用斑点ELISA方法检测p30确证人类精斑

作者建立了检测精浆特异性抗原p30的斑点ELISA试验方法,确证人类精斑。p30最小检出量为0.4ng。用该法盲测了室温存放1年的生物性斑痕180例,无一例假阳性和假阴性,证明用此法确证人类精斑的敏感性和特异性均优于传统的方法,具有操作简便、快速,检材用量小,结果准确等优点。     

抗人同种异型G2m(23)单克隆抗体研制及特异性鉴定

本文用快速液相色谱（FPLC）从G2m（23）阳性人血浆中纯化出IgG2蛋白，免疫BALB/c小鼠，建立了一株分泌抗人G2m（23）单克隆抗体的细胞株，定名为2G8。经抑制ELISA，双抗体ELISA及斑点ELISA分析，证明2G8抗体具有G2m（23）单一特异性。     

ELISA检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

<正> 1978年美国Sensabaugh分离出精浆特异蛋白P30,并成功的制备出相应的抗P30血清。1987年我国也研制出抗人精浆特异蛋白P30血清,并应用该种抗血清建立了几种琼脂扩散和电泳方法鉴定人精斑。由于人精液中P30含量不高,平均为1.52±0.676mg/ml,鉴定微量精斑存在困难。为了更有效的提高方法的灵敏度。我们建立了鉴定微量人精斑的ELISA固相P30抗体法,现报告如下。     

应用重组猪生殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白为抗原建立I-ELISA检测方法的研究

用重组杆状病毒表达的猪生殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)N蛋白作为抗原,建立了诊断猪生殖和呼吸综合征(PRRS)的I-ELISA,与IDEXX公司试剂盒检测结果的符合率为97.3%,与间接荧光抗体试验(IFA)的符合率为100%.用该方法检测国内猪血清85份,阳性率为18.8%;能检出PRRS疫苗免疫猪6 d的血清抗体;与猪瘟、伪狂犬病、猪巴氏杆菌病、猪霉形体病阳性血清无交叉反应.     

口蹄疫病毒3A蛋白和FLAG标签的融合表达与血清学分析

通过对比各短肽标签,选择由8个氨基酸组成的FLAG标签弥补口蹄疫疫苗毒株OZK 3A蛋白的93～102位10个氨基酸缺失,原核表达FLAG与3A的嵌合蛋白,并命名为3AF。同时也表达了OZK毒株原始3A蛋白。分别以3A和3AF蛋白作为免疫原免疫6～8周龄雌性BALB/c小鼠,采用ELISA和Western-blot分析融合蛋白的血清学反应活性。结果表明,3A蛋白和3AF蛋白均能在大肠杆菌中有效表达,且主要以可溶性形式表达。纯化的3AF蛋白能与FLAG单抗特异性反应而未能诱导免疫小鼠产生针对该标签的抗体,体现了体外和体内的生物反应性差异。FLAG标签对3A蛋白的表达水平、表达形式等未产生显著影响。本研究为下一步FLAG标记病毒的拯救及其应用奠定了基础。     

猪捷申病毒8型rVP1-ELISA检测方法的建立

为建立猪捷申病毒(PTV)抗体的间接ELISA检测方法,将PTV-8VP1基因克隆至原核表达载体pET-30a中,重组质粒转化大肠杆菌Rosetta表达重组的VP1蛋白。SDS-PAGE及Western-blot分析结果表明,表达的重组蛋白分子质量约为36.2ku,且能被PTV-8阳性血清特异性识别。以纯化的重组蛋白包被ELISA反应板,建立了检测PTV抗体的间接ELISA方法。特异性试验结果表明,重组VP1蛋白与猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪圆环病毒2型和猪瘟病毒阳性血清不发生反应。敏感性试验结果表明血清稀释至1∶800时仍检测为阳性。该方法的批内、批间变异系数均小于10%,表明具有较好的重复性。利用建立的方法对633份临床样品进行检测,阳性率是88.10%。选取58份临床样品与间接免疫荧光方法作比对试验,两者的符合率是94.80%。     

ERCC1和XPF基因在法医学年龄推断中的初步研究

目的探讨ERCC1和XPF基因mRNA及蛋白在不同年龄段健康汉族人群中的表达情况,分析其mRNA和蛋白表达量与年龄之间的相关性,以期为法医学年龄推断提供新的分子生物学指标。方法收集150例不同年龄段健康汉族人群外周血样,梯度离心法分离血浆,Trizol法提取外周血单个核细胞(PBMCs)总RNA;实时荧光定量PCR检测ERCC1和XPF基因mRNA在PBMCs的相对表达量;酶联免疫吸附试验检测ERCC1和XPF蛋白在血浆中的表达量。结果 ERCC1和XPF基因mRNA在不同性别PBMCs的相对表达量均无统计差异(P0.05)。ERCC1和XPF基因mRNA相对表达量在不同年龄段有统计学差异(P0.05),且不同年龄段组间比较亦均有统计学差异(P0.05)。回归分析显示ERCC1和XPF基因mRNA相对表达量与年龄呈负相关,其相关系数(r)分别为-0.578和-0.844;以年龄为自变量(x),以mRNA相对表达量为因变量(Y),其拟合曲线分别为Y=3.3E-5x~2-0.0261x+1.9175(R~2=0.3244,P0.01)、Y=0.0003x~2-0.0459x+2.0439(R~2=0.729,P0.01)。血浆中ERCC1和XPF蛋白表达量在不同年龄段及性别间均无统计差异(P0.05)。结论 ERCC1和XPF基因mRNA在PBMCs的相对表达量随年龄增加而下降,其血浆中蛋白表达与年龄无关,为建立ERCC1和XPF基因与年龄之间的数学模型提供理论学依据。     

小型猪复合麻醉剂对大鼠不同脑区内源性阿片肽含量的影响

从128只Wista大鼠中随机抽取8只为对照组,其余随机均分为5个试验组用以分别测定L-Enk、M-Enk、β-EP、dynA和OFQ的含量,每个试验组又随机均分为麻醉组、恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组3个亚组。采用ELISA测定各脑区内源性阿片肽的含量。结果显示,腹腔注射XFM2mL/kg后,麻醉组,大脑皮层和丘脑内L-Enk、M-Enk、β-EP和dynA含量均显著增加(P0.05或P0.01),海马内L-Enk、M-Enk和β-EP含量均显著增加(P0.05或P0.01),丘脑内OFQ的含量显著降低(P0.01);恢复Ⅰ组和恢复Ⅱ组上述各脑区内L-Enk、M-Enk、β-EP、dynA和OFQ的含量均显著恢复(P0.05);麻醉全过程中,小脑和脑干内5种内源性阿片肽的含量均无显著变化。结果表明,XFM对不同脑区内源性阿片肽的影响可能是其产生全麻作用的重要机理之一;XFM的中枢麻醉作用可能与增加大脑皮层和丘脑内L-Enk、M-Enk、β-EP和dynA,海马内L-Enk、M-Enk和β-EP的含量,同时降低丘脑内OFQ的含量有关。     

猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA检测方法的建立及应用

利用PCV2-Cap蛋白中和性单克隆抗体建立了一种检测猪血清中PCV2中和抗体的阻断ELISA方法.用该方法与免疫过氧化物酶单层细胞试验对353份试验猪血清样品进行平行检测,结果两种方法的符合率为96.0%;该方法的敏感性为97.9%,特异性为92.4%,且与其他几种猪病毒参考阳性血清无交叉反应.该阻断ELISA与血清中和试验的检测结果呈显著正相关(r=0.997 0),其敏感性还优于血清中和试验.用阻断ELISA对PCV2灭活疫苗免疫与攻毒试验猪血清样品进行检测,结果显示,疫苗接种后第2周就能检测到PCV2中和抗体,4周后阳转率达100%.另外,用该方法对东北三省不同地区送检的703份血清样品进行检测,结果阳性检出率为73.0%.表明,东北三省猪场中的PCV2感染率较高,危害严重.     

以免疫活性串联片段FB为抗原检测FMDV抗体的间接ELISA方法

将口蹄疫病毒免疫串联片段FB克隆至原核表达载体pBAD/TOPO中,得到重组质粒pBAD-FB,将此重组质粒转化到受体菌TOP10中,以不同浓度的阿拉伯醛糖进行诱导,并在不同诱导时间进行采样,经处理后做SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果发现以终浓度为0.02g/L的阿拉伯醛糖进行诱导,4h后表达量可达高峰,其大小约为26ku,扫描结果显示,FB融合蛋白的表达量占细菌总蛋白的28.9%,能与抗FMDV抗体发生特异性反应,融合蛋白以包涵体和可溶形式存在。将融合蛋白的可溶性组分用500g/LNi-NTA树脂过柱纯化后作为包被抗原,成功地建立了检测血清中FMD抗体的间接ELISA方法。融合蛋白的最佳包被浓度是40μg/mL;标准阳性血清的最适稀释倍数为1∶160;最佳封闭液为50g/L脱脂奶粉和PBS;最佳封闭时间为1h。用建立的ELISA方法对采集的118份样品进行检测,并与全病毒包被抗原ELISA、间接血凝诊断试剂盒和UBIVP1抗体检测ELISA试验盒的检测结果比较,证明所建立的方法具有良好的特异性、敏感性和可重复性。