猪脑心肌炎病毒SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立

针对猪脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因序列设计并合成了l对引物,以构建的含有该引物扩增序列的重组质粒作为阳性标准品,建立了检测EMCV核酸的SYBR Green I real-time PCR方法.检测结果显示,该方法线性关系好,标准曲线的相关系数达到0.991;对初始模板的检出下限为1×101copies/μL,比常规PCR方法高100倍;与其他猪源病毒,如口蹄疫病毒(FMDV)、猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)均不发生交叉反应;组内与组间的变异系数均小于3%.应用建立的方法检测了17份临床可疑病例的心、脑组织样本,结果1份为阳性.表明,建立的real-time PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可以用于EMCV的病原检测及定量分析.     

猫细小病毒和猫疱疹病毒1型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立同时检测猫细小病毒（FPV）和猫疱疹病毒1型（FHV-1）的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数（R2）均为0.999,具有良好的线性关系。结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2%。证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好。用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65%和16.85%,二者混感阳性率为15.73%,与临床确诊结果一致。上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等。     

非洲猪瘟病毒荧光量子点检测试纸条的研制

根据非洲猪瘟病毒（ASFV）VP72蛋白的氨基酸序列筛选合成多肽,并与载体蛋白BSA进行偶联,将以此得到的多肽作为抗原免疫小鼠,用来制备鼠源抗ASFV VP72蛋白的单克隆抗体。将上述方法制备的针对ASFV VP72蛋白的单抗作为荧光量子点标记的抗体,以与这种标记单抗互相配对的另一单抗包被检测线（T线）,采用山羊抗鼠二抗Ig G包被质控线（C线）,建立了一种简便、快速、准确的用于ASFV抗原检测的荧光量子点免疫层析试纸条。结果表明,制备的试纸条对于猪瘟等8种猪常见疫病免疫用灭活疫苗检测时无交叉反应;可检测到8μg/m L的VP72重组蛋白;与商品化的ASFV荧光定量PCR检测试剂盒进行比对检测,其对临床样品检测的阳性符合率为82.1%(23/28),阴性符合率为93.8%(75/80)。该试纸条特异性好、灵敏度高以及稳定性好,为ASFV的现场快速初步诊断提供了一种技术支持。     

猪凸隆病毒猪嵴病毒猪捷申病毒猪轮状病毒多重荧光RT-PCR方法的建立与初步应用

为建立一种同时检测猪凸隆病毒、猪嵴病毒、猪捷申病毒和猪轮状病毒的高特异性、高灵敏性的检测方法,根据这4种病毒的保守基因序列分别合成相应的特异性引物及TaqMan探针,采用One-Step法进行反应体系的优化,建立多重荧光RT-PCR方法,评估该方法的特异性、敏感性、重复性,并用于本地猪场腹泻样品中上述4种病毒的流行病学调查。结果显示：该方法特异性好,可特异性地检测上述4种病毒的单一模板及混合模板,其他对照株均无扩增信号;灵敏度高,上述4种病毒的最低检出限均为10¹ copies/μL;重复性好,批内及批间重复试验变异系数均小于3%。所建立方法还具有高通量、低污染和操作简便的优点,3 h内即完成全市猪场265份腹泻样品的检测,大大提高了检测效率。流行病学调查显示,厦门市养猪场猪嵴病毒、猪捷申病毒、猪轮状病毒和猪凸隆病毒这4种病毒均具有较高的检出率,阳性率依次为67.92%、65.28%、36.60%和27.55%。该研究将为猪腹泻病鉴别诊断及防控提供重要的技术支持。     

Bcl-2蛋白在外伤性癫痫病灶中的表达

目的观察Bcl-2蛋白在外伤性癫痫病灶中的表达变化,探讨其作用机制。方法收集外伤性癫痫、非外性癫痫患者及交通事故死亡者脑皮质各15例,采用免疫组织化学和荧光免疫组织化学技术,观察各实验组Bcl-2蛋白表达水平,测定阳性表达的灰度值,数据采用SPSS 12.0软件进行统计分析。结果外伤性及非外伤性癫痫组Bcl-2蛋白表达水平均高于交通事故死亡组（P〈0.05）;而非外伤性癫痫组表达明显高于外伤性癫痫组,差异亦具有显著统计学意义（P〈0.05）。结论 Bcl-2蛋白能抑制神经元凋亡,对外伤性癫痫的发病过程具有抑制作用。     

胶带粘面手印荧光显现剂的研发与应用

目的根据胶带粘面上潜在手印的特点,利用染料和潜手印的理化性质,研究开发胶带粘面手印荧光显现剂。方法在各种胶带粘面上显现潜在手印,并与常规的碳素墨水染色法进行比较。结果在长波紫外线照射下手印呈黄色明亮荧光,手印纹线清晰、连贯,基本不受手印遗留时间、客体表面颜色和性质的影响。结论胶带粘面上的汗潜手印和血潜手印用荧光显现剂显现效果优于碳素墨水染色法,在实际案件的侦破中有较好的应用前景。     

印第安纳型水泡性口炎病毒实时荧光RT-LAMP检测方法的建立

利用ESE-Quant tube scanner监测平台,建立了一种基于实时荧光RT-LAMP技术的印第安纳型水泡性口炎病毒(VSV-IN)快速检测方法.根据VSV-IN的G基因序列,设计6条特异性引物,在63℃条件下,进行核酸扩增,反应时间为45 min.在扩增前加入SYBR Green I染料作为反应的指示剂,以S...     

紫外-可见及荧光光谱法鉴别印泥

鉴别印章真伪或印泥、印油材料是否相同,是侦破和证实经济犯罪的重要技术手段。鉴别印章所用印泥或印油材料是否相同的方法很多,但多为有损检验。本文采用紫外-可见反射光谱及荧光光谱分析法,利用导数光谱,对10个不同品牌的印泥所形成的12个印章样品进行了直接测试,根据被测样品的峰位和半峰宽度,区分鉴别不同牌号的印泥,取得了较好的结果。     

印章防伪技术探析

印章防伪技术包括印痕防伪和印泥印油防伪,其中印泥印油防伪技术是印章防伪技术很重要的一个方面。目前在国内印泥印油防伪只限于荧光加密防伪,已不能从根本上达到防伪的目的。运用多色反光材料、有机物质和印泥,进行精工合成的新型防伪印泥以良好的性能保持印泥的本质不变,又能在印文中显现出不同颜色和不同大小的反光点,可以判断文件制成时间,有很好的防伪效果。     

指纹荧光显现剂DAFO的合成及应用

为了能使多波段光源技术得到广泛应用,笔者使用1,10-菲啰啉为原料,改用碱性条件下,以1,4-二氧六环和水为混合溶剂,高锰酸钾(KMnO4)为氧化剂,合成了对汗液指纹能产生良好荧光的4,5-二氮杂芴-9-酮,合成产率达到51%;优于文献报道的收率仅有10~15%。其荧光效果优于1,8-二氮杂芴酮(DFO),在汗液指纹荧光显现中可推广应用。