旋毛虫肌幼虫抗原的SDS-PAGE及EITB分析

本文应用SDS-PAGE及酶联免疫电转移印迹(EITB)技术对旋毛虫肌幼虫可溶性抗原进行了初步分析。结果SDS-PAGE可显示15条多肽带。感染旋毛虫猪血清可特异性地识别6种多肽抗原。本项研究为进一步分析、分离旋毛虫功能性抗原打下了基础。     

检测牛轮状病毒抗体的双抗原夹心ELISA方法的建立

为建立一种检测牛轮状病毒（BRV）抗体的双抗原夹心ELISA方法,本试验根据NCBI公布的BRV参考毒株NCDV序列,设计针对牛轮状病毒VP6基因的引物,用载体pCold-TF表达VP6蛋白,将表达的VP6蛋白作为捕获抗原,HRP标记的VP6蛋白作为检测抗原,建立检测BRV血清抗体的双抗原夹心ELISA方法。特异性试验表明该方法特异性良好;敏感性试验显示,该方法可检测到血清最大稀释倍数为1∶1 600;重复性试验表明,批间变异系数在4.21%～7.24%之间,批内变异系数为在1.35%～3.52%之间,重复性良好;临床样品检测表明与微球间接凝集方法检测结果符合率为94.4%。结果表明,建立的检测BRV血清抗体的双抗原夹心ELISA方法适用于临床样本的检测,可为牛轮状病毒的快速诊断提供技术支持。     

抗鹅细小病毒NS1蛋白单克隆抗体的制备及对应抗原表位区的分析

以鹅细小病毒非结构蛋白NS1(GPV-NS1)的重组质粒pcDNA3.1-GPV-NS1及纯化的重组蛋白GPV-NS1为抗原,分组免疫4～6周龄的BALB/c鼠,免疫3次后,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,利用间接ELISA方法筛选阳性杂交瘤细胞株,并研究其部分生物学特性.结果共获得6株能稳定分泌特异性抗体的阳性杂交瘤细胞株.单克隆抗体亚型鉴定结果显示,2株为IgG2a型,4株为IgM型,轻链均为κ链.用制备的单克隆抗体对分段表达的NS1蛋白进行免疫印迹分析,结果鉴定出3个抗原表位区,分别位于NS1蛋白的第453～514 aa、485～542 aa、533～598 aa区段.证实,6株杂交瘤细胞在体外长期培养能稳定地分泌抗GPV-NS1单克隆抗体.     

猪旋毛虫病时间分辨荧光免疫层析试纸条的研制

应用旋毛虫混合排泄分泌蛋白（ES）和家兔IgG分别偶联铕（Eu）纳米颗粒（EuNPs）制备2个荧光探针,即EuNPs-ES探针和EuNPs-Rabbit IgG探针。将小鼠抗猪IgG与山羊抗家兔IgG分别包被于检测线与质控线上,制备时间分辨荧光免疫层析试纸条。采用15头不同剂量人工感染旋毛虫猪的全血评估研制的试纸条性能。结果显示,用试纸条检测感染200、400、1 000、10 000条旋毛虫肌幼虫的猪全血样品时,结果均为阳性。而使用集样消化法消化对应的猪膈肌样本时,低剂量（200条）未全部检出。以上结果表明,本研究中建立的时间分辨荧光免疫层析试纸条方法相比于集样消化法具有更高的灵敏度,且操作简便,仅需5～10 min即可出结果,本研究成功建立了一种用于现场快速检测旋毛虫病的方法。     

牛带绦虫8ku蛋白基因家族cDNA的克隆和序列分析

根据带科绦虫8ku蛋白基因序列设计引物,采用RT-PCR方法对牛带绦虫六钩蚴总RNA进行扩增,扩增产物经胶回收试剂盒纯化,与pGEM-T Easy载体连接,转化大肠杆菌JM109感受态细胞,筛选含有阳性重组DNA的克隆,对阳性克隆进行测序。使用DNAStar和MAGE 4生物学软件对基因克隆进行序列分析和进化树分析。结果显示,成功克隆了5种牛带绦虫8ku蛋白基因家族新成员,cDNA序列完整开放阅读框的大小为258bp,TSA8ku-1cDNA为优势克隆。序列同源性分析表明,各cDNA克隆氨基酸序列之间的差异性为1.2%～14.2%,与猪带绦虫诊断抗原TsRS1群(组)成员同源,相似性为85.9%～88.9%。由此可以推测,克隆的5种8ku蛋白基因家族成员可能是牛带绦虫病的重要诊断抗原候选基因。     

内异止痛方直肠用药对子宫内膜异位症痛经患者血清癌抗原125和血管内皮生长因子的影响

目的 观察内异止痛方直肠用药治疗子宫内膜异位症痛经的临床疗效及其对血清癌抗原125（cancer antigen 125, CA125）、血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）的影响。方法 将60例子宫内膜异位症痛经患者随机分为治疗组与对照组各30例。治疗组予内异止痛方灌肠,对照组予散结镇痛胶囊口服。两组均以15 d为1个疗程,连续治疗3个疗程,随访3个月后评估临床疗效及治疗前后CA125、VEGF的变化。结果 两组治疗后血清CA125、VEGF水平均较治疗前明显下降（P<0.05）,治疗组CA125、VEGF水平下降程度明显大于对照组（P<0.05）;治疗组临床疗效优于对照组,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论 内异止痛方直肠用药通过降低血清CA125和VEGF水平治疗子宫内膜异位症痛经。     

塞内卡病毒A结构蛋白T细胞抗原表位的筛选与鉴定

塞内卡病毒A (Senecavirus A)是小RNA病毒科塞内卡病毒属的唯一成员,仔猪感染后死亡率高达30％～70％,给全球养猪业造成了巨大的损失.开展抗原表位的研究对于病原学研究、免疫监测、疾病诊断及表位疫苗设计具有重要意义,细胞免疫作为清除胞内微生物最有效的防御手段,在免疫应答中起到了十分重要的作用.为了筛选塞内...     

抗原表位鉴定方法的研究进展

抗原表位作为具有重要生物学和免疫学的功能基团是制备单克隆抗体、疫苗研制、诊断试剂和药物开发等方面研究的靶标物质.对抗原表位的深入发掘和研究有助于新型药物开发、研发诊断制剂及方法和设计新型疫苗.随着分子信息学、基因组学和蛋白质组学等交叉学科的快速发展,针对预测和筛选不同抗原表位发展了一系列全新的抗原表位方法和模型,极大简...     

多房棘球绦虫主要卵抗原重组蛋白的制备及其在免疫诊断中的初步应用

通过对多房棘球绦虫(Echinococcus multiloculais)主要卵抗原(EmMEA)基因的表达、抗体制备及血清ELISA检测,初步评价其作为诊断抗原的价值.根据WormBase数据库EmMEA基因序列设计引物,利用RT-PCR扩增EmMEA基因并构建重组表达质粒,诱导表达、纯化重组蛋白EmMEA;制备Em...     

武汉汉族人群MICA基因第5外显子STR遗传多态性

本文对武汉汉族群体M ICA-STR基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品武汉地区235例汉族无关健康个体EDTA抗凝血由武汉同济医院血库提供。所有样品采用Chelex-100法提取DNA[1]。1.2引物M ICA-STR分型采用M izuki等[2]报道的引物,其中上游引物5′端用6-FAM荧光染料标记,由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。1.3 PCR扩增及产物检测M ICA-STR扩增反应总体积为10μl,内含200μmol/L dNTPs,50mmol/L KC l,10mmol/L Tris-HC l(pH8.3),1.5mmol/LMgCl2,5~10ng模板DNA,0.2μmol/L每条引物,0.5U Ampl…