人类精子ABO血型抗原的间接免疫荧光研究

应用间接免疫荧光技术,对40份精子标本进行 ABO 血型抗原检测。A 型人精子上存在 A 抗原;B 型人精子上存在 B 抗原;AB 型人精液中,一部分精子带有 A 抗原,另一部分精子带 B 抗原。各血型人的精子均有 H 抗原。精子血型抗原为本身所固有,并非来源于精浆。不同人的精子血型抗原含量各不相等,与其供体是否为分泌状态或强弱无直接关系。精子 ABO 血型抗原主要存在于精子的颈部和顶体等区域。     

唾液血型抗原分泌时限变化及温度对抗原活性的影响

探讨人唾液中ABH血型抗原不同时限的分泌量,以及保存温度对血型抗原活性的影响。应用时间决定性荧光免疫测定法（TR．FIA）对O型分泌型10例和非分泌型5例人在不同条件下唾液中H抗原量进行检测。唾液血型抗原的分泌量随时间而波动,进餐后降低明显,但不干扰分泌型的判定。37℃保存48h抗原活性完全丧失,6℃保存1周抗原活性几乎没有变化。结果表明,唾液分泌时段不影响分泌型判定,将唾液制成斑痕可长期保存样品。     

旋毛虫单克隆抗体特性鉴定

将两株抗旋毛虫单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞（Ｄ４,Ｅ２）所分泌的ＭｃＡｂ,经纯化后电泳分析,其重链分子质量为５５ｋｕ,轻链分子质量为２９ｋｕ,符合ＩｇＧ抗体的特点。两株ＭｃＡｂ与旋毛虫阳性猪血清所针对的旋毛虫抗原决定簇相同,都不与猪的其它寄生虫发生交叉反应,与抗原的相对亲和力Ｅ２＞Ｄ４,ＭｃＡｂ亲和层析纯化抗原的分子质量为４９ｋｕ,经免疫斑点染色证明为糖蛋白。     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组抗原的复性与纯化

应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０μｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨＧＳＳＧ的ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２～５ｍｇ／ｍＬ,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体、多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上述透析液,蛋白浓度０．１ｍｇ／ｍＬ,以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ６ＦＦ分子筛凝胶层析,出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰进行ＤＥＡＥＳｅｐｈａｒｏｓｅ离子交换层析,用含５０ｇ／ＬＮａＣｌ、ｐＨ９．０的ＴｒｉｓＨＣｌ缓冲液洗脱,亦出现２个主峰,收集有免疫活性的第１峰。ＳＤＳＰＡＧＥ显示该峰为单一蛋白条带,蛋白纯度大于９０％。夹心ＥＬＩＳＡ检测免疫活性,每１ｍｇ蛋白的效价大于６×１０５。     

羊脑多头蚴抗原的等电聚焦电泳分析

采用等电聚焦电泳(IEF)技术,对自然感染绵羊的脑多头蚴的头节可溶性抗原、囊壁可溶性抗原和囊液抗原进行了分析.IEF电泳后,分别用考马斯亮蓝R-250法染蛋白质,PAS法染多糖,醋酸α-萘酯-坚固蓝法染酯酶同工酶,Nile's蓝法染脂.蛋白质染色后头节可溶性抗原显带42条,等电点(pI)4.89～8.72;囊壁可溶性抗原显带50条,pI 4.80～8.69;囊液抗原显带39条,pI 4.80～9.88.多糖染色后头节可溶性抗原显带22条,pI 4.04～8.30;囊壁可溶性抗原显带19条,pI 4.82～9.92.酯酶同工酶染色后头节可溶性抗原显带7条,pI 4.93～7.22;囊壁可溶性抗原显带7条,pI 4.93～6.91;囊液抗原显带13条,pI 5.23～9.70.脂染色后头节可溶性抗原显带3条,pI分别是4.03、5.69和8.63;囊壁可溶性抗原显带2条,pI分别是4.03和8.44;囊液抗原显带3条,pI分别是5.01、5.12和5.27.     

IBD疫苗抗原量对鸡体液免疫应答的影响

将含不同抗原量的IBD油乳剂灭活疫苗免疫17日龄雏鸡,结果IBD-ND二联苗和IBD浓缩苗免疫组鸡的抗体水平上升较快,免疫11d时免疫组抗体水平显著高于免疫对照组(P＜0.01);3个免疫组鸡的攻毒保护率基本一致,但IBD原苗组鸡的腔上囊损伤最为严重.试验结果表明适当增加IBD抗原量能刺激鸡早期体液免疫应答,提高特异性免疫力.     

胸膜肺炎放线杆菌体内表达基因的筛选

利用体内诱导抗原技术对胸膜肺炎放线杆菌(APP)体内表达的基因进行了初步筛选.将收集到的5份感染了APP1型的猪血清混合,分别用体外培养的APP1和大肠杆菌BL21(DE3)的全菌及全菌裂解物进行吸附,用ELISA方法检测吸附效果,经吸附后血清D450nm分别由原来的0.927和0.239降低为0.196和0.078.同时,将APP1基因组DNA以Bsp143 Ⅰ进行酶切,回收500～2000 bp的片段,与pET30a/b/c载体连接,构建了APP1基因组质粒表达文库,库容量(CFU)为2.0×105.用吸附后的血清通过菌落原位免疫杂交筛选该基因组表达文库,从3 000个菌落中获得了12个阳性克隆.     

弓形虫排泄分泌抗原研究的新进展

简要介绍了弓形虫排泄分泌抗原的制备及其组分,对近几年国内外排泄分泌抗原在免疫功能及应用方面的研究进展加以综述,并对其在疫苗研制上的成果和前景进行了探讨,旨在为弓形虫病疫苗的研制提供参考。     

应用ELISA检测囊虫病猪循环抗原的研究

本项研究应用McAb以ELISA双抗体夹心法检测以免疫复合物(IC)形式存在于囊虫病猪血清中的循环抗原(CA)。用3.5％聚乙二醇沉淀猪血清中的IC,再经沸水浴破坏IC中的抗体,可以明显提高CA的检出率。病猪血清CA阳性率为100％(113/113),与棘球蚴和细颈囊尾蚴感染的猪血清有交叉反应。     

杆状病毒表达的猪传染性胃肠炎病毒钉状糖蛋白在其血清学诊断上的应用

利用从猪传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）Ｍｉｌｅｒ株（Ｍ５Ｃ）克隆建立的一株重组杆状病毒（Ｒ２－２）表达的重组ＴＧＥＶ钉状糖蛋白（Ｓ），建立了一种阻断酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）来检测猪群抗ＴＧＥＶ抗体。试验表明，用重组病毒Ｒ２－２接种ｓｆ９细胞（ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）所表达的重组蛋白量在接种后第７２ｈ达到最高值；该重组蛋白能与抗ＴＧＥＶＳ蛋白Ａ位点的单克隆抗体特异性结合。用阻断ＥＬＩＳＡ检测６８份来自无ＴＧＥＶ感染或ＴＧＥＶ（Ｐｕｒｄｕｅｌ５）免疫的仔猪或母猪血清，结果与ＴＧＥＶ蚀斑减数试验完全相符，灵敏度和特异性均为１００％。同时检测来自ＴＧＥＶ试验免疫猪、美国部分地区猪群、我国进口猪以及我国国内猪群血清６２７份，阳性检出率分别为８２．６１％、６１．６２％、５８．３３％和２９．１０％；用中和试验（微量中和试验或病毒蚀斑减数试验）检测的ＴＧＥ血清抗体阳性率分别为８０．８７％、５９．６０％、５６．１１％和３０．６０％，两种方法对抗ＴＧＥＶ抗体的检出率没有显著差异。