胸膜肺炎放线杆菌apx I A基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apx I A基因片段,分别构建了大肠杆菌表达栽体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A.对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白.证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.     

细粒棘球绦虫六钩蚴EG95抗原基因的克隆及原核表达

利用RT PCR从激活的细粒棘球绦虫六钩蚴中扩增了EG95 cDNA,并亚克隆至原核表达载体pGEX 4T 1上,转化至大肠埃希氏菌BL21,用IPTG诱导重组菌株表达了融合蛋白质。结果表明,从六钩蚴中克隆到了EG95 cDNA,序列长度为481 bp,包括471 bp的开放阅读框,与新西兰株EG95抗原基因序列完全一致;SDS PAGE电泳结果显示,重组表达质粒产生了约42 ku的目的带,其中EG95蛋白质的分子质量约为15.2 ku,与预期结果一致;Western blotting试验检测表明,融合表达产物可与囊性包虫病人血清发生反应。试验结果提示,EG95 基因高度保守,所表达的EG95蛋白作为抗原疫苗具有广泛的适用性。     

新城疫病毒HN基因在CHO/dhfr-细胞中的表达

为了实现新城疫病毒血凝素一神经氨酸酶(HN)基因在中国仓鼠卵巢细胞中的稳定表达,构建了同时含有HN基因和二氢叶酸还原酶(dhfr)基因的真核表达载体pCI-HN-D.将纯化后的重组质粒通过脂质体转染二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢(CHO/dhfr)细胞,经3轮氨甲喋吟加压筛选,获得了稳定表达HN基因的细胞株.用间接免疫荧光和免疫印迹检测目的蛋白的表达情况.结果表明,HN基因在CHO/dhfr细胞中成功表达.     

东亚金融合作的历程与最新动向分析

自从东盟10＋3正式宣布建立亚洲外汇储备库以来,这一动向引起了国际社会的广泛关注。因为这一动向反映了一个时代的重要变化,即亚洲不仅正在从一个虚弱的亚洲转变为强大的亚洲,而且还正在从一个松散的亚洲转化为团结的亚洲。从东亚金融合作的进程来看,亚洲外汇储备库的建立可以起到承前启后的作用,一方面,从与历史的联系来看,它继承了“清迈倡议”的一部分职能,另一方面,从未来的发展趋势来看,它有可能成为亚洲货币基金的萌芽。     

美国法典1404(a)与非方便法院原则辨析

由于美国法典28卷1404（a）条款的立法规定在功能与措辞上均非常类似普通法上的非方便法院原则,因此很多学者误以为该立法规定与非方便法院原则之间并不存在实质性的差异。然而,这一看法并不正确。事实上,1404（a）条款立法在法律效果、证明标准以及具体适用方面均与非方便法院原则存在显著的区别。     

新城“蝶变”中的人大元素

正"如今的城市新区已有了很大的改变,一座座高楼拔地而起,城市道路宽敞通畅,学校、广场、车站、公厕等基础设施逐步完善……"近日,綦江区市民刘平告诉笔者,城市新区的变化让人很高兴,对綦江的未来也充满了希望。新区成立两年多来,重庆市綦江区人大常委会紧紧围绕城市新区开发建设出谋划策,通过行使人大监督权,把脉支招发展,化解发展难题,为城市新区开发建设作出了积极的贡献。专题视察把脉新城发展"大力发展工业经济、加快城市新区开发建设和全区旅游产业发展是全区的三大工作重点,区人大常委会要紧紧围绕全区工作重点开展监督工作。"綦江     

毛泽东箴言

如果要看前途,一定要看历史。 ——《毛泽东文集》第8卷第383页 没有眼睛向下的兴趣和决心,是一辈子也不会真正懂得中国的事情的。 ——《毛泽东选集》第2版第3卷第789页至790页     

刑事案件侦查中的“C—H—D”法和疑案剖析

侦查推理的实质是“C—H—D”,即所谓的“推断—假说—推证”方法,它是“假说演绎法”在侦查思维中的具体运用.以侦查假说为分界,“C—H—D”分为两个阶段:侦查假说的发现阶段和侦查假说的检验阶段.以是否能够发现侦查假说以及侦查假说的检验结果如何,可以产生三种不同类型的疑案:无头案、断线案和悬案.疑案的产生有着主、客观等诸多方面的原因,从而使得疑案的产生具有必然性甚至普遍性.但是,通过分析疑案产生的具体原因可以在一定程度上减少疑案的产生,从而理清侦查思路,提高破案效率.     

婚姻中“七年之痒”的进化因素

20世纪70年代末80年代初,中共中央、国务院提出,要普遍提倡一对夫妇只生育一个孩子。在此情况下,计划生育政策一度抽紧。地方政府最终把"提倡"当作"政治任务"来抓,基本只准生一个孩子。这就形成了国家生育政策与家庭个人生育需求之间的重大反差。从而也就出现了于1985后离婚率的逐步大幅度攀升的社会现象,引发了社会界、学术界的关注和讨论,"七年之痒"的西方概念由此也引进到了中国,并分析和讨论到至今。     

让文明成为城市的传承基因——陕西省宝鸡市创建全国文明城市纪实

陕西省宝鸡市是炎帝故里，周秦文化的发祥地，神农在这里教民稼穑，周公在这里制礼作乐……自古以来，宝鸡文明都是中华文明最重要的组成部分。最近十多年，宝鸡市将创建全国文明城市作为全市科学发展的一项战略任务常抓不懈，让文明成为城市的传承基因。