猪附红细胞体TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种能定性与定量检测猪附红细胞体的方法,根据GenBank中猪附红细胞体的16SrRNA基因高度保守区设计了特异性引物和探针,经各反应条件的优化,建立了一种快速检测猪附红细胞体核酸载量的TaqMan荧光定量PCR方法。结果表明,该检测方法在107～101 copies/μL具有良好的线性关系(RSq=0.999)。能检测到模板的下限为30copies,灵敏度是普通PCR检测方法的100倍。该检测方法与其他猪常见病病原体无交叉反应,具有良好的重复性。对临诊疑似猪附红细胞体感染猪血液进行了检测,其检出率比常规PCR方法高10%。表明该方法可用于临床上猪附红细胞体的检测及定量分析。     

补足精神之“钙”

最近,电视专题片《永远在路上》引起巨大反响,大批曾经叱咤风云、位高权重的高官因贪污腐败相继落马、身陷囹圄,这其中巨大的反差震撼人心,更发人深思：这些官员为什么不能有始有终,善始善终？     

新型荧光502粉末显现手印技术的改进研究

目的 对新型粉末状荧光502显现手印的方法进行进一步探索和完善,确保其高效便捷和科学准确.方法 将PolyCyano UV粉末加热至230℃使其升华,待该粉末在手印纹线上聚合附着后用长波紫外线或蓝光激发拍照,并与初步研究结果相比较.结果 大部分非渗透性光滑客体表面上的汗潜手印均有很好的显现效果.结论 该方法使显现流程更加高效便捷、显现时间短、无需二次染色增强、不破坏生物检材,适合推广使用.     

新型荧光502粉末与502胶+荧光染色显现潜在手印的比较

目的 对新型荧光502粉末显现非渗透性光滑客体表面潜手印的一步荧光502显现新技术和传统502胶水熏显+荧光染料染色显现手印技术进行比较研究.方法 比较实验研究,对荧光502粉末和502胶水使用同一自动熏显柜先后进行熏显,荧光502粉末熏显结束后直接在蓝光灯下激发进行观察和拍照;502胶水在熏显完成和聚合物完全固化后使用罗丹明6G和BBD溶液进行荧光染色,再进行光致荧光照相.结果 一步熏显和二次染色的显现效果基本相同,但两者的显现效果也因检材性质和遗留时间的不同而存在一些差别.结论 新型荧光502粉末可以作为一种显现非渗透性光滑客体表面上潜手印的常用方法,尽管新方法对某些客体的显现效果并不好,但对大多数客体来说,其显现效果并不弱于二次染色的方法,并且使用新型荧光502粉末进行一步熏显不会引入有机溶剂,不会引起502聚合物的溶解或造成破坏,确保了纹线及其细节特征不被损坏,也避免了染色后因漂洗不当使手印纹线被冲掉的可能,还不会破坏脱落细胞等生物检材.     

新型荧光502粉末与502胶＋荧光染色显现潜在手印的比较

目的对新型荧光502粉末显现非渗透性光滑客体表面潜手印的一步荧光502显现新技术和传统502胶水熏显＋荧光染料染色显现手印技术进行比较研究。方法比较实验研究,对荧光502粉末和502胶水使用同一自动熏显柜先后进行熏显,荧光502粉末熏显结束后直接在蓝光灯下激发进行观察和拍照;502胶水在熏显完成和聚合物完全固化后使用罗丹明6G和BBD溶液进行荧光染色,再进行光致荧光照相。结果一步熏显和二次染色的显现效果基本相同,但两者的显现效果也因检材性质和遗留时间的不同而存在一些差别。结论新型荧光502粉末可以作为一种显现非渗透性光滑客体表面上潜手印的常用方法,尽管新方法对某些客体的显现效果并不好,但对大多数客体来说,其显现效果并不弱于二次染色的方法,并且使用新型荧光502粉末进行一步熏显不会引入有机溶剂,不会引起502聚合物的溶解或造成破坏,确保了纹线及其细节特征不被损坏,也避免了染色后因漂洗不当使手印纹线被冲掉的可能,还不会破坏脱落细胞等生物检材。     

miR-275在长角血蜱不同发育阶段及组织中表达的动态变化

根据本实验室建立的高通量测序数据库中长角血蜱miR-275的成熟体序列信息,设计出特异性茎环引物及PCR扩增引物,同时以长角血蜱β-actin基因(GenBank登录号:AY254898)为内参基因,绘制标准曲线,计算长角血蜱miR-275的标准拷贝数,采用GraphPad Prism 5软件分析miR-275在长角血蜱不同发育时期及不同组织中的表达情况。结果显示,长角血蜱miR-275和β-actin标准曲线的回归系数均大于0.99,熔解曲线峰值单一,Ct值的变异率均小于5%,表明引物特异性好,标准曲线重复性和稳定性高。用real-time PCR方法对miR-275在长角血蜱卵的不同发育时期、蜱不同发育阶段及不同组织中的表达情况进行分析。结果显示,miR-275在长角血蜱卵发育到第16天的拷贝数最大,为(13.07±1.63)×106 copies/μL,是表达量最低的第5天的43.57倍;在饱血成蜱中拷贝数最多,为(18.95±1.55)×106 copies/μL,是饥饿成蜱的236.88倍;长角血蜱卵巢中拷贝数是最高的,为(15.29±3.59)×106 copies/μL,是表皮表达量的10.47倍。结果表明,miR-275在长角血蜱卵的发育、细胞增殖、组织分化等过程中可能起到了至关重要的作用。     

禽呼肠孤病毒感染鸡胚成纤维细胞后三种细胞因子基因mRNA转录水平的动态变化

为了分析禽呼肠孤病毒(ARV)S1133株感染鸡胚成纤维细胞(CEF)对细胞产生的细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α的影响,并探讨禽呼肠孤病毒的感染机制及病毒与宿主之间的作用关系,运用实时荧光定量RT-PCR技术,测定和分析了ARV-S1133感染CEF细胞后ARV结构蛋白σC和IL-1β、IL-6、TNF-α的动态转录水平。结果显示,ARV-S1133感染CEF后第10小时起病毒σC基因mRNA的相对表达量开始迅速上升,在第48小时达到最高峰(13 162.73倍);ARV-S1133感染后引起CEF中IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA表达量发生变化,这3个基因mRNA的表达变化趋势相似。IL-1β、IL-6、TNF-α基因mRNA转录水平在感染早期迅速上升,在感染后第6小时达到第1个峰值,随后下降,在感染中后期再次显著上升,在第48小时达到第2个峰值。IL-1β、IL-6、TNF-α在感染后第6、24、36和48小时的mRNA转录水平与对照组差异极显著(P0.01)。结果表明,ARV感染后可诱导CEF分泌IL-1β、IL-6、TNF-α的水平上调,进而发生炎症反应,说明IL-1β、IL-6、TNF-α可能与禽呼肠孤病毒的复制和致病机制相关。     

偶氮荧光桃红血足迹新型显现技术研究

目的探索一种犯罪现场上血足迹新型显现技术;方法利用偶氮荧光桃红、四丁基碘化铵酒精溶液作为血足迹显现液,研究其对渗透表面和非渗透表面血足迹的显现效果,并与四甲基联苯胺显现技术进行比较;结果偶氮荧光桃红显现液对血足迹极其敏感,显现出的足迹清晰连贯、反差明显,无颜色背景,且能够有效增强四甲基联苯胺显现后血足迹;结论偶氮荧光桃红显现液能够有效显现现场血足迹,并可作为四甲基联苯胺的后处理试剂。     

新型荧光502粉末显现手印的最佳温湿度探究

目的研究新型粉末状荧光502—PolyCyano UV粉末显现手印的条件,主要从其熏显的温度和相对湿度两个方面进行。方法通过控制变量法分别确定其最佳值。结果实验研究表明,该粉末熏显手印的最佳温度为230℃,最佳相对湿度为60%～80%,具体数值与手印保留时间及客体表面性质有关。结论基于PolyCyano UV粉末的手印显现新技术,具有一步熏显、操作简便、显现时间短、用量少、无需二次染色增强、不破坏生物检材、显现效果明显等特点,适合推广使用。     

新型荧光502粉末显现手印的最佳时间探究

研究新型粉末状荧光502——PolyCyano UV粉末显现手印的熏显时间,通过控制变量的方法来确定其最佳值。实验研究表明,最佳熏显时间为10~20分钟。