猪旋毛虫不同发育时期虫体49 ku ES抗原基因的克隆与序列分析

根据GenBank中已登录的猪旋毛虫49 ku ES抗原基因序列设计了1对引物,用SDS裂解液配合蛋白酶K方法从猪旋毛虫不同发育时期(成囊前期幼虫、肌幼虫、成虫)虫体中提取总RNA,用RT-PCR方法扩增49 ku ES抗原基因,将目的基因定向克隆入pMD18-T载体,转化大肠埃希氏菌TG1。用PCR、限制性内切酶EcoRⅠ和BamHⅠ进行单、双酶切鉴定,阳性质粒的测序结果表明,成功克隆了猪旋毛虫不同发育时期虫体49 ku ES抗原基因。序列分析结果显示:49 kuES抗原基因大小为948 bp,基因的保守性很强,序列同源性比较高,不同发育时期之间的差异很小。     

猪瘟病毒E2蛋白主要抗原区编码基因的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用RT-PCR扩增了猪瘟病毒(CSFV)兔化弱毒疫苗株(C株)的E2蛋白主要抗原区(tE2)编码区,并定向克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组表达载体pPROEX-tE2,将其转化大肠杆菌DH5α菌株,经IPTG诱导,tE2蛋白获得高效表达;经检测,该重组蛋白能被CSFV C株抗血清识别.用纯化的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,取其脾淋巴细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,获得了1株稳定分泌抗tE2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经检测,该单克隆抗体能够与CSFV C株和石门株以及杆状病毒表达的重组E2蛋白发生特异性反应.推测,该单克隆抗体是针对CSFV E2蛋白的一个保守线性表位.     

健脾益肾方合西药治疗帕金森病32例

目的:观察自拟健脾益肾方联合西药治疗帕金森病(Parkinson''s disease,PD)的临床疗效及安全性.方法:选择61例PD患者,随机分为对照组29例、治疗组32例,两组均常规抗PD治疗,治疗组加用中药健脾益肾方,连续治疗8周.两组进行治疗前后H-Y分级及PD统一评分量表的第二分量表(UPDRS Ⅱ)评定临床疗效.结果:治疗组治疗前后UPDRS Ⅱ评分及H-Y分级有明显改善(P＜0.05,P＜0.01),与对照组比较,治疗组疗后UPDRS Ⅱ评分有显著性差异(P＜0.05),同时不良反应少于对照组(P＜0.05).结论:健脾益肾方对PD疗效确切,且可以减少西药的不良反应.     

抗原修复法和固定液pH值对切创皮肤免疫组化染色的影响

目的比较不同抗原修复方法对不同pH混合福尔马林固定液固定的切创皮肤的免疫组化染色效果。方法小鼠皮肤切创后3d取材,分别用pH为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0的混合4%福尔马林固定液固定,经高压锅、微波、胰蛋白酶、胃蛋白酶、微波+胰蛋白酶法对抗原修复,观测caspase-3,caspase-6,caspase-7,IL-8,IL-10的免疫组化染色(SABC法)效果。结果热修复法阳性细胞率高于蛋白酶修复法,高压修复法阳性细胞率略高于微波修复;高压修复法的脱片现象高于微波修复,胃蛋白酶修复脱片高于胰蛋白酶修复;微波+胰蛋白酶双修复法阳性细胞率最高,不发生脱片现象;固定液pH值为7.0和8.0时,阳性细胞率最高,染色效果最好。结论pH7.0和8.0混合福尔马林固定液固定的切创皮肤,经微波+胰蛋白酶法修复抗原,免疫组化染色效果最佳。     

水疱性口炎病毒糖蛋白基因主要抗原表位区在大肠埃希氏菌中的高效表达及纯化

利用PCR技术扩增编码水疱性口炎病毒印第安纳型(VSV-Ind)糖蛋白基因的主要抗原表位区,通过引入其两端的EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点,定向插入到pET30c质粒T7启动子下游的多克隆区,构建重组质粒pET30c-vsvG,并转化至宿主菌BL21(DE3)株中。用1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳表明,重组蛋白在大肠埃希氏菌中得到了高效表达,经过4 h表达即可达到高峰;融合蛋白的相对分子质量为57 ku。重组蛋白含有六聚组氨酸尾,主要以包涵体形式存在,Ni柱纯化后的蛋白经Western-blotting鉴定,具有良好的抗原性和特异性。     

编码中国大陆株日本血吸虫副肌球蛋白C端蛋白基因的克隆和表达

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）从中国大陆株日本血吸虫成虫ｃＤＮＡ文库中扩增到一编码血吸虫副肌球蛋白Ｃ端蛋白的ＤＮＡ克隆，并把该ＤＮＡ进一步亚克隆到ｐＴｒｃＨｉｓＡ载体上进行表达。表达产物的分子量为３３ｋｕ，它和纯化的中国大陆株日本血吸虫成虫副肌球蛋白一样，都能被抗曼氏血吸虫副肌球蛋白的单克隆抗体所识别。说明该重组抗原具有血吸虫副肌球蛋白的抗原性，可被进一步应用于血吸虫病的免疫试验     

H5亚型禽流感病毒反应原性差异及ELISA检测方法的研究

在获得禽流感病毒多克隆抗体及H5亚型特异性单克隆抗体的基础上,建立了H5亚型特异性抗原捕捉ELISA检测方法。通过分析不同单克隆抗体与不同禽流感毒株的反应性差异,筛选高特异性和高敏感性的H5亚型单克隆抗体。优化反应条件,确定包被抗体、检测抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,进行敏感性、特异性、重复性及稳定性分析,并与斑点ELISA、H5N1多重RT-PCR或病毒分离鉴定的结果相比较,同时使用该方法对野外样品进行了检测。结果表明,该方法敏感、特异,具有良好的重复性和稳定性,可用于检测临床样品、鸡胚培养物及细胞培养物中的H5亚型禽流感病毒。     

猪旋毛虫病疫苗的区域试验

在河南省某县一个猪旋毛虫病高发流行区进行了旋毛虫成虫可溶性抗原疫苗及灭活新生幼虫疫苗的区域试验。免疫前用镜检法抽检某自然村商品猪21头，查出有虫猪4头，感染率达19.05％。成虫可溶性抗原疫苗每头猪腹腔注射免疫0.5mg，间隔10天作2次免疫；新生幼虫疫苗每头猪腹腔注射10万条，同样间隔10天作2次免疫。两种疫苗分别免疫猪86及44头。免疫后4～7个月内剖杀抽检免疫效果。共抽检未免疫自然感染对照猪49头，查出有虫猪12头，感染率达24.49％；抽检成虫可溶性抗原疫苗免疫猪33头,查出有虫猪2头，占6.06％，保护率达75.26％；抽检灭活新生幼虫疫苗免疫猪17头，查出有虫猪1头，占5.88％，保护率达75.99％。区域试验表明两种疫苗均具有很好的免疫保护作用。     

禽腺病毒T型琼脂扩散抗原的研制及应用

研制了禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原,检测了该抗原的效价和特异性,并用该抗原对人工感染鸡沉淀抗体的变化以及现地血清样本进行了检测.结果显示,该抗原不与其他主要禽类病原体阳性血清反应,可与1:8稀释的禽腺病毒工型阳性血清反应.对3月龄SPF鸡进行人工感染后,第7 d可检测到沉淀抗体,血清中的沉淀抗体可持续3个月以上.抗原在-20℃条件下可保存2年.经对现地38个鸡场进行检测,其中阳性场14个,阳性率为36.84%,表明我国的禽腺病毒感染率很高.结果证实,研制的禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原敏感、特异,可用于禽腺病毒感染的血清学检测.