性使用牙刷上脱落细胞的DNA提取和STR分型。方法对一次性使用牙刷的采集方法、采集部位、DNA提取方法、存放时间对STR分型的影响进行比对研究。结果割取法可获得较高浓度的DNA,30例中检出9个以上基因座达27例,与擦拭法存在统计学差异（P〈0.05）。Chelex-100法、DNA IQTM法检出9个以上基因座分别为26例、24例,STR分型结果无统计学意义（P〉0.05）。提取牙刷的前、后部三束刷毛检出9个以上基因座分别达27例、28例,STR分型结果无统计学意义（P〉0.05）;放置1天、1周、1个月、3个月、6个月的时间后检出9个以上基因座分别为28例、27例、22例、12例、7例。结论割取法提取一次性牙刷上的脱落细胞进行STR分型效果良好;放置时间越长的牙刷,检出率越低。     

新城疫病毒ClassⅠ强毒株L基因的表达及单克隆抗体的制备

采用RT-PCR方法从新城疫病毒(NDV)ClassⅠ强毒株9a5b中扩增出了L基因C末端的基因片段,将其克隆到表达载体pGEX-6P-1中,测序验证后转化入表达宿主菌BL21进行IPTG诱导表达,表达的蛋白接种8周龄BALB/c小鼠,制备L蛋白的单克隆抗体,用间接免疫荧光试验(IFA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western-bolt方法共同检测所获得的抗体。结果显示,重组菌可表达出分子质量约为39ku的重组融合蛋白。SDS-PAGE分析显示,表达的蛋白以包涵体的形式存在于菌体中。多种方法筛选显示成功制备了4株单克隆抗体。免疫特异性鉴定结果表明,在所获得的单抗中,4株单抗均具有ELISA和IFA效价,且4株单抗与ClassⅠ毒株的反应均强于与ClassⅡ毒株的反应。     

体外抗草鱼呼肠孤病毒药物筛选细胞模型的建立

以草鱼肾细胞系(CIK)和草鱼呼肠孤病毒为材料,采用噻唑蓝比色法分先给药后感染、先感染后给药、药物与病毒共孵育后感染3组进行抗草鱼呼肠孤病毒药物的筛选,建立了体外抗草鱼呼肠孤病毒药物筛选的细胞模型。先给药后感染试验组的结果表明,穿琥宁在阻断草鱼呼肠孤病毒吸附和侵入细胞时效果最强,其次是利巴韦林和板蓝根,黄芩的阻断效果最弱;而在先感染后给药试验组中,穿琥宁、利巴韦林和黄芩抑制草鱼呼肠孤病毒增殖的作用显著,板蓝根抑制病毒增殖的作用不明显;在药物与病毒共孵育后感染试验组中,利巴韦林对草鱼呼肠孤病毒有一定的直接杀灭作用,黄芩、板蓝根和穿琥宁等的体外杀病毒效果不明显。该模型的建立确认了药物在CIK细胞上具有抑制草鱼呼肠孤病毒的作用,不同给药方式药物的作用效果不同,也为抗病毒药物的筛选提供了有效的技术平台。     

鱼腥草素钠诱导临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡

目的 观察鱼腥草素钠对临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡的影响。方法 利用DAPI染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞核的形态;利用FITC-VAD-FMK染色观察耐药白假丝酵母菌生物膜细胞metacaspase活性;分别在JC-1染色和DCFH-DA染色下,采用流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;利用Annexin Ⅴ-FITC/PI染色和流式细胞仪检测耐药白假丝酵母菌生物膜细胞的凋亡率。结果 一定浓度的鱼腥草素钠作用下,临床耐药白假丝酵母菌生物膜细胞内ROS水平、生物膜细胞凋亡率、metacaspase酶活性明显升高,MMP水平明显降低,生物膜细胞核出现碎裂和皱缩。结论 鱼腥草素钠能够诱导耐药白假丝酵母菌生物膜细胞凋亡。     

当归芍药散含药血清抑制内皮素-1介导的肝星状细胞收缩的机制研究

目的 探讨当归芍药散（Danggui Shaoyao San,DSS）含药血清对内皮素-1（endothelin,ET-1）介导的肝星状细胞内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase, eNOS）和RhoA/ROCKⅡ蛋白表达的影响。方法 将实验动物分为空白组和给药组,分别提取血清,－20 ℃冻存备用。细胞实验分为6组：空白组,模型组,DSS含药血清高、中、低剂量组,Y-27632抑制剂组。肝星状细胞培养24 h后,采用Western blot法检测细胞内RhoA、ROCK Ⅱ、eNOS蛋白的表达水平。结果 与空白组比较,模型组RhoA、ROCK Ⅱ蛋白表达水平均显著升高（P<0.05）,细胞内eNOS蛋白表达水平明显下降（P<0.05）;与模型组比较,DSS含药血清各剂量组RhoA、ROCKⅡ蛋白表达水平减少（P<0.05）,DSS含药血清高、中剂量组细胞内eNOS蛋白表达水平增多（P<0.05）。结论 DSS可通过抑制肝星状细胞RhoA、ROCK蛋白的表达,上调eNOS蛋白的表达,抑制ET-1诱导的肝星状细胞收缩。     

苓桂术甘汤含药血清对过氧化氢诱导的乳鼠原代心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响

目的 观察苓桂术甘汤含药血清对H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤及细胞凋亡的影响。方法 建立H2O2诱导的心肌细胞氧化应激损伤模型,将心肌细胞随机分为正常对照组、H2O2模型组、空白大鼠血清（20%）组、苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）组,用苓桂术甘汤含药血清（5%、10%、20%）,分别预处理心肌细胞12 h后,加入100 μmol/L H2O2继续培养6 h,用MTT法测定心肌细胞存活率,比色法检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（glutathione peroxidase ,GSH- Px）活性及丙二醛（malonic dialdehyde,MDA）水平,用荧光核染色法观察细胞凋亡形态学变化,流式细胞术（Annexin Ⅴ- FITC/PI）检测细胞凋亡率,荧光探针法测定氧自由基水平。结果 与正常组比较,模型组心肌细胞活力明显降低（P<0.05）,氧自由基、LDH活性及MDA水平均显著升高（P<0.05）,SOD及GSH- Px活性均显著降低（P<0.05）,细胞核浓染数目增加,细胞凋亡率明显升高（P<0.05）;与模型组比较,苓桂术甘汤含药血清组心肌细胞活力明显升高（P<0.05）,GSH- Px、SOD活性均显著升高（P<0.05）,LDH活性,氧自由基、MDA水平均显著降低（P<0.05）,心肌细胞核浓染减少,细胞凋亡率明显降低（P<0.05）。结论 苓桂术甘汤能够清除细胞内氧自由基,抑制心肌细胞凋亡,增强细胞活性,对心肌细胞氧化应激损伤具有保护作用。     

针刺对海洛因复吸大鼠脑神经细胞凋亡的影响

目的 观察针刺对海洛因复吸大鼠脑神经细胞凋亡的影响。方法 采用剂量递增法复制海洛因成瘾大鼠模型,将40只Wistar大鼠平均分成正常组、模型组、针刺组、药物组,于实验第39天取4组大鼠海马、中脑腹侧被盖区（ventral tegmental area, VTA）脑组织,光镜下观察神经细胞坏死情况,采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL）检测脑神经细胞凋亡情况。结果 光镜下可见模型组大鼠脑海马、VTA神经细胞丢失、变性较严重,核溶解消失,神经细胞变性坏死及间质水肿明显,并可见筛状软化灶。针刺组未见明显筛状软化灶,神经细胞变性坏死及间质水肿程度较模型组、药物组减轻。针刺组神经细胞间质水肿较轻,未见明显筛状软化灶,神经细胞水肿坏死变性较少量。与正常组比较,模型组大鼠脑海马、VTA中TUNEL染色阳性细胞数显著增多（P<0.01）;与模型组、药物组比较,针刺组大鼠脑海马、VTA中TUNEL染色阳性细胞数显著减少（P<0.01）。结论 海洛因成瘾可致大鼠脑神经细胞凋亡,针刺“百会”、“大椎”穴可抑制神经细胞凋亡     

肺抑瘤膏联合树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞治疗晚期肺腺癌23例

目的 观察肺抑瘤膏联合树突状细胞-细胞因子诱导的杀伤细胞（dendritic cells-cytokine induced killer cells, DC-CIK）治疗晚期肺腺癌的临床疗效。方法 将46例晚期肺腺癌患者随机分为观察组（肺抑瘤膏联合DC-CIK治疗）和对照组（化学疗法联合免疫支持治疗）,治疗4个月后观察患者临床主症、卡氏功能状态量表（Karnofskys performance scale, KPS）评分及血清血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的改变。结果 治疗后,观察组咳嗽、咳血、胸痛、气短、乏力、纳呆的好转率显著高于对照组（P＜0.05,或P＜0.01）;观察组在提高KPS评分及降低血清VEGF水平方面显著优于对照组（P＜0.05,或P＜0.01）。结论 肺抑瘤膏联合DC-CIK治疗可有效改善晚期肺腺癌患者临床症状,提高生存质量,并能显著降低患者血清VEGF。