8个miniSTR基因座复合扩增系统的建立及其应用

目的建立扩增片段〈200bp,包含CSF1PO,TH01,TPOX,D3S1358,FGA,D7S820,D21S11,PentaD 8个miniSTR基因座的复合扩增体系。方法采用四色荧光染料标记引物,PCR扩增后,应用ABI 3130遗传分析仪进行片段长度分析,对280例无关个体,137例疑难生物物证进行了检验。结果280例无关个体的调查结果为除1例在CSF1PO基因座外,其余样本的各基因座分型结果与AmpFLSTR Identifiler试剂盒完全相同。与应用ID试剂盒比较,明显提高了137例疑难生物物证的检出率。结论该检测技术方法稳定,结果准确,重复性好,且其判型结果可进行DNA数据库查询、比对,为刑事案件及灾难事故中疑难生物物证的检验提供了一条新的途径。     

完善手印显现工作的几点思考

手印显现是现场勘查的重要组成部分,而手印显现中每一步操作都具有一定的风险性,都将直接影响到手印的证据价值。因此,在手印显现过程中,要注重每一种显现方法的互补性、针对性,全面研究制约手印显现的各种因素,合理地使用各种光源,进一步提高现场手印显现的成功率。     

用多波段光源配合CCD摄像机拍摄被碳素墨水掩盖的文字

被碳素墨水涂盖字迹的显现是公安技术工作中的一个难题。由于涂盖物质中含有的碳黑对红外线的强烈吸收 ,一般认为红外照相的方法在处理此类问题时难以奏效。用高强度的多波段光源配合高灵敏度的 CCD摄像机来记录微弱的红外线荧光图像 ,从而显示被掩盖字迹。实验结果证明该方法显现效果良好。     

中药熏蒸联合针刺和透明质酸钠关节腔注射治疗骨关节炎30例

目的 观察中西医结合疗法治疗骨关节炎的疗效。方法 将60例骨关节炎患者随机分为对照组（透明质酸钠关节腔注射）和试验组（透明质酸钠关节腔注射联合中药熏蒸和针刺治疗）,每组30例。治疗5周后,采用视觉模拟评分法（visual analogue scale, VAS）测定关节疼痛程度,采用美国纽约特种外科医院膝关节评分（Hospital for Special Surgery Knee Score,HSS）评价关节功能。结果 试验组临床疗效优于对照组,但差异无统计学意义（P>0.05）;治疗后两组VAS评分均显著下降（P<0.05）,HSS评分均显著升高（P<0.05）,试验组VAS评分下降值和HSS评分升高值显著大于对照组（P＜0.05）。结论 在透明质酸钠关节腔注射治疗基础上,联合中药熏蒸和针刺治疗有利于改善关节功能,减轻疼痛。     

内蒙古绵羊梅迪-维斯纳病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立一种检测内蒙古地区绵羊梅迪-维斯纳病毒(MW)的TaqMan荧光定量PCR方法,根据高度保守的gag基因序列设计特异性引物和探针,通过对反应条件和反应体系的优化,建立了快速检测MW的TaqMan实时荧光定量PCR方法.结果显示,扩增相关系数为0.999,对重组标准质粒的最低检测量为1.0×100 copies/μ...     

蓝舌病病毒NS3蛋白的截短表达及其多克隆抗体制备

首先利用RT-PCR技术扩增获得了蓝舌病病毒1型(BTV1)NS3基因的截短片段,将其克隆至表达载体pET-30a中,构建重组表达质粒pET-NS3,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后用IPTG诱导表达,可溶性分析显示,重组NS3蛋白在大肠杆菌中以包涵体形式表达.纯化重组表达的NS3蛋白,免疫新西兰白兔制备抗N...     

猪德尔塔冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

针对猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的N基因建立检测PDCoV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法,并验证了其特异性、敏感性和重复性等。结果显示,本方法特异性高,与猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒、猪肠病毒、伪狂犬病病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪星状病毒等病原无交叉反应。本方法C_t值与标准模板浓度在10^8.5～10^3.5PFU/mL范围内呈良好的线性关系,相关系数(R²)为0.994 9,直线方程为y=-3.594 9x+41.006,最低检测限为10^2.50PFU/mL。运用该方法检测PDCoV感染不同来源细胞系的病毒载量,发现的PDCoV感染宿主谱广,能感染不同来源的细胞,且在LLC-PK细胞上的复制能力最强。本研究建立的方法为PDCoV的防控提供了技术支持。     

鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的三重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立

为建立一种鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的 TaqMan 探针荧光定量 PCR 检测方法,根据非洲猪瘟病毒(ASFV)的 B646L、EP402R、MGF360- 13L 基因序列,分别设计 PCR 引物和 TaqMan 探针,绘制标准曲线,并进行重复性试验、特异性试验、敏感性试验与临床样品检测,建立三重 TaqMan 探针荧光定量PCR 检测方法。 结果显示,以 B646L、EP402R 和 MGF360- 13L 重组质粒为标准品绘制的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数(R²)分别为 0.995、0.997 和 0.997;建立的方法与多种猪常见病原不存在交叉反应,特异性良好;对 B646L、MGF 360- 13L 与 EP402R 基因的检测下限均为 10 copies/ μL,变异系数均<2%,该方法灵敏度高;当临床样品稀释至 10^{- 5}时,即滴度为 10^2.5TCID₅₀/ m L 时仍能检测到病毒粒子,具有较高的临床使用价值。 本研究建立了一种高效、灵敏、特异的 ASF...     

多花黄精多糖PcUER1基因的克隆与表达分析

目的探究安徽生产的多花黄精多糖3,5-异构酶/4-还原酶基因(PcUER1)的结构基因信息及其在多花黄精中单糖鼠李糖化合物生源路径中的表达调控机制。方法以多花黄精为研究对象,基于其转录组学数据,克隆PcUER1基因并针对该cDNA序列展开生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR方法检测多花黄精不同组织中PcUER1基因的表达水平。结果多花黄精多糖PcUER1基因的cDNA序列长度为900 bp,编码299个氨基酸;序列分析表明多花黄精与百合科虎眼万年青的相似度达到92.03%;实时荧光定量PCR检测结果显示,PcUER1基因在多花黄精的根、须根、茎、叶中表达水平逐渐降低,茎和叶中PcUER1基因表达水平的差异无统计学意义。结论多花黄精多糖PcUER1基因的活性位点有辅因子结合基序和催化四分体基序,其蛋白表达产物理化性质稳定。     

国产24通道法医遗传分析仪的研制

采用单波长固态长寿光纤分束激光器作为激发光源,基于激光诱导荧光检测和STR复合扩增技术,研制了首台国产24通道法医遗传分析仪,型号GA118-24B。该仪器满足24通道毛细管阵列空间校正功能需求,成功创建了DS-33和DS-36光谱校正文件,对Allelic Ladder、内标等标准品以及阳性对照9947A的复合扩增产物进行电泳检测,检测结果准确无误,分辨力达到1bp,可用于法庭科学的案件检测和数据库建设。