豆状囊尾蚴人工感染家兔抗体水平的消长

取人工感染豆状带绦虫犬自然排出的孕卵节片,虫卵计数后以不同数量感染家兔,定期采血,待囊尾蚴成熟后扑杀,计数.同时,用豆状囊尾蚴粗制抗原所建立的ELISA诊断方法,检测家兔的抗体变化情况.结果显示,家兔在感染后第3周血清抗体呈阳性,且抗体水平逐步上升,第8周达到最高水平,直至第10周扑杀时仍呈较高的阳性水平.抗体水平随感染数量的增加而升高,虫体负荷随感染强度的增加而逐步升高,感染虫体数量的多少对抗体出现的时间影响不大.研究结果为该病的流行病学调查及免疫预防奠定了基础.     

奶牛流产衣原体OmpA抗原间接ELISA检测方法的建立

以奶牛流产衣原体外膜蛋白A(OmpA)作为抗原,筛选最佳反应条件,建立了奶牛衣原体病间接ELISA检测方法。结果显示,OmpA的最佳包被浓度为1∶320;血清最佳稀释度为1∶40;酶标二抗的最佳工作浓度为1∶2000;抗原的最适包被条件为37℃1h加4℃过夜;ELISA的阴性、阳性临界值为0.391。用本方法和衣原体间接血凝试验检测奶牛血清田间样品206份,两者的符合率为95.3%。本试验建立的OmpA-ELISA方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,可为牛衣原体病的诊断及流行病学调查提供有效工具。     

中国北方汉族人群FUT6基因3个SNPs遗传多态性

目的对中国北方汉族人群FUT6基因编码区序列特征及等位基因多态性进行调查。方法测序分析30例中国北方汉族人FUT6基因整个编码区序列并鉴定其单倍型,采用复合PCR与复合限制性内切酶结合的RFLP法分析FUT6基因rs778805（C370T）、G855A及rs61147939（C907G）3个SNPs遗传多态性;应用Haploview4.1软件进行相关统计分析。结果 30例测序样本中共检出8个SNPs和6种单倍型,149例中国北方汉族个体C370T、G855A、C907G基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。杂合度分别为0.544、0.416、0.510;多态信息含量为0.375、0.372、0.367;个人识别能力为0.600、0.651、0.603;非父排除率为0.187、0.186、0.183。PCR-RFLPs检出13种基因型,单倍型变异度为0.646。Haploview4.1软件分析表明3个SNPs处于连锁不平衡状态。结论中国北方汉族人群FUT6基因编码区序列呈现出高度多态性;C370T、G855A、C907G位点多态性分布良好,但处于连锁不平衡状态。     

白眉蛇毒血凝酶致过敏性休克死亡1例

1案例 1.1案情 患儿,男,5岁,某年8月12日下午17：15因＂被车撞伤致头皮、颜面部肿胀伴鼻腔出血约15min＂入院。患者家属代诉：当时碰撞肩部,头面部及胸部着地,鼻腔有出血,头皮肿胀、疼痛,无恶心呕吐,无抽搐。     

外伤性癫痫灶中泛素与泛素激活酶的定量分析

目的 定量测定人体外伤性癫痫灶中泛素(ubiquitin,Ub)和泛素激活酶(ubiquitin-activating enzyme,UbE1)的表达,研究泛素蛋白酶体系在外伤性癫痫(post-traumatic epilepsy,PTE)发病机制中所起的作用,探索其在PTE鉴定中的应用价值. 方法 分别收集颅脑外伤致癫痫患者脑癫痫灶组织(外伤性癫痫组)、非颅脑外伤性癫痫灶组织(非外伤性癫痫组)和交通事故死亡者正常脑组织(非癫痫组)各15例,应用RT-PCR、Western印迹技术检测3组中Ub和UbE1的含量,并对所得数据进行统计学分析. 结果 RTPCR、Western印迹技术测定显示Ub和UbE1的mRNA和蛋白质在3组中含量为外伤性癫痫组>非外伤性癫痫组>非癫痫组,两两比较,组间差异具有统计学意义(P<0.05).结论 Ub和UbE1在癫痫灶组织中表达增加,且在外伤性癫痫灶组织中增加最为明显.推断泛素蛋白酶体系的活化是PTE神经元病理改变的重要机制之一.     

Ⅰ群禽腺病毒抗体间接hexon-ELISA检测方法的建立

为建立一种检测Ⅰ群禽腺病毒(FAVⅠ)抗体的间接ELISA方法,以FAVⅠhexon重组蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立了FAVⅠ抗体间接hexon-ELISA检测方法。抗原最佳包被浓度为10.0μg/mL,最适包被条件为37℃2h加4℃过夜;最佳封闭液为50g/L脱脂乳;血清最佳稀释度为1∶100,最佳作用时间为75min;酶标二抗最佳工作浓度为1∶2 000,最佳作用时间为45min;hexon-ELISA阴性、阳性临界值为0.379。用建立的hexon-ELISA方法检测100份鸡血清样品,阳性率为45%。结果表明,建立的hexon-ELISA方法简便、快捷,可大批量检测,具有良好的特异性、敏感性和重复性,适用于FAVⅠ的诊断、抗体水平监测及流行病学调查。     

伪狂犬病病毒感染对ST细胞生长及ATP酶活性的影响

以伪狂犬病病毒(PRV)容A株体外感染ST细胞为模型,观察PRV对ST细胞生长状态以及胞内Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和总ATP酶活性的影响。根据ST细胞对PRV的敏感剂量,接种ST细胞后第2、12、24、36和48小时观察细胞的生长状态,MTT法检测细胞的增殖能力,用试剂盒检测细胞的ATP酶(Na+-K+-ATP酶、Ca2+-Mg2+-ATP酶和总ATP酶)活性。结果,与对照组相比,在感染后第24小时之前试验组ST细胞的生长状态较好;24h后,细胞活性降低,逐渐发生细胞凋亡。Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和总ATP酶活性在PRV感染过程中变化趋势相似,PRV感染后第24小时之前,Na+-K+-ATP酶活性、Ca2+-Mg2+-ATP酶活性和总ATP酶活性略高于对照组;第36小时,细胞ATP酶总体活性水平明显低于对照组(P<0.05);第48小时两组之间ATP酶活性差异极显著(P<0.01),其中Ca2+-Mg2+-ATP酶活性较为敏感。     

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法 ,用该法检测 2 0份人工感染鸡血清样品 ,抗体阳性率为 10 0 % ,康复期鸡群血清抗体阳性率为 4 3% ,人工接种弱毒疫苗 6 5d和 170d鸡群血清抗体的阳性率分别为 6 0 %、70 %。经反复试验 ,确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件 ,即抗原包被浓度 10 .8μg/孔 ,待测血清最佳稀释度为 1∶10 0。     

Caspase3和iNOS在人挫伤脑组织中的时序性表达

目的研究人脑挫伤后不同时间半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（caspase3）和诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达的变化,为法医实践中脑损伤时间的推断提供依据。方法选择30例因颅脑损伤死亡案例为损伤组,5例非颅脑损伤急死的案例为对照组,应用免疫组织化学和图像分析技术,分别于死亡后2h、4～8h、10～14h、1～2d、3～5d及8～11d检测脑组织标本中caspase3和iNOS的变化规律。结果经统计学分析：（1）caspase3阳性细胞表达在伤后2h以内组开始升高,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）,1～2d组表达强度增高,3～5d组仍见高表达（P〈0.05）,以后逐渐下降。（2）iNOS阳性细胞表达在2h以内组与对照组比较差异无统计学意义（P〉0.05）,伤后4～8h开始升高（P〈0.05）,1～2d组表达强度最高,以后逐渐下降,伤后8～11d仍有弱表达（P〈0.05）。结论caspase3和iNOS的表达可能成为实际检案中脑损伤时间推断的有效依据。     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建

目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验.方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化.结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因.结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来.对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体.