基于TaqMan探针的猪圆环病毒1型实时荧光定量 PCR检测方法的建立

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒1型(PCV1)ORF2基因,构建了重组质粒pMD-ORF2并将其作为标准阳性模板.通过对反应条件进行优化,以定量的10倍系列稀释的质粒pMD-ORF2为标准品进行荧光定量PCR扩增,建立了检测PCV1的荧光定量PCR方法.结果显示,该方法的检测灵敏度可达1.0×101拷贝/μL;对起始浓度为1.0×107、1.0×106、1.0×105拷贝/μL标准品的最终实际测得值分别为1.001×107、0.869×106和0.988×105拷贝/μL,变异系数分别为4.758%、1.865%和3.836%.表明,此方法具有良好的准确性和重现性.     

小鹅瘟病毒荧光抗体的制备与应用

将小鹅瘟病毒 (GPV )分离毒xw株接种健康兔获得兔抗GPV超免疫血清 ,由此制备兔抗GPV荧光抗体。采用直接荧光抗体试验对人工感染雏鹅、鹅胚及自然病例进行了检测。结果表明 ,该方法可检出患病组织中的病毒抗原 ,且肠和肝的含毒量高于尿囊细胞。     

定量PCR技术在法医学中应用的研究

目的研究荧光定量PCR技术在法医学中的应用。方法应用Taqman技术对法医各种生物检材进行DNA定量。结果该定量PCR技术对各种法医生物检材进行了准确定量,并判断检材中是否存在抑制物,从而指导了后续STR的检验。结论定量PCR技术是法医DNA检验中一项不可缺少的辅助技术。     

指纹兰光观察照相仪的应用及改进

兰光灯主要用于现场勘查搜索及荧光粉显现指纹的搜索定位 ,照相仪主要用于各种荧光指纹 (经荧光粉和荧光试剂处理 )的拍照固定 ,同时兼有放大观察的作用。两者相互配合 ,极大地方便了现场勘查中对潜在指纹的搜索、发现和记录。在多数情况下 ,兰光灯输出的兰光光谱已能满足常用的荧光粉和荧光试剂显现指纹所需的激发光谱 ,且在拍摄固定荧光指纹方面比多波段光源更方便快捷 ,无需三脚架或翻拍仪 ,无需暗室环境 ,照明均匀 ,亮度大 ,反差好 ,在现场即可完成荧光指纹的拍摄工作 ,也可观察拍摄更细小的具有荧光反映的斑痕、物质。1　兰光观察照相…     

24个Y-STR基因座荧光标记复合扩增体系的建立

目的构建包含24个Y-STR基因座的荧光标记复合扩增体系。方法选择DYS531、DYS630、DYS622、DYS552、DYS510、DYS449、DYS459a/b、DYS446、DYS443、DYS635、DYS587、DYS527a/b、DYS460、Y-GATA-A10、DYS520、DYS557、DYS522、DYS481、DYS570、DYS385a/b、DYS444 24个Y-STR基因座,构建荧光复合扩增体系。检测该体系的特异性、同一性、灵敏度、扩增均衡性、抗干扰性和准确性,调查其在广东地区人群的基因多样性。结果建立的复合扩增体系在检测的非人类及女性样本中未发现谱带,同一个体不同组织检测结果一致,0.1 ng以上标准品9948可检测获得完整分型结果。常见抑制物中体系内加入120~200μmol/L血红素、1.5~2.0 mmol/L钙离子时出现等位基因丢失,对靛蓝、腐殖酸、EDTA具有较强抗干扰性。通过146例无关个体与Yfiler系统平行检测比对,24 Y-STR检测体系分型准确。广东地区人群单倍型多样性(HD)为0.999 72,优于Yfiler系统(HD=0.998 58)。结论本研究建立的24个Y-STR基因座荧光标记复合扩增体系法医学应用前景广阔,可用于案件检验、亲权鉴定与Y-STR数据库建设。     

GAMarker基因分型专家系统的设计与实现

目的DNA基因分型软件是DNA检测技术体系不可缺少的一环,为拓展GA118系列遗传分析仪器的应用,须研制一套DNA基因分型专家系统,以满足法庭科学DNA检验鉴定工作的需要。方法基于已掌握的DNA片段定长和基因分型数据处理解决方法及相关核心算法,使用JAVA语言和MYSQL数据库,利用Maven进行项目管理,经对GA118系列、ABI系列数据文件解析和数据分析,研发了专家系统GAMarker。结果该系统实现了样本和数据呈现、样本分析要素质量评估、分析方法管理、分型结果展示和人工核查、电泳数据审查、生成分析报告、系统安全等功能,并可分析8色荧光数据。结论GAMarker可进行软件设定、数据分析与比对、图谱查看与编辑,是一套完整的DNA片段分析流程和直观的数据审核工具,可代替国外产品、有效支撑国产遗传分析仪相关系列型号的数据分析,能满足侦破案件、DNA数据库建设的需要。     

19个常染色体与4个Y染色体STR复合扩增体系的建立

目的建立19个常染色体STR及Amelogenin和4个Y染色体STR基因座复合扩增体系,并对其效能进行评估。方法用五色荧光标记20+4Y-STR基因座,建立同步扩增检测体系,用ABI 3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型;检测体系的灵敏度、均衡性、稳定性、特异性、同一性和稳定性,并观察混合、降解及微量检材的分型情况。结果采用本文体系,DNA模板量在0.05~1.00ng时,分型准确,均衡性、特异性好;混合、降解及微量检材分型正确。该19个常染色体STR基因座的累计个人识别率大于0.999 999 999,三联体累计非父排除率达0.999 999 985,Y-STR单倍型多态性为0.592。结论本文建立的复合扩增体系分型准确,稳定,在法医学案件检验及数据库建设等方面有良好的应用前景。     

SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR检测水泡性口炎病毒方法的建立

本研究旨在建立一种快速、灵敏的用于诊断水泡性口炎的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量RT-PCR检测方法.通过RT-PCR分别扩增印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)和新泽西型水泡性口炎病毒(VSV-NJ)的G基因,然后将其连接到克隆载体pMD19-T上,构建质粒标准品pMD-VSV-IN-G和pMD-VSV-N...     

23个STR基因座荧光复合扩增体系的法医学应用评估

目的评估新建立的23个STR复合扩增体系EX23的法医学应用价值。方法使用磁珠法提取样本DNA,应用23个STR复合扩增体系进行扩增,ABI3130XL遗传分析仪对扩增产物进行电泳,GeneMapperID 3.2软件进行基因分型,对法医学应用参数、灵敏度、种属、脱落细胞检材及降级检材分型效果进行观察,并与Sinofiler试剂盒比较。结果 DNA模板量在0.05~1.00ng时,各基因座分型结果清晰准确,均衡性好、特异性强。应用该复合扩增体系检验混合样本、降解检材及脱落细胞检材,均能获得正确的分型结果。统计结果显示该23个STR基因座累计个人识别（TDP）率达0.999999999,三联体累计非父排除率（CPE）达0.999999997。结论新建立的23个STR复合扩增体系分型效果良好,在广东地区汉族人群中具有高度多态性,可满足日常法医鉴定的需要。     

渗透性客体上潜在手印的热显现方法研究

热显法作为一种快速简便、无需化学试剂处理渗透性客体的潜在手印显现新技术,在物证检验领域具有重要的应用价值。实验尝试采用生活中常见的直发器电夹板处理渗透性客体上的潜在手印,获取不同阶段的荧光手印、紫外手印及可见手印等多种显现效果,同时对其显现机理及影响因素进行研究,以供公安实战单位参考。