精液岩藻糖苷酶分型及该酶在武汉地区汉族人群中的频率分布

前言α-L-岩藻糖苷酶(α-L-Fucosidase,E.C.3.2.1.51)是一种溶酶体酶,存在于人体大部分组织细胞中,但不存在于红细胞.1975年,Turner等人应用等电聚焦电泳在人白细胞提取物中首次发现岩藻糖苷酶的遗传学多态性,检出了     

非同位素标记DNA探针初步研究

本文报导了将辣根过氧化物酶直接标记在单链 DNA 探针上,制备出非同位素的 DNA 探针,采用化学光增强法检测杂交结果,所得图谱清晰,容易判读。所制备出的 DNA 探针可用于人类性别鉴定和个体识别,为 DNA 检验技术推广应用开辟了新的领域。     

人血中磷酸葡萄糖变位酶的提取及其抗血清研制

作者用大柱制备电泳法从人红细胞解离波中分离提取磷酸葡萄糖变位酶（ＰＧＭ），并以此为抗原，免疫新西兰家兔，制备得到了兔抗ＰＧＭ血清．经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ检测，纯ＰＧＭ为单体，分子量为５０，７１３道尔顿；经琼脂双扩散法检测，兔抗ＰＧＭ血清效价为１：１６，可检出ＰＧＭ的最低浓度为１５．６μｇ／ｍｌ，兔疫电泳表明，该抗血清与ＰＧＭ２—１型及ＰＧＭ２—２型人红细胞解离液产生单一的沉淀线，特异性较好。用戊二醛法将该抗血清标记ＨＲＰ，ＥＬＩＳＡ测得酶一抗体结合物最适工作浓度为１：１２８稀释度。     

抗人同种异型G1m(3)单克隆抗体研制及特异性鉴定

用快速液相色谱仪从G1m（3）阳性人血浆中纯化IgG1蛋白，用其免疫BALB／C／小鼠．建立了一株分泌抗人G1m（3）单克隆抗体的细胞株（D7E8）。经抑制ELISA，直接ELISA及斑点ELISA分析，证明D7E8抗体具有G1m（3）单一特异性。其培养上清液效价为512倍，并初步应用于法医办案。     

猪圆环病毒3型RAA检测方法的建立及初步应用

为建立猪圆环病毒3型(PCV3)的快速简便检测方法,根据PCV3 Cap基因的保守序列设计多对引物和探针,建立了一种实时荧光RAA检测方法.通过筛选引物和优化试验条件,验证对常见动物疾病病毒的特异性,并与PCR方法在敏感性上进行比较.结果 表明,PCV3与猪瘟病毒(CSFV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆...     

氯胺酮胃蛋白酶水解提取方法研究

胃蛋白酶作为生物检材肝脏中氯胺酮的酶水解剂,通过正交设计法,不断优化实验条件,通过紫外可见分光光度法定量分析比较获取最佳分离提取条件,与钨酸钠沉淀法(提取率70%)、溶剂直接提取法(提取率80%)比较,酶水解法提取率达97%。     

弓形虫重组MIC3蛋白间接ELISA检测方法的建立

为检测弓形虫特异性抗体,以纯化的重组MIC3蛋白作为包被抗原,用羊抗猪IgG-HRP作为酶标二抗,分别对抗原浓度、血清稀释度、酶标二抗稀释度以及作用时间等进行了优化,初步建立了检测弓形虫特异性抗体的间接ELISA方法。结果显示,该方法检测猪球虫、猪肺炎支原体、猪圆环病毒2型、副猪嗜血杆菌等阳性血清均为阴性,表明该方法具有良好的特异性。组内和组间重复性试验的变异系数均小于8%,表明该方法具有较好的重复性。应用所建立的ELISA方法和商品化试剂盒A(IHA)、B(ELISA)同时检测从南京某猪场采集的猪血清样品166份,符合率分别可达94.58%和95.78%。该方法为我国进行弓形虫病的诊断与流行病学调查提供了一种技术手段,并为试剂盒的研制与开发奠定了前期工作基础。     

H19基因上游差异性甲基化区SNPs多态性研究

目的获得H19基因上游差异性甲基化区中SNPs的群体遗传学信息。方法采用PCR和测序技术,对105例中国北方汉族健康无关个体H19上游启动子区检测;使用Haploview 4.1和PowerStats V12软件进行统计学分析。选用甲基化敏感的限制内切酶(msRE)HpaⅡ,检测5个家系样本H19等位基因的亲代来源。结果测序结果显示,H19启动子区含有13个SNPs,组成5种单倍型,13种单倍型组合,其个体识别能力为0.856、多态性信息含量为0.67、非父排除率为0.498。经msRE HpaⅡ消化母源等位基因后,进行PCR及测序分析,检测出父源等位基因,排除1例和肯定4例家系的亲缘关系。结论 DNA甲基化标记和SNPs多态性检测,可同时进行多态性分型并确定等位基因的亲代来源,具有较高的法医学应用价值。     

尸体心血红细胞ATP降解规律与早期死亡时间的相关性

目的观察早期死亡时间(PMI)与血液红细胞ATP含量的相关性。方法选择具有确切死亡时间的尸体30例,在死亡后6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h分别于第4肋间进行心脏穿刺取血,利用生物发光法检测血液样本红细胞ATP含量(μmol/g Hb),并观察红细胞ATP含量变化与死亡时间的关系。结果尸体心血红细胞ATP含量在死亡后1~24h之内呈现非匀速下降趋势,与死亡时间的Pearson相关系数为-0.971(P=0.000);尸体心血红细胞ATP含量与死亡时间的回归方程及R2值为:Y=-0.096X+2.872(X为死亡时间),R2=0.936,P=0.000。结论尸体心血红细胞ATP含量在死后1~24h之内的变化与死亡时间具有相关关系,可以作为法医学死亡时间推断的生物学指标。     

牛巴贝斯虫病ELISA诊断方法的建立

以BORCT蛋白为包被抗原,优化最佳反应条件,确定阈值并测定其交叉反应,建立了一种特异性检测牛巴贝斯虫抗体的间接ELISA方法。利用该方法测定了试验感染的2头牛的抗体动态曲线,并对我国四川、甘肃、新疆3个省(自治区)的314份牛血清样品进行了检测。结果显示,经MedCalc 12.7.3.0软件分析86份阴性血清和69份阳性血清的检测结果,确定29.6%抗体比率为该方法的阳性阈值,对应的敏感性和特异性分别为94.2%和96.5%,并且与其他巴贝斯虫、泰勒虫和无浆体阳性血清均无交叉反应。对试验感染动物的检测结果显示,感染后的第6天出现特异性抗体,第12天达到最高值,一直持续到第270天。野外样品检测结果显示,3个省份均有牛巴贝斯虫的分布,平均阳性率为46.82%。