502胶熏显手印的Ardrox荧光染色技术研究

目的 探究在常见塑料材质、玻璃等非渗透性客体上,502胶熏显后用Ardrox荧光液染色显现潜在手印方法。方法 收集12种常见塑料材质、玻璃等非渗透性客体,用Ardrox荧光液染色与罗丹明6G、BBD、龙胆紫进行显现潜在手印对比实验。同时测试Ardrox荧光液染色最佳遗留时间,采取控制变量,改变单一变量,选取显现效果最好的锡箔纸作为实验检材,分别在遗留1、3、5、7、15 d后进行显现。结果 在大多数常见塑料材质、玻璃等非渗透客体上,502胶-Ardrox荧光液显现效果优于罗丹明6G、BBD和龙胆紫,在锡箔纸、黑塑料袋、易拉罐上效果最好;在浅色客体或深色客体上,Ardrox荧光液均能取得很好的显现效果,光盘上的显现效果不佳。最佳遗留时间测试结果表明,Ardrox荧光液显现指纹,遗留15 d以内的样本都可以很清晰的显现出来,超过15 d,显现效果明显减弱。结论 502胶-Ardrox荧光液显现法显现率高、荧光强。     

猪博卡病毒5型SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法的建立

根据猪博卡病毒5型NS1基因序列设计引物,建立了基于SYBR GreenⅠ的用以检测猪博卡病毒5型的实时荧光定量PCR。用该方法检测猪博卡病毒5型NS1基因,在3.64×102~3.64×107 copies/μL范围内有很好的线性关系。扩增产物的熔解曲线仅出现单一特异峰,无引物二聚体,Tm值为(83.12±0.12)℃,对猪圆环病毒(PCV1和PCV2)、猪细小病毒(PPV)、猪输血传播病毒(TTV1和TTV2)的核酸均无阳性信号扩增,可重复性好,组内变异系数为0.35%~1.24%,组间变异系数为0.43%~1.46%。此方法的建立为定量分析猪博卡病毒5型感染猪的感染程度和靶器官提供了精确检测手段。     

LHR在牦牛肾和卵巢中表达情况的研究

为了探讨牦牛肾中黄体生成素受体(LHR)的表达情况,分析肾中LHR与卵巢中LHR表达的相似性,选取青海省健康的3头2岁龄雌性牦牛,根据黄牛LHR基因序列5′端和3′端的保守性设计特异性引物,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测牦牛肾和卵巢组织中LHR基因的表达量,并运用免疫组织化学法对LHR蛋白在牦牛肾和卵巢组织中表达情况进行定位研究。RT-qPCR结果显示,牦牛肾组织中LHR mRNA的相对表达量是卵巢的79.75倍。免疫组织化学结果显示,LHR在牦牛肾组织的近曲小管和远曲小管呈阳性反应,在卵巢组织中卵泡颗粒层呈明显的阳性反应;LHR在牦牛肾和卵巢中的表达量之间差异极显著(P0.01)。结果表明,牦牛的肾组织与卵巢组织一样,均具有表达LHR的特性,提示肾可通过调节LHR参与牦牛的繁殖性能。     

干扰素压力下传代的猪繁殖与呼吸综合征病毒对ISG56转录的影响

为探究猪干扰素-β(swIFN-β)加速猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异是否对病毒致病机制存在影响,将PRRSV GD07在干扰素压力下传代至第70代,同时构建SYBR Green实时荧光定量PCR方法,研究干扰素压力下传代毒株(PRRSV GDβfn)、自然条件下传代毒株(PRRSV GDfn)和原代毒株(PRRSV GDf1)等对干扰素诱导基因56(IFN-stimulated gene-56,ISG-56)转录的影响。结果显示,PRRSV能够抑制由干扰素诱导产生的ISG56的转录,其抑制能力大小依次为PRRSV GDβf20PRRSV GDf20、PRRSV GDβf50PRRSV GDf50、PRRSV GDβf70PRRSV GDf70;不同代次之间PRRSV GDf1PRRSV GDf20/PRRSV GDβf20PRRSV GDf50/PRRSV GDβf50PRRSV GDf70/PRRSV GDβf70。结果说明,构建的荧光定量方法能够检测出不同PRRSV毒株在抑制ISG56转录上的差异;随着在细胞上传代次数的增加,PRRSV GDβfn和PRRSV GDfn对ISG-56转录的抑制能力均逐渐减弱;在同一代次中,PRRSV GDβfn对ISG-56转录的抑制能力要强于PRRSV GDfn。     

荧光试剂对502胶熏显过的汗潜指纹的染色效果比较

如何准确地发现、提取犯罪现场的潜在手印已成为我们利用指纹技术破获案件的关键。本文将阐述应用荧光试剂染色经"502胶"熏显后的各种客体表面的汗潜指纹的原理、方法、效果比较以及利用荧光磁性粉末显现不同客体上的汗潜指纹的操作方法、基本原理、效果比较及拍照固定的方法。实践证明荧光试剂和荧光磁性粉末在对各种客体上汗潜指纹进行染色和显现时方法简单、可靠、效果比对明显。不受手印遗留时间和遗留条件的限制,且性价比高,具有很好的推广前景。     

利用反射荧光显微镜判定文件上的朱墨先后顺序

本文根据实验结果,得出使用反射荧光显微镜（用BV激光法）,可以正确判定书写材料上朱墨先后顺序,而且对检材没有任何损坏的结论。     

猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法,采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金,选择15 nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体,对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化,组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测,同时用直接荧光抗体试验和RT-PCR做平行试验。结果显示,用试纸条检测猪瘟病毒,10 min左右即可显示结果,试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT-PCR的阳性检出率依次为36.36%(4/11)、45.45%(5/11)和72.72%(8/11)。表明,用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便,需时短,可以用于猪瘟的流行病学调查。     

兔皮肤钝器伤IL-1β、COX-2和MCP-1 mRNA表达与法医学应用

目的应用荧光定量PCR技术检测兔皮肤钝器伤后IL-1β、COX-2和MCP-1mRNA的时序性表达规律,分析其与损伤时间的关系。方法分别在兔耳皮肤钝器伤后<0.5h,0.5h,1h,2h,3h,4h,5h,6h,8h,12h,24h,1d,3d,7d和死后10min,0.5h,1h取材,一步法提取组织总RNA,逆转录合成cDNA第一条链,荧光定量PCR检测IL-1β、COX-2和MCP-1mRNA逆转录合成第一条cDNA链的拷贝数,作统计学分析。结果IL-1βmRNA在钝器伤后<0.5h表达显著增强(P<0.001),0.5h达到峰值,至第2d降至基本水平;COX-2mRNA于创伤后0.5h表达显著增强(P<0.05)并持续强表达至24h开始下降,第2d降至正常;MCP-1 mRNA在钝器伤后于1h表达显著增强(P<0.05),于3h出现表达峰,至第3d降至正常;3个指标在死后各时间组与正常对照无明显表达差异。结论检测皮肤IL-1β、COX-2和MCP-1mRNA可对早期损伤时间的推断提供帮助,并且这三个指标都可以鉴别生前伤和死后伤。     

牛疱疹病毒Ⅰ型二重LUX荧光PCR鉴别检测方法的建立

采用LUX新型荧光PCR技术原理,建立了快速检测牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)以及鉴别野毒感染和基因缺失疫苗免疫动物的二重实时荧光PCR方法。结果显示,该方法对多株BHV-1病毒均呈典型gE、gC双基因阳性反应,对其他常见动物疱疹病毒以及健康牛基因组DNA等均呈阴性反应;对细胞增殖病毒液的gE、gC双基因鉴别的检测敏感性可达0.4~0.04 TCID50,比常规PCR方法高100倍以上;对带毒牛血清、抗凝全血、牛新鲜精液和冷冻精液基因鉴别的检测敏感性分别达0.04 TCID50、0.4 TCID500、.4 TCID50和4 TCID50。采用该方法从临床牛血样、鼻拭子样品中检出IBRV阳性样品,检测全程仅需约2 h。对单基因克隆质粒的检测进一步证实该方法能特异地鉴定gE、gC基因,检测灵敏度分别达90、30拷贝。结果表明,该方法可应用于临床快速诊断BHV-1病毒感染,鉴别BHV-1病毒感染与对应的基因缺失疫苗免疫动物。     

甲醛固定标本DNA提取及荧光标记STRs复合扩增

甲醛固定标本和石蜡包埋组织的病理切片是医院病理科和法医鉴定机构档案中重要的个人实物档案 ,是可靠的分子生物学研究材料的来源 ,同时也是医疗纠纷和一些刑事案件的重要证据。由于案情的需要 ,常需对甲醛固定标本和石蜡包埋组织及病理切片等进行个人识别和同一认定。但由于甲醛可使DNA发生降解 ,导致PCR反应的成功率降低。本文探索了应用TES、SDS、PK、尿素和DTT消化及酚 /氯仿提取DNA ,并用Chelex10 0溶解DNA ,应用灵敏度高的荧光标记STRs复合扩增 ,对甲醛固定标本和病理切片进行个人识别鉴定 ,取得了令人满意的结果。1　材…