基于切口酶的等温全基因组扩增体系的建立与应用

目的 建立依赖切口酶Nt.BstNBI的等温全基因组扩增体系,并对该体系的微量生物物证STR分型效能进行验证。方法 选用切口酶Nt.BstNBI（识别序列为GAGTC）和等温扩增的聚合酶Bst,建立切口酶依赖的扩增体系（NDA）。对DNA样本进行NDA并纯化NDA产物,对NDA前后的样本进行复合扩增和毛细管电泳,检测该方法的有效性、灵敏性。结果 007标准品12个常染色体基因座的扩增效率提高2倍以上,灵敏度约为3 pg/μL;19个Y染色体个基因座的扩增效率提高2倍以上,灵敏度约为6 pg/μL。8个人血样本扩增效率提高2倍以上的常染色体基因座与007标准品一致。结论 本文建立的NDA体系准确性好,能够对包含特定侧翼序列的STR基因座进行有效的线性扩增,对法医微量生物物证的高效扩增检测具有重要意义。     

实验性小白鼠死后肝脏酶组织化学改变

作者用60只小鼠实验,分组观察环境温度为4℃和20℃、死后0、6、12、24、48和72h 肝脏的PPr、ATPase、CCO、ACP、ANAE、G-6-Pase、LDH、SDH、G6PD 和NADHD 等10种酶活性的组织化学改变。在4℃组,PPr 活性在死后6h 开始下降;死后72h,PPr 仅在少数肝细胞呈阳性反应;其余9种酶活性无明显改变。在20℃组,死后6h,PPr 活性明显下降,死后12h 变为阴性。死后48h,LDH 和ATPase 活性明显下降,死后72h 变为阴性。作者认为,死后组织中酶的改变规律有助于推断死后经过时间。     

p33.4位点扩增片段长度多态性及其法医学应用的研究

以聚合酶链反应（PCR）、聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳和银染法对中国100名无关个体小卫星区域p33．4位点的扩增片段长度多态性（Amp－FLPs）进行了研究，检出了8个等位基因。通过BIOTRAC系统进行数据处理．各等位基因重复单位的数目分别为7、10到15，其中在13～14之间发现一差值不足一个重复单位长度的罕见等位基因。片段长度分布于603～1115bP之间，基因频率分布于0.5～33．5％间，杂合度为64％，DP值为84．5％。对5个家庭25名相关个体进行分析，符合孟德尔遗传定律；对同一个体不同组织的DNA进行P33.4位点的分型研究表明，该技术适宜于法医物证检验。此外，本研究以Chelex处理不同检材制备DNA模板用于扩增，率先建立了比常规方法更快、更简便、更为实用的检验方法。     

肠毒素性大肠杆菌K99-ST1融合基因的克隆及原核表达

为有效预防肠毒素性大肠杆菌(ETEC)引起的犊牛和羔羊腹泻,将PCR扩增获得的ETEC K99菌毛抗原基因和人工合成的ST1基因片段,借助pUCm-T载体,构建了重组质粒pUCm-K99-ST1,从而获得了融合基因K99-ST1;使用EcoR I Sal I双酶切将该融合基因定向插入表达载体pET-30a中,成功构建了表达载体pET-K99-ST1,将其转入表达茵株BL21(DE3)中,经IPTG诱导,获得31 ku的蛋白;Western-blotring结果显示,该融合蛋白可与K99阳性血清发生特异性反应.     

高铜对雏鸭肝氧化状态及肝细胞凋亡的影响

将360只1日龄天府肉鸭随机分为6组,分别以对照日粮(Cu 8 mg/kg)和高铜日粮(Ⅰ组Cu100 mg/kg;Ⅱ组.Cu 200 mg/kg;Ⅲ组Cu 400 mg/kg;Ⅳ组Cu 600 mg/kg;Ⅴ组Cu 800 mg/kg)饲喂6周,研究日粮铜水平对雏鸭肝氧化状态及肝细胞凋亡的影响.结果显示,与对照组比较,Ⅳ组和Ⅴ组肝铜锌SOD和谷胱甘肽过氧化物酶活性降低(P＜0.01),Ⅲ组、Ⅳ组和Ⅴ组羟自由基和丙二醛含量显著升高(P＜0.01),Ⅰ组和Ⅱ组肝铜锌SOD和谷胱甘肽过氧化物酶活性升高(P＜0.01).高铜组肝细胞凋亡率随日粮铜水平的升高而增加.表明,日粮铜水平为400 mg/kg以上时可引起肝抗氧化功能降低和肝细胞凋亡率升高.     

3株减蛋综合征病毒毒株核酸酶切图谱分析

选用EcoRⅠ、BamHⅠ、HindⅢ、EcoRⅤ、PvuⅡ、BglⅠ、SmaⅠ和PstⅠ等8种限制性内切酶,对不同地区分离的3株减蛋综合征(EDS)病毒进行酶切图谱比较.结果发现3株毒用前6种酶切割后产生的片段数及各片段的大小均相同,而用SmaⅠ和PstⅠ切割后,贵州分离毒HS-1与国际标准毒AV-127、南京分离毒GC2相比,多出1个片段.表明不同地区EDS分离毒的核酸结构基本相同而又略有差异.     

吗啡依赖相关的酶学研究进展

吗啡依赖形成的机制是一个复杂的过程。涉及特定脑区突触超微结构变化、神经递质、酶学等多种复杂的机制,并且相互之间有密切的联系。本文从蛋白激酶类、一氧化氮合酶、超氧化物歧化酶、腺苷酸环化酶、琥珀酸脱氢酶、3β-羟基类固醇脱氢酶等几方面对吗啡依赖相关酶体系的研究进展作一综合性论述。     

家兔死后红细胞内钾钠离子含量与死亡时间的关系

研究了40只家兔死后不同时间心血红细胞内钾钠离子含量变化及红细胞膜Na+－K+－ATP酶活性。发现红细胞内钾离子含量随死亡时间增加呈线性下降（r=-0．829,P＜0．025）。在死后0－48小时,红细胞内钾离子含量与死亡时间显著相关。红细胞膜Na+－K+－ATP酶活性在死后48小时无显著变化。     

中国人精子黄递酶Ⅲ型的分布及精斑黄递酶Ⅲ型的检出

应用超薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦技术对辽宁地区200例正常人精子黄递酶Ⅲ型(DIA)的分布进行了研究。其基因频率分别为DIA_3~1=0.6850,DIA_3~2=0.2875,DIA_5~3=0.0275。由阴道液、唾液、乳汁及无精子症精液不能判定DIA_3型。室温保存精斑可检出时限为9个月。     

大鼠乌头碱中毒心肌酶的细胞化学研究(Ⅰ)——线粒体琥珀酸脱氢酶(SDH)的定位

本实验通过对大鼠乌头碱中毒心肌线粒体 SDH 的超微结构定位,证实乌头碱可抑制心肌中大部分线粒体 SDH 活性,提示乌头碱中毒的机理可能是抑制心肌细胞三羧酸循环和呼吸链的氧化磷酸化作用,使心肌有氧代谢障碍,心肌供能不足,导致的心功能紊乱。