禽脑脊髓炎琼脂扩散沉淀抗原制备与应用的研究

应用禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）ＶａｎＲｏｅｋｅｌ株和内蒙古禽脑脊髓炎（ＡＥ）自然病鸡分离毒株（ＡＥＶ－ＮＨ９３７株）分别接种鸡胚，制出ＡＥ琼扩沉淀抗原。经实验室和部分鸿场应用结果表明，该抗原具有良好的特异性。抗原效价为１：３２，可检出不同日龄、品种和不同发病期的人工感染鸡和自然发病鸡血清中的ＡＥ抗体，结果可靠，方法简便，可以推广应用。     

传染性腔上囊病病毒VP3蛋白模拟表位的筛选

为了研究传染性腔上囊病病毒(IBDV)的致病机理及研制有效的IBDV疫苗,利用噬菌体展示技术对IBDV VP3抗原表位进行了筛选。以4株IBDV VP3单克隆抗体HRB-3F、HRB-7B、HRB-7C和HRB-10E作为筛选分子,对噬菌体随机15肽库进行3轮吸附-洗脱-扩增淘洗,从每株单克隆抗体筛选到的噬菌斑中随机挑取20个单克隆噬菌斑,通过间接ELISA和竞争抑制ELISA检测,共选出13个单克隆噬菌斑,经噬菌体gⅢ部分基因的核苷酸序列测定,确定了8个15肽为IBDV抗原表位。这8个15肽在一级结构上没有3个以上连续氨基酸与IBDV Gx(Gen-Bank登录号:AY444873)VP3的氨基酸序列相同,但二级结构上均以β折叠为主,并且与单抗的结合可被VP3蛋白有效地抑制。证实,筛选的是IBDV VP3的模拟表位。     

ELISA、BA-ELISA和IHA检测抗K88ac抗体的研究

本文报告了用自制IgG型兔抗猪IgG、IgA、IgM型抗体,建立ELISA和BA-ELISA方法检测乳汁和血清中IgG、IgA和IgM型抗K_(88)ac抗体,并和IHA检测抗K_(88)ac抗体的方法进行比较,结果表明:BA-ELISA和ELISA方法不仅灵敏度高、重复性好,而且可区分IgG、IgA、IgM型抗K_(88)ac抗体,可作为评价大肠杆菌苗免疫效果和研究大肠杆菌苗免疫机理的手段之一。     

猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间片段的克隆与原核表达

将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白.结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析表明,S基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测表明,分子质量约34ku的融合蛋白具有良好的反应原性.     

犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法的建立

为快速诊断犬恶丝虫病,建立了犬恶丝虫抗体dot-ELISA检测方法,并与阻断试验、交叉反应试验、重复性试验、琼脂扩散试验和平行对照试验进行了比较.结果显示,制备的犬恶丝虫虫体粗制抗原与犬钩虫、犬弓首蛔虫和犬蠕形螨感染犬的阳性血清无交叉反应,检出犬恶丝虫阳性血清的最高抗体效价为11024,重复性好;建立的犬恶丝虫病dot-ELISA诊断方法的灵敏度比琼脂扩散试验和美国IDEXX实验室制备的犬恶丝虫病诊断试剂盒分别高2048倍和48倍.     

多头绦虫抗原特性的研究——绵羊免疫后及感染后的抗体消长规律

用多头绦虫原头节、囊壁、囊液层析纯化抗原及原头节排泄分泌（ＥＳ）抗原对绵羊免疫及攻击感染多头绦虫虫卵后的血清进行ＥＬＩＳＡ检测，观察了血清抗体的消长规律。结果表明，绵羊在感染虫卵后第１周即可检测出血清抗体，感染后３～５周抗体效价达到峰值，一直持续到试验结束；免疫组绵羊在免疫３次后，血清抗体效价迅速升高，第３次免疫后１～２周达到峰值，且抗体水平明显高于虫卵感染组，在攻击虫卵后抗体效价开始下降，但直到试验结束时抗体效价仍维持在较高水平。原头节可溶性抗原免疫组和原头节ＥＳ抗原免疫组血清抗体总体水平要高于囊壁和囊液抗原免疫组，原头节ＥＳ抗原和原头节层析纯化抗原的敏感性、特异性要高于囊壁和囊液层析抗原。试验表明，以上４种抗原可用于ＥＬＩＳＡ检测绵羊免疫及感染后的抗体应答反应。     

一种提高口蹄疫抗原和灭活疫苗热稳定性缓冲液的研制

为提高口蹄疫（FMD）抗原和疫苗的稳定性,采用正交试验设计L18(37),以溶液pH值和氯化钠、氯化镁、磷酸二氢钠、葡萄糖、精氨酸和氯化钙6种组分的质量浓度作为考察因素,以口蹄疫抗原或疫苗在37℃条件下146S抗原降解为0时保存的时间作为评价指标,以PBS(pH值8.0)作为对照,筛选对FMD146S抗原具有热稳定性作用的化学试剂。结果显示：在4℃条件下,用研制的缓冲液重悬的抗原和配制的疫苗可长期保存;在37℃条件下,与PBS比较,FMDV/OM抗原可保存63 d,FMDV/AF-72抗原可保存84 d,疫苗分别可以保存56和96 d,说明该缓冲液对FMDV抗原和疫苗具有很好的热稳定性。另外,该缓冲液配制方法简单,化学试剂易溶解,可用于大规模生产。研制的缓冲液能提高FMD抗原和疫苗在运输和保存过程中的稳定性,为保证FMD灭活疫苗质量提供了技术支撑。     

猪伪狂犬病病毒EP0蛋白单克隆抗体的制备及其应用

本研究使用纯化的His-EP0重组蛋白免疫BALB/c小鼠,在其血清效价达到要求后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,通过ELISA方法筛选获得了3株能够稳定分泌抗EP0蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株2C5、4C6和3B5。经单抗亚型试验鉴定,发现2C5为Ig G2b/κ型,3B5和4C6均为Ig G1/κ型。叠加ELISA结果证明,2C5、4C6和3B5针对EP0蛋白不同的抗原表位。IFA结果表明,2C5和4C6能够与PRV感染的细胞发生特异性反应,而不与PRV-△EP0感染的细胞反应。综上所述,本研究成功制备了3株针对RPV EP0蛋白的单克隆抗体,为进一步研究EP0蛋白功能提供了重要的实验材料。     

免疫磁珠技术和精子抗原研究进展与法医学应用

免疫磁珠技术在生物学领域应用广泛,通过制备精子特异性抗体,并与磁性微球偶联,可达到对精阴混合斑中精子和女性阴道上皮细胞分离。本文简述了免疫磁珠技术的研究进展及磁珠主要制备方法,同时结合精子表面抗原的研究进展,提出磁珠抗体法提取精子DNA的可能性,并展望了磁珠抗体结合技术在法医学应用前景。     

大学生携乙肝抗原就业遭拒案

案情回放原告王某原是北京理工大学的2007届毕业生。2007年4月,经北京理工大学推荐,王某与被告北京某机床研究所签订就业协议书,协议约定：王某到北京某机床研究所就业,本人档案转至北京某机床研究所,户口迁移至北京市密云县溪翁庄镇派出所。同年4月26日,原告王某与被告北京某机床研究所签订全国普通高等学校毕业生就业协议书（以下简称就业协议书）,