Implementation of a robotized real-time PCR setup for the use of the Quantifiler™ Human DNA Quantification Kit

Human DNA quantification occupies a central role within the DNA analytic process of forensic casework samples as DNA quantification results have an important impact on the quality of the short tandem repeat data. Manual processing for the setup of quantification reactions can be time consuming and labor intensive. Therefore automation of quantitative real-time PCR setup was an important component of our DNA-analysis automation concept. Here we show the implementation of a robotized setup for the Quantifiler™ Human DNA Quantification Kit.     

应用SEM/EDX和ICP-AES检测元素成份判定致伤工具

目的应用扫描电镜/能谱联合分析仪(Scanning electron microscopy & Energy dispersive X-ray apparatus SEM/EDX)和电感耦合原子发射等离子光谱(inductively coupled plasma-atom emission spectrometer ICP-AES)对金属致伤工具本身及所致创口残留物元素成分分析,探讨两者在推断认定此类工具的应用条件及价值.方法镀层和普通铁质工具在乳猪皮肤各致创5例,SEM/EDX对创口内遗留金属颗粒元素检测;用标准样品检测实验方法的精确度;普通铁质工具于刀背、刀刃处各取5个样本,ICP-AES测定元素成分与含量.结果镀锌工具所致创口中存在单一含有锌的金属颗粒,镀黄铜工具则同时含有锌和铜,未发现其它元素;不锈钢或普通铁质菜刀创口中,发现同时含有铁、铬、硅或铁、锰、硅的颗粒;除5号菜刀外同一把铁质菜刀在刀刃、刀背处元素含量无明显差别;ICP-AES分析表明不锈钢菜刀之间在铬、锰、硅、铜、钼和5号刀背部以及其他铁质菜刀在锰、硅元素含量差别具有显著意义,5号刀刃部锰、硅、钼、钛、磷、硫、镍元素RSD明显升高.结论SEM/EDX可以通过创口的检测对金属致伤工具进行种类的推断认定,ICP-AES则可在同种类致伤工具中进行相对同一的判定有应用价值.     

尿中异丙嗪及其代谢物含量硅藻土萃取紫外导数光谱测定法

目的建立尿中异丙嗪原体及其代谢物异丙嗪亚砜的提取测定方法。方法取尿直接倒入硅藻土柱中，用二氯甲烷洗脱，收集洗脱液50℃水浴挥干。剩余物用3．0ml 0．05mol／L硫酸溶解。加入锌粉沸水浴加热，放冷，测定二阶导数光谱。结果异丙嗪亚砜和异丙嗪萃取率均达90％以上，线性范围0．5～5．0μg／ml。结论该方法操作简便，提取率高，重现性好，结果可靠。     

GC/MS和GC法定性定量分析可卡因

目的建立用于可卡因案件检验鉴定的GC和GC/MS定性、定量分析方法。方法通过选择和优化,建立GC、GC/MS法检验可卡因的最佳分析条件;用分别含0.6mg/ml地西泮为内标的0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00、1.20mg/ml可卡因标准品乙醇液,考察线性范围和方法检测限。结果分析方法线性方程:GC/FID,Y=1.055X-0.0021,R2=0.9999,GC/NPD,Y=0.556X-0.0016,R2=0.9996;可卡因检测限:GC/FID法10ng,GC/NPD法2ng;分别以所建GC/FID、GC/NPD分析方法和内标法对案件中缴获的可卡因毒品进行定量分析,结果为72%±2.3%,且两方法定量重现性良好。结论本文所建方法可以用于可卡因涉毒案件的检验鉴定。     

尿液、血液中γ-羟丁酸的气质联用法分析

目的为尿液、血液中γ-羟丁酸(gamma-hydroxybutyricacid,GHB),γ-羟丁酸内酯(gamma-butyrolactone,GBL)和1,4-丁二醇(1,4-butanediol,1,4-BD)的鉴定提供方法和依据。方法100μl尿液或血液以GHBd6为内标,经乙酸乙酯提取、BSTFA衍生化后,用GC／MS法分析。结果测尿液中内源性GHB的线性范围是20-800ng／ml,R2=0.9995,最低检出限为10ng／ml(S／N≥3);测尿液、血液中外源性GHB的线性范围为5-60μg／ml,R2分别为0.9999和0.9928。相对回收率为99％-104％。以所建方法测定了健康志愿者尿液中内源性GHB含量,并考察了健康受试者外源性GHB的代谢情况。结论所建方法准确、便捷、省时、选择性好,适用于法医毒物学鉴定。     

嗜尸性苍蝇mtDNA中COⅡ基因序列检测

目的利用线粒体DNA(m tDNA)上细胞色素氧化酶辅酶Ⅱ(COⅡ)中635bp基因序列,解决嗜尸性苍蝇及其卵和幼虫种类鉴定的难题。方法随机采集放置在呼和浩特地区室外草地家兔尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、苍蝇腹中的卵。利用Chelex方法提取上述苍蝇m tDNA;通过Perk in-E lm er 9600扩增仪进行PCR扩增;琼脂糖水平电泳和银染显色技术进行扩增结果检测;PCR胶回收试剂盒纯化;AB I 377测序仪测序;DNAMAN 4.0序列分析软件,进行序列比对,截取等长度片段;MEGA2.1软件包进行序列分析和构建系统发育树。结果上述嗜尸性苍蝇m tDNA上COⅡ基因序列在双翅目嗜尸性苍蝇的种内差异均数小于1%,种间差异均数大于3%,成虫与幼虫、卵无明显差异。以此能够根据COⅡ序列差异判断两个个体是否同种。然而,对于亲缘关系非常接近的铜绿蝇和丝光绿蝇来说,由于二者的种内、种间进化分歧均数非常接近,运用上述两个片段则很难区别。结论m tDNA上COⅡ序列分析能有效地对绝大多数嗜尸性苍蝇进行种类鉴定。该检测方法快速、简便和精确,能作为法医鉴别嗜尸性苍蝇种类的依据。     

全血中苯骈二氮杂类药物的胶束电动色谱法分析

目的建立用固相萃取胶束电动毛细管色谱法测定人体全血中苯骈二氮杂艹卓类药物的方法。方法全血以Oasis小柱提取,以克仑特罗为内标,采用未涂层毛细管(75μmID×50.2cm,有效分离长度为40cm),缓冲液为30mmol/LSDS→15mmol/L硼砂→15mmol/L磷酸盐(pH8.2)→18%甲醇。进样条件:压力进样0.5psi×10s,分离电压为25kV,柱温25℃,检测波长为230nm。结果本法分离效率高,9种苯骈二氮杂艹卓类药物的最低检测浓度为5～50ng/ml;血药浓度的线性范围为0.02～1.6μg/ml,日内、日间精密度<12%。结论本法简便、高效、可靠。     

荧光标记复合扩增毛细管电泳法在SNP分型中的应用

目的采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法，对辽南地区汉族人群13个SNP进行等位基因频率调查，并评价其法医学应用价值。方法选择13个双等位基因SNP，应用荧光标记片段长度差异等位基因特异性复合扩增SNP分型方法，对辽南地区汉族人群进行群体调查。结果每个SNP纯合子为单一产物峰，杂合子则为长度不同的两个产物峰。不同位点扩增产物长度不同，根据产物长度和产物峰数量进行SNP分型，其结果与直接测序完全一致。同时获得辽南地区汉族人群13个SNP等位基因频率。结论采用荧光标记复合扩增毛细管电泳法进行SNP分型，方法简单实用，在法医学个人识别领域具有较高的应用。     

中国土家族人群头面部软组织厚度的测量

目的测量中国土家族人群头面部软组织厚度。方法156名中国湖南西部土家族成年男女(男80,女76),经拍摄头面部侧位X线片,选取正中矢状面5个部位上的10个点,测量其软组织厚度,并对所得数据进行统计学处理。结果中国土家族成年人群头面部10个点的软组织厚度测量值,男性在(3.46±0.09)mm~(9.11±0.14)mm范围,女性在(3.29±0.16)mm~(9.05±0.18)mm;除鼻下点外(男性9.06mm±0.15mm,女性9.02mm±0.19mm),男女性之间各点均有显著性差异,且下面部软组织厚度较上面部大。结论土家族成年男女性头面部软组织厚度存在着性别差异和年龄差异。     

致心律不齐性右室心肌病的研究进展

致心律不齐性右室心肌病是以右室心肌被纤维脂肪取代为特征的一种原因不明的心肌病,通常表现为局限性右室病变。亦可弥漫性进展,侵犯左室,最终导致左心功能不全。近年来,致心律不齐性右室心肌病导致心源性猝死已越来越引起人们的注意。在法医实际工作中,相关研究报道较少。本文综述了致心律不齐性右室心肌病的发病病因、发病机理、病理变化、临床特点和鉴别诊断等方面的研究进展。