伪狂犬病病毒上海株gE基因克隆及其含GFP基因质粒载体的构建

根据已发表的伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列设计1对引物,用PCR法扩增了PRV上海株(PRV-SH)的gE基因,并克隆入pUC18中.利用gE基因中限制性酶切位点,把绿色荧光蛋白(GFP)的基因表达盒插入gE基因中,构建了含GFP的载体pUCgE-GFP.     

从应急补水看澜湄合作机制下的跨境水资源合作

水资源合作是澜沧江—湄公河合作机制的五大优先领域之一,也是保护中国水资源开发权利,把握中南半岛地区关系发展主动权,重构水资源合作新格局及实施河海战略的关键一步。2016年3月,在中国牺牲自身利益援助下湄公河国家补水后,仍受到部分国家与国际舆论的诟病。本文从补水事件与国际舆情切入,分析域内外各利益体的意图、行为模式与地区内缺少有效水资源合作机制的现象,并探讨在澜湄合作机制下建立水资源合作机制的紧迫性与必要性,最后提出中国在建设水资源合作机制过程中,要从理念、内涵、机制、国际合作、舆论宣传与互信建设等方面着手,打造新型水合作复合模式。     

国际政治复合系统论：一种分析方法

系统是人类思考问题的基本方法。在国际政治中,学界对国际政治系统进行了较为深入的研究,比如新现实主义理论就蕴含了系统的思考。不过单纯的系统决定论有一定的局限,确切地说,国际政治由多个复合系统所构成,行为体的多元、战略构成多线性、实践要素多重构成以及不同动力的相互作用都充分说明了这一点。正是基于国际政治系统的复合属性,各个行为体形成了不同的对外战略路径依赖,行为体对路径依赖的调适空间与时间也由国际政治复合系统决定。准确认识国际政治复合系统的意义显而易见,不仅可以准确把握行为体与其他行为体的关系,也可以为提出较为准确的对外政策决策提供一定的借鉴意义,尤其是在把握国家关系的战略调适方面。同时,国际政治复合系统的变迁历史也充分说明生产力的先进性始终是国际政治博弈中的一般性要素。     

猴痘病毒荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种快速诊断猴痘病毒（MPXV）的检测方法,根据2022年公布的MPXV的靶基因片段F3L(462 bp,GenBank登录号ON563414)保守区域,设计了1对特异性的引物和1条探针,建立了猴痘病毒荧光定量PCR检测方法。结果显示,本方法仅能有效检测MPXV,与天花病毒、牛痘病毒、痘苗病毒及鼠痘病毒均无交叉反应;对重组质粒标准品的最低检测限为36.5 copies/μL;组内与组间的重复试验变异系数均小于2%;该方法与中国计量科学研究院使用的绝对定量数字PCR方法检测F3L假病毒颗粒的结果一致性达100%。由此表明,本研究中建立的检测方法特异性强、敏感性高、重复性和实用性好,可以用于猴痘病毒的快速鉴别诊断,为口岸进境动物和入境人员的筛查提供了有效的技术手段。     

驼源性核酸多重快速荧光定量PCR检测方法的建立及检测试剂盒的研制

为准确鉴定骆驼肉乳制品,减少市场中用低价肉乳制品冒充高价肉乳制品的欺诈违法行为,保障食品安全,维护公平合法贸易,建立多重实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）快速高通量检测骆驼核酸的方法。利用多重实时荧光定量PCR法构建肉乳制品中骆驼成分检测方法,设计了哺乳动物18S rRNA基因与骆驼cytB基因的引物探针,对市面上常见肉乳制品进行检测。结果显示,本研究中针对肉乳制品的核酸提取方法不受食品添加剂影响,提取过程简便快捷高效,可于20 min之内完成提取;建立的多重实时荧光定量PCR法具有良好的特异性和灵敏度,在牛奶粉、羊奶粉、驼奶粉、骆驼肉制品、鲜猪肉和鲜骆驼肉6种样本中,成功特异地检测出骆驼成分,且在驼奶粉质量分数为30%、20%、10%、8%、5%、3%、1%和0.5%的条件下进行检测,全部成功检测出,准确度达100%。结果表明,建立的骆驼源性成分多重快速实时荧光定量PCR法可有效鉴别肉乳制品中的骆驼源性基因。     

伪结核棒状杆菌可视化LAMP现场检测方法的建立

为建立伪结核棒状杆菌可视化LAMP检测方法,根据伪结核棒状杆菌16S rRNA基因的特异性保守核苷酸序列设计2对引物,通过反应体系和反应条件的优化,建立了伪结核棒状杆菌可视化LAMP现场检测方法,并评价该方法的特异性和敏感性。结果显示,本实验所建立LAMP方法的最佳反应条件为62℃1 h。利用该方法检测大肠杆菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌等山羊和绵羊常见的15种细菌的DNA样品,结果显示仅伪结核棒状杆菌检测为阳性,其他细菌检测为阴性。该方法对阳性质粒标准品pMD19-Cory的最低检出浓度为4.7 copies/μL。应用建立的LAMP方法和普通PCR方法对128份山羊皮下脓肿样品进行检测,结果显示LAMP方法和普通PCR方法的阳性率分别为21.1%(27/128)和20.3%(26/128),2种检测方法的总符合率为99.2%(127/128)。结果表明,本研究建立的可视化LAMP检测方法具有特异性强、敏感性高、快速的优点,为山羊和绵羊伪结核棒状杆菌感染的可视化现场快速诊断提供可行方法。     

猫传染性腹膜炎病毒实时荧光定量PCR方法的建立与应用

为建立一种高效准确检测猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的实时荧光定量PCR方法,以FIPV N基因为靶基因设计特异性探针和引物,构建质粒标准品。通过优化反应条件,建立real-time PCR方法,并进行临床检测。经方法优化,所建立方法的标准曲线为y=-3.137x+42.243,R²值为0.999,扩增效率E为108.0%。该方法与猫瘟病毒(FPV)、猫疱疹病毒(FHV)和猫杯状病毒(FCV)无交叉反应,特异性良好;检测最低拷贝数为9.250 copies/μL,比常规PCR方法高出100倍;组内、组间变异系数均小于5.0%,重复性好。采用建立的方法和EvaGreen real-time PCR方法对39份临床样品进行检测,结果,检出阳性样品数分别为24和22,经Kappa检验,两者高度一致。上述结果表明,本研究成功建立了高效、敏感、特异的实时荧光定量PCR方法,可用于FIPV的临床病例检测。     

重组酶聚合酶扩增技术结合胶体金试纸条检测新城疫病毒方法的建立及应用

本研究旨在根据鸡新城疫病毒（Newcastle disease virus）F基因序列,利用Oligo 7设计RPA引物以及nfo探针,建立快速检测新城疫病毒的结合胶体金试纸条的RPA检测方法。在试验中,对探针浓度、引物浓度、反应温度、反应时间进行了优化;并将检测结果与荧光RT-PCR商品化试剂盒的检测结果进行了比较。结果显示,本方法采用50μL体系,37℃20 min即可对新城疫病毒F基因进行快速检测。该方法灵敏度高,特异性强,重复性好,检测结果与荧光RT-PCR商品化检测试剂盒检测结果一致,为养殖场检测新城疫病毒提供了一种简便可靠的检测方法。     

荧光钙血迹蓝钠试剂增强潜在多介质混合鞋印的应用

目的研究荧光钙血迹蓝钠试剂增强潜在灰尘水渍混合鞋印、灰尘尿渍混合鞋印、灰尘血渍混合鞋印的普适性。方法采用高压微雾雾化法,雾化增强常见的8种地板上的20%w/w灰尘含量的灰尘水渍、灰尘尿渍和灰尘血渍混合鞋印,并与平面扫描提取技术相比较。结果增强后的鞋印花纹清晰,呈亮蓝色,提取效果明显优于自然光下拍照提取,略优于平面扫描提取技术。结论荧光钙血迹蓝钠试剂能够有效增强潜在多介质混合鞋印,是一种便捷高效的潜在混合鞋印增强提取方法。     

简论生态文明的本体论依据

建设生态文明必须以"自然——人——社会"这个复合生态系统为载体,同时调整人与人的关系、人与自然的关系。从本体论的角度看,这样做的根本理由是:人首先是自然存在物,自然界的优先地位并不会因人同时需要靠实践生存而改变;人与自然关系恶化是由对这个复合生态系统的认识不正确、生产力还不完善、生产实践还不够合理等原因造成的;只有从维护这个复合生态系统正常运转出发,发展生态生产力,使生产实践更加合理化,才能建设生态文明。