减毒鸡白痢沙门氏菌ΔcrpC79-13株的构建及其对雏鸡的免疫活性

为构建鸡白痢沙门氏菌C79-13株Δcrp基因缺失突变株,并初步观察ΔcrpC79-13缺失菌株作为活疫苗对雏鸡的免疫活性,将含缺失320bp crp基因的重组自杀性质粒pREΔcrp与C79-13进行接合转移,两步法筛选出无抗性标记的ΔcrpC79-13缺失菌株;通过半数致死量测定其毒力;给4日龄雏鸡口服免疫缺失菌株,在不同时间点根据胸腺、法氏囊、脾等免疫器官发育和平均日增重、外周血淋巴细胞转化试验、Griess法NO测定及血清IgG动态观察免疫水平。结果显示ΔcrpC79-13的毒力较C79-13降低约99.6%(LD50>5.0×109CFU);雏鸡接种ΔcrpC79-13(1.0×109 CFU/只)后不影响雏鸡生长,第14～21天体内特异性细胞和体液免疫水平达到最高。表明成功构建了减毒鸡白痢沙门氏菌ΔcrpC79-13株,其毒力显著降低,免疫雏鸡安全,具有良好的免疫活性。     

PCV2 ORF2 B细胞表位与PPV VP2真核表达质粒的构建及其免疫原性

为了研究猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2B细胞表位与猪细小病毒(PPV)VP2重组真核表达质粒的免疫原性,将PCV2ORF2的B细胞表位基因(141～257bp)重组到PPV SC-1株VP2基因的N端,构建了真核表达质粒pCI-VP2.ORF2B。用脂质体转染法将重组质粒pCI-VP2.ORF2B转染至Vero细胞中,利用间接免疫荧光法检测其在体外的表达情况。将重组质粒免疫小鼠,并设猪细小病毒灭活疫苗、猪圆环病毒亚单位疫苗和空载体对照组,采用MTT比色法、流式细胞术和ELISA法分别对免疫小鼠脾淋巴细胞的转化功能,外周血CD4+和CD8+淋巴细胞比例,PCV2和PPV IgG抗体效价进行了检测。结果表明,转染Vero细胞后第48小时用间接免疫荧光法能在荧光显微镜下观察到绿色荧光,检测到特异性蛋白的表达;pCI-VP2.ORF2B免疫组脾淋巴细胞从第7天开始对ConA有明显反应,显著高于对照组;CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞的数量高于或显著高于对照组;在免疫后第14天检测到PPV/PCV2IgG抗体。提示pCI-VP2.ORF2B能够有效诱导机体产生细胞免疫和体液免疫反应。     

HCN4 Gene Variations in Sudden Unexplained Nocturnal Death Syndrome in the Southern Han Chinese Population,

Sudden unexplained nocturnal death syndrome (SUNDS) is widely considered to be related to hereditary fatal arrhythmias. Hyperpolarization‐activated cyclic nucleotide‐gated channel 4 (HCN4) channels are widely distributed in sinus myocytes and play a profound role in generating pacemaker electro‐activity in cardiomyocytes. In the present study, the potential correlation between HCN4 gene variations and the occurrence of SUNDS was investigated. Genomic DNA was extracted from blood samples of both 119 unrelated SUNDS patients and 184 healthy individuals and screened for candidate HCN4 gene variants. One missense heterozygous variant c.1578C>T (Ala195Val) and four synonymous heterozygous variants c.1552C>T, c.2833C>T, c.3823C>T, and c.4189C>A were discovered in the SUNDS cases. The missense variant c.1578C>T (Ala195Val) was absent in 163 recruited controls and 105 persons of the Southern Han Chinese population, had in‐silico prediction indications as damaging, and was reported prevalent in sudden infant death, and is thus likely to be involved in SUNDS.     

新城疫病毒cDNA文库的构建研究

本文报道了用人工合成的28聚寡核苷酸为“引物”,以强毒株新城疫 病毒(NDV)基因组PNA为模板,在逆转录酶作用下成功地合成了NDV- cDNA。后者经琼脂糖凝胶电泳观察,其大小约为0.5～14kb。从凝胶上收集 大于1.0kb以上的cDNA,用Hpa Ⅰ对其进行限制性酶切,然后将酶切片段克隆到pBR322的ScaI位点上,得到的克隆产物即为构建的NDV-cDNA文库。经用少量文库转化E.Coli HB101,得到氨苄青霉素敏感而四环素抗性的转化菌落(Amp基因因外源DNA的插入而失活)。从随机挑出的5个转化菌株中提取重组质粒,经琼脂糖凝胶电泳检测,其插入片段的大小分别为0.8～3.0kb不等。说明所构建的NDV-cDNA文库有效。     

HLA基因多态性及其法医学应用

人类白细胞抗原(Human Leukocyte Antigen,HLA)基因复合物定位于人类第6号染色体短臂上,是人类最复杂的显性多态遗传系统,基因型可达108种之多,是理想的人类遗传标记,已广泛应用于法医学亲子鉴定和个体识别。本文就其基因多态性的研究进展和在法医学中的应用作一综述。     

考古样品中Amelogenin同源基因的提取和检测

目的利用人类性染色体Amelogenin同源基因在X、Y染色体上序列长度的差异,选择设计引物,对考古样本进行古DNA性别信息研究。方法采用苯酚/氯仿-二氧化硅-超滤离心方法提取东岭墓葬群殉人骨骼、牙齿古DNA,PCR扩增,非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离和检测古DNA扩增片段。结果8个墓葬16个样品中有7个样品出现阳性扩增检测,目标基因片段清楚,男性为二条带(X、Y),女性为一条带(X),牙齿样品检测成功率优于骨骼样品。结论改进的苯酚/氯仿—二氧化硅—超滤分离法是较好的古DNA提取方法,具有降低PCR抑制剂、消耗成本低和提取成功率高等特点。基于人类X、Y染色体Amelogenin同源基因的古DNA性别分析方法可成为分子考古重要的技术方法。     

猪链球菌2型溶血素基因的检测及其序列分析

根据猪链球菌 2型的溶血素基因合成了一对可扩增长度为 14 96bp目的片段的引物 ,建立了检测溶血素基因的PCR方法。该方法对猪链球菌 2型参考株SS2 N株的检测结果为阳性 ,对马链球菌兽疫亚种 (C群 )参考株ATCC3 5 2 46、分离株SESZ Y、SESZ T、SESZ C和猪葡萄球菌、大肠埃希氏菌的检测结果均为阴性 ;用EcoRⅠ内切酶进行酶切 ,获得了与预期结果一致的 863bp和 63 3bp的 2个片段。经对SS2 1株的PCR产物进行测序及序列分析 ,表明其与 193 3株、P1/ 7株的核苷酸同源性分别为 99.7%和 10 0 %。     

补阳还五汤对慢性肾炎ET、CGRP的影响

用补阳还五汤治疗气虚血瘀型慢性原发性肾小球肾炎３１例，观察治疗前后血浆内皮素（ＥＴ）、降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）水平，及临床疗效，并与健康组对照。结果：治疗前ＥＴ显著高于健康组（Ｐ＜０．０１），ＣＧＲＰ显著低于健康组（Ｐ＜０．０１），治疗后均显著改善（Ｐ＜０．０１），临床症状也明显改善，疗效显著（总有效率为８３．９％）。表明补阳还五汤对气虚血瘀型慢性肾炎ＥＴ、ＣＧＲＰ有调节作用     

基因犯罪及其刑法对策研究

基因犯罪是指利用基因技术所实施的犯罪或者与基因技术滥用有关的其他一些犯罪的总称.不少国家的立法已经针对这类犯罪采取了相应的对策.防范基因犯罪的发生应当成为刑法的一项重要使命,我国刑法应对及防范基因犯罪的具体措施,一是增设"基因犯罪"这一类罪名;二是对于某些与基因技术滥用有关但却无需通过增设新罪名加以应对和防范的犯罪行为,可以直接依照现行刑法规定的某些具体犯罪加以定罪处刑.