A型口蹄疫病毒多抗原表位杆状病毒表达载体的构建及表达

为构建A型口蹄疫病毒(FMDV)多抗原表位杆状病毒表达载体,将A型FMDV上5个B细胞表位(VP1140-160aa、VP270-80aa、VP352-67aa、3B29-42aa和3D16-30aa)和4个辅助性T细胞表位(VP1200-213aa、VP420-34aa、3A21-35aa和3D346-370aa)通过人工合成的方法串联起来构建复合多表位基因B。然后将其克隆至杆状病毒表达载体pFastBac HTB。将酶切和测序鉴定正确的阳性重组质粒pFastBac HTB-B转化至大肠杆菌DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将PCR鉴定正确的重组杆状病毒质粒利用CellfectinⅡReagent转染至Sf9细胞。通过间接免疫荧光试验和Western-blot检测表达情况。结果显示,能够得到与A型FMDV猪抗阳性血清结合的蛋白,大小约为22.3ku,与预期结果相符。结果表明,成功构建了A型FMDV多抗原表位杆状病毒表达载体,并在昆虫细胞中正确表达,为下一步蛋白纯化奠定了基础。     

感染传染性法氏囊病病毒的DF-1细胞中chTLR3表达的动态变化

为研究鸡Toll样受体3(chTLR3)基因在传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染DF-1细胞过程中的表达情况,用3种不同毒力的IBDV感染DF-1细胞,采用实时荧光定量PCR法以及间接免疫荧光法对细胞内chTLR3基因的表达情况进行了检测。结果显示,DF-1细胞感染IBDV标准株后,其chTLR3mRNA的表达量呈增长趋势,感染后第48小时mRNA表达量达到峰值(P0.01),之后逐渐下降;DF-1细胞分别感染IBDV弱毒疫苗株与分离株后,其chTLR3mRNA表达量均出现先上升后下降的趋势,但其表达量低于标准株(P0.01)。采用间接免疫荧光法检测的chTLR3蛋白的表达变化规律与其基因的表达变化规律相同。结果证实,chTLR3参与IBDV感染DF-1细胞的过程;IBDV的毒力可影响chTLR3的表达。     

腺病毒载体与慢病毒载体介导EGFP基因转染犬骨髓间充质干细胞效果的比较

为了比较携带增强型绿色荧光蛋白基因的腺病毒载体与慢病毒载体转染犬骨髓间充质干细胞(BMSCs)的效率及其对细胞增殖能力的影响,采用全骨髓贴壁法分离培养犬BMSCs。用两种病毒载体分别按不同的感染复数(MOI)转染BMSCs,72h后荧光显微镜下观察,计算转染效率,并用MTT法检测两种病毒载体对BMSCs增殖能力的影响。结果显示,两种病毒载体随着感染复数的增加,对BMSCs的转染效率逐渐增大,对细胞增殖能力的影响也逐渐增加。MOI分别为25、50、100、200、400时,腺病毒载体的转染效率分别为11%、17%、32%、51%、65%,慢病毒载体的转染效率分别为48%、70%、91%、98%、99%。与空白对照组相比,腺病毒载体在MOI=200、慢病毒载体在MOI=400时对BMSCs增殖有显著影响(P0.05)。结果表明,慢病毒载体在不影响细胞增殖能力的感染复数范围内,对犬BMSCs的转染效率明显高于腺病毒载体。     

环形泰勒虫微线体-棒状体蛋白的亚细胞定位分析

为研究微线体-棒状体蛋白在环形泰勒虫裂殖体及其在感染环形泰勒虫裂殖体的淋巴细胞中表达情况及亚细胞定位,应用Western-blot验证了该蛋白多克隆抗体的特异性;通过条件摸索找出最佳比例的固定剂和最佳一抗、二抗的工作浓度;利用优化好的条件对微线体-棒状体蛋白进行间接免疫荧光试验,用激光共聚焦技术确定该蛋白在环形泰勒虫裂殖体和其在感染的淋巴细胞中表达及亚细胞定位。结果表明,微线体-棒状体蛋白主要定位于环形泰勒虫裂殖体的表面,而在宿主淋巴细胞细胞质中分布较少。     

微量脱落细胞DNA检验方法的比较分析

结合日常检案,本文从实验室提取方法和检验时限两个方面对盗窃案件脱落细胞类生物学检材的DNA检出率进行了比较分析,提取方法使用Eppendorf epMotion 5075工作站结合DNA IQTM系统（以下简称5075结合磁珠法）和手工硅珠法,检验时限规定为案发至检验时间段.现将分析结果交流如下.     

从主体间性视角谈伽达默尔的效果历史理论

效果历史理论是伽达默尔哲学诠释学的理论轴心,它实际上是由效果历史、视域融合和时间距离这三个基本概念构成的。它们三者之间相互联系,为效果历史理论搭建了逻辑演绎的框架。效果历史理论阐明了主体在诠释过程中的积极姿态,不仅使读者取得了主体的资格,而且使文本也获得了主体的资格,伽达默尔认为"理解"就是文本、读者、作者之间的效果历史事件。效果历史理论展示了读者与文本之间的主体间性关系,这是对理解问题思考视角的转化,理解问题在主体间性这一理论基石上达到了更高层面的解读。     

深化“三型”机关创建活动

<正>为贯彻落实《中国石油思想政治工作保障体系建设的意见》,宝鸡石油机械有限责任公司(以下简称"公司")开展了"学习型、创新型、服务型"(以下简称"三型")机关建设活动。在此基础上,紧密结合党的群众路线教育实践活动,进一步深化"三型"机关创建活动,在全公司各级机关全面开展了星级机关创建活动,并制定和推行了《机关部门"三增四强五做到"月度报表》,有效地解决了当前各行各业在加强作风建设中存在的创建热情高、但创建效果不明显的现象。     

主体与实践的逻辑关系探析——兼论西方马克思主义对马克思主义哲学的重建路径

主体与实践逻辑关系的系统梳理对于清晰展现西方马克思主义在20世纪发展演变的内在逻辑以及在此基础上深刻理解和把握其与马克思主义哲学的本质差异具有重要意义。马克思主义哲学立足于科学的实践观阐述对主体的理解与认识,确立了科学的主体观。鉴于第二国际马克思主义在主体与实践关系理解上的偏差,西方人本主义的马克思主义开始致力于从以主体性为核心的总体性原则出发重建马克思主义哲学。但从逻辑关系看,其实践概念却是从主体范畴中推演出来的,并侧重从一种抽象的精神文化层面来揭示实践的内在机制。这一缺陷为西方科学主义的马克思主义所洞察,由此他们提出了拒斥主体的结构主义范式。这两种思潮的交锋又催生出一种寻求主客体力量动态平衡以及从主体间性出发重建历史唯物主义的全新理论动向。     

主体间性思想政治教育的哲学反思——以马克思与哈贝马斯的比较为视角

以现代西方主体间性理论推进思想政治教育转型,成为思想政治教育学科研究领域的主导方向之一,研究成果众多,值得借鉴,但也亟须认真反思。哈贝马斯的主体间性理论迎合了众多人的口味,但与马克思相比较,显得黯然失色。马克思的交往实践思想立足人的现实生活过程,把交往行为奠定在人的实践活动当中,衬托出主体间性思想政治教育的实践方向,必将成为引领主体间性思想政治教育发展的指导理论。