呼肠孤病毒3型S1基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

采用RT-PCR方法从呼肠孤病毒3型(Reo-3)中扩增S1基因的主要抗原片段SR,并将其克隆到原核表达载体pQE-31中诱导表达,融合蛋白SR-δ1纯化后被用作包被抗原,建立了检测呼肠孤病毒3型抗体的间接ELISA.对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot分析的结果表明,表达蛋白SR-δ1的分子质量约为32 ku,具有很好的抗原性.建立的ELISA与鼠痘病毒、仙台病毒、小鼠肝炎病毒、小鼠肺炎病毒均无交叉试验,具有良好的特异性、重复性和敏感性,与国家实验动物检测中心的ELISA检测试剂盒的符合率为98.7%,证实该方法可用于Reo-3抗体的检测.     

免疫酶组化法检测人工感染牦牛体内布氏杆菌的研究

为了确定免疫酶组化法检测布氏杆菌的临床应用价值,笔者利用甘肃省甘南州兽医站人工感染试验的牦牛,进行现场检测,并与传统的细菌分离培养法做对比试验。对每头牦牛20种组织器官的检验结果表明:免疫酶组化法对细菌分离培养法的阳性符合率为100％,但前者阳性检出率却显著地高于后者。并且用免疫酶组化法检测耗时短,操作安全、简便,因此更具有实用价值。     

生物工程领域的领头兵

在非典病魔袭来之际,河南的专家王云龙率领科研人员成功地研制出两种快速、特异、灵敏的非典基因检测试剂。该试剂使非典检测缩短到两小时以内。身为九三学社中央委员、河南省委常委的王云龙,是享受国务院特殊津贴的国家级有突出贡献专家,他所领导的河南华美生物工程有限公司是目前国内惟一的工具酶生产基地、国家重要的诊断药物龙头企业。     

ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ABC-Dot-ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的方法,其最佳反应条件是包被液为0.05 mol/LpH 9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液(CBS),兔抗IBV IgG的最佳工作浓度为180,抗原的最佳浓度为1800,封闭剂选用0.01 mol/L pH 7.4含30mL/L白明胶的PBS,B-AgG和ABC-HEP的最佳工作浓度为1200.用ABC-Dot-ELISA与琼脂扩散试验(AGP)比较检测255份自然发病鸡和20份人工感染雏鸡的口咽拭子、气管、肺、肾,前者的检出率远高于后者.     

ELSIA对马传染性贫血ID阴性马的检测结果分析

用琼脂扩散试验(ID)对马传染性贫血(EIA)检测阴性马随机抽出649份样本,经用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行复检,结果检出ELISA阳性马29匹,复检阳性率为4.4%.同时对当地马传染性贫血疫情相对稳定控制下隐性、慢性带毒马其潜在的传染源及采取的相应对策进行了分析.     

酶水解对亳菊总黄酮中黄酮苷元的影响

目的 体外研究烘干过程中酶对亳菊总黄酮成分的影响,为亳菊产地加工和炮制工艺提供前期研究基础。方法 模拟亳菊烘干过程,采用β-D-葡萄糖苷酶酶解亳菊总黄酮,以金合欢素、芹菜素、木犀草素3种黄酮苷元含量为指标,分析酶解反应对3种黄酮苷元含量变化的影响。结果 酶解反应后,亳菊总黄酮中木犀草素、芹菜素、金合欢素3种黄酮苷元的含量升高。结论 β-D葡萄糖苷酶可酶解亳菊中黄酮类成分,使其中黄酮苷元含量升高,β-葡萄糖苷酶水解亳菊总黄酮是烘干过程中黄酮苷元含量升高的原因之一。     

产志贺毒素大肠杆菌的RPA-LF快速检测方法的建立

为建立一种快速检测产志贺毒素大肠杆菌的基于侧流层析的重组酶聚合酶扩增技术(RPA-LF)方法,以志贺毒素stx1和stx2基因序列为靶序列,设计了用于RPA-LF方法的特异性引物及探针,并对RPA-LF反应条件进行优化.结果显示,针对stx1和stx2基因的最佳反应温度分别为39℃和37℃,最佳反应时间分别为10min...     

规模化猪场猪圆环病毒2型感染的血清学调查

用ELISA方法对甘肃省酒泉、张掖、武威、兰州、临夏、白银、定西 7市 (州 )及青海省大同地区的 12个规模养猪场或个体养殖户送检的 2 19份猪血清进行了猪圆环病毒 2型 (PCV2 )抗体检测。结果 ,抗体阳性血清 12 8份 ,其中母猪血清 75份 ,仔猪血清 5 3份 ;总抗体阳性率为 5 8.4 5 % ,母猪抗体阳性率为 6 3.2 5 % ,仔猪抗体阳性率为 5 2 .94 % ;同时对张掖市及大同地区的猪场进行了跟踪调查 ,张掖市 2、3、4和 6月份的阳性率依次为 12 .5 0 %、4 2 .11%、75 .0 0 %和 97.4 2 % ,青海大同地区 4月份和 8月份的阳性率依次为 12 .5 0 %和 85 .71%。表明两地的PCV2感染率随气候变暖而呈明显上升的趋势。     

鸭瘟病毒gD基因胞外区的原核表达及ELISA检测方法的建立与应用

为研究分离鉴定的鸭瘟病毒gD基因(GenBank登录号:EU195085)及其编码蛋白的应用,采用PCR方法从鸭瘟病毒CHv毒株DNA中获取编码gD胞外区基因729bp片段,构建重组表达载体pET32a-gD,转化受体菌E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组gD蛋白。结果显示,该重组蛋白分子质量约为31ku,为gD胞外区与载体6个组氨酸的融合表达产物,与gD胞外区预期大小一致(27.5ku);经离心收集菌体,超声裂解后,SDS-PAGE分析结果显示,gD蛋白主要以包涵体形式表达;将包涵体溶解后进行Ni-NTA亲和层析可较好地纯化重组蛋白。Western-blot检测显示,gD蛋白能与兔抗鸭瘟病毒血清特异结合,具有较好的免疫反应性。利用该蛋白建立了ELISA检测方法,优化了该方法的各个反应条件,并进行了初步应用,为该方法的临床应用奠定了基础。     

牛D型产气荚膜梭菌肠毒血症dot-ELISA诊断方法的建立

以纯化的菌体蛋白为诊断抗原,建立了牛D型产气荚膜梭菌特异性抗体的斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)检测方法,确定了各组分的最适反应条件:抗原包被浓度为1.95 μg/mL,血清稀释度为1:320,二抗稀释度为1:2000,封闭液为30 mL/L脱脂乳,抗原、血清、二抗和封闭液的作用温度及时间均为37℃30 min.用该dot-ELISA检测30份牛血清,纯化抗原比粗提抗原的阳性检出率高16.7%;dot-ELISA的灵敏度是琼脂免疫扩散试验(AGID)法的43倍;用dot-ELISA法对100份牛血清样本进行检测,阳性率为59.0%;经特异性试验、重复性试验和与AGID法比较,表明用纯化抗原建立的方法具有良好的特异性、敏感性和重复性.