PCR-RFLP技术作ABO基因分型方法的建立

报道了应用 PCR-RFLP(polymerase chain reaction, restriction fragment length polymorphism)技术进行ABO基因分型的方法。运用控制人类A、B型物质合成酶的cDNA上第258和700bp处核苷酸的特性,设计两对PCR引物,扩增片段分别用限制性内切酶KpnⅠ和AluⅠ酶切,经过分析判断ABO等位基因,可将血型分为AA、AO、BB、BO、AB和OO六种基因型?运用此方法成功地检验了血斑、精斑、带毛囊毛发、骨组织和强奸阴拭子精斑等法医检材。     

短串联重复序列D3S1359基因座的多态性

应用PCR、聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳及银染技术对STRD3S1359基因座进行多态性调查,首次获得中国汉族人群的基因频率分布数据。检出19个等位基因,59个基因型,基因型频率分布符合Hardy－Weinberg平衡。观察352次减数分裂未发现突变基因,DP值为0．9380,三联体PE值0．6311,二联体PE值0．4568,PIC值0．7824。证实D3S1359是一个高信息含量的STR标记系统。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白基因的分离与分析

根据GenBank中美洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的核酸序列,设计合成1对引物,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从病猪肺中扩增出编码核衣壳蛋白(NP)基因,克隆入T-载体后,利用双脱氧链末端终止法测定序列,所获得的序列经Bankit投放到GenBank,并利用DNASIS、Dnastar等软件进行了分析.     

《法医学杂志》常用主题词(四)

正~~     

印记基因H19上游高甲基化区SNPs多态性研究

目的建立简单、高效的DNA甲基化标记和SNPs联合检测技术，并用于H19基因上游高甲基化区两组SNPs群体遗传学检测。方法用PCR—DGGE技术对232例武汉汉族无关个体H19基因上游启动子区H19FR1和H19FR2单倍型进行检测；同时选用两种甲基化敏感的限制酶（msRE）HpaⅡ和HhaⅠ，检测H19FR等位基因亲代来源。结果H19FR1区检出5种单倍型、9种表型组合，其个体识别能力（DP）、多态性信息含量（PIC）和非父排除率（PE）分别为0．803、0．58和0．322；H19FR2区检出2种单倍型、3种表型组合，其DP、PIC和PE值分别为0．626、0．37和0．162。测序结果显示，片段H19FR1含有a7342g、a7357g和g7547a3个SNPs与1个g7351c点突变；H19FR2仅含aS097g1个SNP。msREHpaⅡ或HhaⅠ可消化个体母源等位基因，PDP-DGGE分析仅能检测到父源等位基因。结论PDP-DGGE是一种简单、灵敏、高效的DNA甲基化标记和SNPs联合分析技术，其在进行多态性分型同时还可以确定等位基因的亲代来源，具有较高的法医学应用价值。     

连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研究

目的建立连接酶链反应（LigaseChainReaction，LCR）应用于法医学领域的初步方法探索。方法选择人Amelogenin基因座进行连接酶链反应。针对人染色体Amelogenin基因座Xp22．1一．3、Ypll．2上M55418、M55419的序列，自行设计特异引物，建立LCR最佳体系，对男性和女性Amelogenin基因座进行分型。结果巢式LCR能够对男性和女性Amelogenin基因座正确分型。结论LCR技术能够应用于人Amelogenin基因座分型，但尚需进一步简化和改进。     

D14S608、D10S2325、D15S659和GABARB15基因座在温州汉族群体中遗传多态性调查

应用PCR和PAGE技术对温州地区汉族180个无关个体进行了D14S608、D10S2325、D15S659和GABARB15基因座的遗传多态性研究,获得了该地区的遗传学多态性参数,以供法医学应用参考。     

水貂肠炎病毒疫苗株和野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立

为了建立水貂肠炎病毒(MEV)疫苗株与野毒株的鉴别检测方法,根据GenBank中的水貂肠炎病毒序列设计了1对引物,用来扩增包含水貂肠炎病毒NS1基因在内的2 013bp大小的片段。通过对国内疫苗毒MEVB株及其他细小病毒参考株的NS1基因序列比较发现,疫苗毒MEVB株NS1基因核苷酸1401位的碱基由T变为C,致使1399位～1404位的核苷酸构成由ATTGAT变异为ATCGAT,多了1个限制性内切酶ClaⅠ酶切位点,其他MEV分离毒株中均未出现此酶切位点。用特异性引物扩增出2 013bp的目的片段后,再用限制性内切酶ClaⅠ进行酶切分析,疫苗毒MEVB株被切割成1 404bp和609bp的2个片段,国内其他分离株均未出现上述片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗毒MEVB株和野毒株。     

DYS385检测方法的改进

目的建立检测DYS385的新方法。方法比较基因数据库(GDB)中推荐的引物和Schneider所设计的引物扩增DYS385的效果;在此基础上,以GDB推荐的引物作为外引物,Schneider所设计的引物作为内引物,通过调整内、外引物的浓度,优化扩增条件,建立DYS385的半巢式PCR体系。结果与常规方法相比,采用Schneider所设计的引物扩增DYS385,扩增片段缩短112bp,电泳分离的效果好,灵敏度提高2倍,达500pg;建立的半巢式扩增方法,能特异性扩增短片段,灵敏度提高20倍,达50pg。结论建立的DYS385半巢式扩增方法具有更高的特异性和灵敏度,适合法医学应用。     

成都地区汉族人群D2S441位点的遗传多态性研究

为研究 STR位点 D2S441的遗传多态性,为法医学应用提供基础数据,应用 PCR及 PAG电泳技术对 260名成都地区汉族无关个体进行了调查,共检出 9个等位基因及 26种基因型,首次获得汉族群体频率分布 ,其等位基因片段大小范围为 131～ 155bp。该位点基因型频率分布符合 Hardy－ Weinberg平衡。家系调查证实了等位基因的传递遵循孟德尔遗传规律。其个人识别能力（ Dp）、杂合度（ H）、多态性信息含量（ PIC）和非父排除率（ PE）分别为 0.9084、 0.7885、 0.7390和 0.5778,表明该位点在法医学个人识别及亲子鉴定中具有较高的实用价值。