猪肺炎霉形体Dnak-P97融合基因的表达及其产物的生物学活性

应用DNA重组技术,将猪肺炎霉形体黏附因子P97 C末端基因与猪肺炎霉形体伴侣蛋白Dnak C末端基因同时克隆到pET-30a表达载体上,构建了重组表达载体.将鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌BL21,用终浓度为1.0 mmol/L的IPTG诱导6 h.用BugBusterTM Ni-NTA His·Bind纯化试剂盒在自然条件下对目的蛋白进行了纯化;经Western-blotting和动物试验,证实,该蛋白具有良好的生物学活性.     

葡萄球菌GST-mTSST-1融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

以纯化的金黄色葡萄球菌无毒诱变超抗原GST-mTSST-1融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,初步建立了检测血清特异性GST-mTSST-1抗体的间接ELISA方法,监测了小鼠血清中特异性GST-mTSST-1抗体水平的动态变化规律。方阵试验确定的GST-mTSST-1抗原的最适包被浓度为5.0μg/mL,血清最佳稀释倍数为1∶100,ELISA阳性反应的临界值为D490 nm≥0.219,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较高的敏感性、特异性和较好的重复性,适用于检测特异性GST-mTSST-1血清抗体。     

胸膜肺炎放线杆菌apx I A基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apx I A基因片段,分别构建了大肠杆菌表达栽体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A.对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白.证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.     

美国法典1404(a)与非方便法院原则辨析

由于美国法典28卷1404（a）条款的立法规定在功能与措辞上均非常类似普通法上的非方便法院原则,因此很多学者误以为该立法规定与非方便法院原则之间并不存在实质性的差异。然而,这一看法并不正确。事实上,1404（a）条款立法在法律效果、证明标准以及具体适用方面均与非方便法院原则存在显著的区别。     

稳定表达马红球菌VapA蛋白细胞系的建立及其对巨噬细胞自噬的影响

通过构建稳定表达VapA蛋白的J774A.1巨噬细胞系,探究马红球菌VapA蛋白对巨噬细胞自噬的影响.构建vapA基因的重组慢病毒载体pCDH-CMV-MCS-EF1-Puro-vapA,将其转染J774A.1细胞,经过嘌呤霉素筛选重组细胞,利用RT-PCR、Western-blot和免疫荧光鉴定重组细胞系中VapA蛋...     

生产、销售伪劣产品罪中既、未遂的认定

[案情]2009年5月，A乳业公司经理苏某与B乳业公司经理赵某商议．将私藏在A公司的被客户退回的23．425吨奶粉运至B公司．换上B公司的包装、打上伪造的生产日期和批号，销售金额为28．11万元。经检测该批奶粉三聚氰胺含量超标。2009年11月，赵某经无业人员郭晓利介绍从个体户田满处收购三聚氰胺含量超标的无标识奶粉8吨，将其中2吨奶粉做回化处理．苏某在明知该批奶粉不合格的情况下，将剩余奶粉重新更换包装．     

不尽狗血滚滚来

"明胶门"事件的典型性,不在于情节之惊心或离奇,而在于它是全部环节的狗血性。"明胶门"刚浮现,查处过程就出现了狗血剧情。央视播出《每周质量报告》,涉事企业之一河北阜城县学洋明胶蛋白厂就发生大火,执法调查部门尚未进入,消防队就不得不出动。报道说,"火势持续了1个小时左右被扑灭"。县政府证实,该厂经理为隐匿销毁证据实施放...     

中国股市泡沫十大指征——股市的昨天与今天

正如人们所说,中国确实有许多例外,但中国不能所有的事情都例外。A股到底有多少泡沫?股市的泡沫多少才会崩盘?在对未来难以判断的情况下,不妨“以史为鉴”,看看过去,看看昨天。     

重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白的分子克隆

目的构建重组pET28a-EDA-EDB质粒,制备重组纤维连接蛋白EDA-EDB融合蛋白。方法采用基因重组技术,将EDA、EDB基因片段连接,再将该重组基因插入pET28a表达载体,表达重组融合EDA-EDB蛋白后,利用6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化,免疫印迹法检测。结果成功连接EDA、EDB基因片段,重组pET28a-EDA-EDB质粒;在大肠杆菌BL21(DE3)中高度表达重组蛋白,获得较纯的重组蛋白,免疫印迹法证实为FN的组分。结论EDA-EDB重组蛋白能采用pET系统在大肠杆菌中表达,并可通过6×His/Ni-NTA纯化系统进行纯化而获得免疫原。     

鸡血清蛋黄肝中维生素A和维生素E含量的荧光测定法探讨

用改良荧光法对鸡血清、蛋黄和肝中的维生素A和维生素E进行了检测.通过测定维生素A和维生素E的线性范围、灵敏度、精密度、回收率及不同浓度的维生素A对维生素E测定结果的影响等,证明用这一方法同步检测动物血清、蛋黄中的维生素A和维生素E,具有成本低廉、操作简便、结果可靠、易于推广等优点.同时证实了荧光测定中高浓度维生素A对维生素E的严重干扰现象.