牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。     

美洲型与欧洲型PRRSV多重TaqMan荧光定量RT-PCR鉴别检测方法的建立及应用

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)美洲型经典毒株、高致病性变异毒株以及欧洲型毒株基因组的序列差异,设计2对特异性引物和3条TaqMan探针,经过反应条件的优化,建立了能同时检测并区分PRRSV美洲型经典毒株、变异毒株以及欧洲型毒株的多重荧光定量RT-PCR方法。该方法线性关系好,标准曲线的相关系数均达到0.999以上;特异性强,只有PRRSV出现阳性反应,而与口蹄疫病毒、猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型均无交叉反应;敏感性高,经典毒株、变异毒株、欧洲型毒株的检出下限分别为1.13、1.37、1.39copies/μL,均比普通RT-PCR敏感100倍;重复性好,组内及组间变异系数均小于1.5%。应用所建立的方法对采集的282份临床病料进行检测,结果 PRRSV阳性101份,其中95份为变异毒株、6份为经典毒株、4份为变异毒株和经典毒株混合感染,未检测到欧洲型毒株。结果表明,本研究建立的多重TaqMan荧光定量RT-PCR方法可为PRRSV的快速鉴别诊断及流行病学调查提供有效的技术手段。     

牦牛FGF18基因的克隆及其在子宫中表达水平的检测

为研究牦牛FGF18(fibroblast growth factor 18)基因的序列特性及其在子宫中的表达水平,根据黄牛FGF18基因序列5′端和3′端的保守性设计特异性引物,RT-PCR扩增之后通过基因克隆得到牦牛FGF18基因,利用生物学软件对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测了FGF18基因在妊娠早期和非妊娠期牦牛子宫中的表达情况。结果显示,牦牛FGF18基因序列编码区长624bp,编码207个氨基酸,其中赖氨酸含量最高,约为9.7%;同源性分析和系统进化树显示,它与黄牛FGF18基因的同源性最高,为99.7%,表明FGF18基因在进化中具有高度保守性;编码产物的主要功能是胁迫应答和信号转导,与IL-1有相似的结构域,并且含有典型信号肽,整体表现为亲水性。QRT-PCR检测结果显示,FGF18基因在妊娠早期牦牛子宫中的表达量是非妊娠期子宫中表达量的24.7倍,说明FGF18蛋白在牦牛胚胎的早期发育中起着重要作用。     

产单核细胞李氏杆菌感染鼠的肝细胞凋亡的荧光定量PCR检测

为探讨产单核细胞李氏杆菌感染小鼠的肝细胞凋亡机制及不同毒力菌株引起的肝细胞凋亡的差异,选取毒力差异显著的2株产单核细胞李氏杆菌,建立不同毒力及菌量的小鼠感染模型(A组低剂量攻弱毒、B组半数致死量攻弱毒、C组半数致死量攻强毒、D组过量攻强毒),利用建立的小鼠肝细胞凋亡因子荧光定量PCR方法,检测小鼠肝细胞凋亡途径的重要因子表达量的变化,同时应用TUNEL技术(末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法)检测凋亡情况。TUNEL结果显示,4组小鼠均存在不同程度的肝细胞凋亡,凋亡程度与细菌毒力呈正相关。荧光定量PCR结果显示,死亡受体途径的重要因子Caspase-3和Caspase-8的变化趋势相似,在4组小鼠表达量变化大体呈现相似的趋势(P0.05),即在感染早期(12h~2d)表达量急剧升高,至峰值后逐渐降低;NF-κB在感染早期升高,且在感染后期也维持在较高的水平;线粒体凋亡途径的重要因子bcl-2、bax组间和组内的变化趋势都不是很明显(P0.05)。表明产单核细胞李氏杆菌介导的肝细胞凋亡存在剂量及毒力依赖性,并主要依赖死亡受体途径,线粒体凋亡途径在这一过程中并不发挥主要作用。     

生活健康

小鞋匠"挽救"大公司埃尔德集团是瑞士一家大型的收银机销售公司。不过,公司刚成立时,他们的收银机并不好卖,销售人员也总抱怨市场难做。一次,在公司的经营会议上,销售主管们又向总裁查菲尔诉苦,希望公司能出台政策,减小销售压力。听完主管们的发言,查菲尔突然站起来说:"对不起,诸位休息一下,我早上出门忘擦鞋了,现在去门口擦个鞋,马上回     

荧光桃红显现非渗透表面潜血足迹技术研究

目的:研究荧光桃红工作液显现非渗透表面潜血足迹技术；方法:荧光桃红溶解于酒精形成显现工作液，喷涂在遗留常见非渗透表面潜血足迹部位；结果:经荧光桃红酒精工作液处理后，常见非渗透表面潜血足迹产生强烈的亮红色。与传统的潜血显现试剂四甲基联苯胺比较，荧光桃红酒精溶液显现出的潜血印痕花纹更为反差明显，特征突出，且能够有效显现四甲基联苯胺处理后的潜血足迹；结论:荧光桃红酒精工作液能够有效显现出非渗透表面潜血足迹，且能够作为四甲基联苯胺的后增强试剂，若得到推广应用，将能够有效提高犯罪现场上潜血印痕的发现率、提取率和利用率。     

大美蓝田

正~~     

台湾经济能否重现春天

2008年是台湾的选举年，新一届台湾“立法委员”的选举，台湾地区新领导人的选举，相继出场。在“立法委员”的选举中，泛蓝阵营大胜，引来台湾股坛的连续大升幅，台湾“立法委员”选后，台湾股市开市大升224点，第二日再升142点，反映台湾民众对经济未来前景的信心大幅提升。台湾地区领导人大选后，台湾经济能否重见春天引人注目。     

服用高钙素诱发心衰死亡一例

营养高钙素是通过对新鲜牛骨的深加工,提取出生物有机钙的产品,适用于严重钙缺乏者,其钙元素含量高达4000mg/100g。 案情简介:1997年6月8日7时50分我县建筑公司周某来我局报称:其妻李某,因患肥胖症服用传销的天津某生物工程公司生产的营养高钙素Ⅰ型减肥,服用20多天,于6月7日晨昏迷,上午10时左右送县医院抢救无效死亡。     

水泥地面上滴落状血迹形态的模拟实验

目的观察水泥地面上不同高度、速度对滴落状血迹的形态和大小,应用于现场勘验。方法采用等量抗凝人血,在静态和动态条件下,进行滴落状血迹的模拟实验,观察血迹的形态,测量其直径,用专业统计软件进行分析。结果在静态条件下,滴落状血迹呈圆形,其周围有毛刺状突起;滴落状血迹的大小(直径)与滴落高度之间有较好的线性关系,可得出回归方程。在慢走、急走、跑、快跑动态条件下,滴落状血迹为圆形或椭圆形,沿运动方向的一侧出现突起;高度、速度分别对血迹形态有影响,而且两者有交互作用。结论滴落状血迹形态和大小的观察和测量,可用推断出血部位的高度、运动速度和方向。