血复生浸膏对重型再生障碍性贫血患者骨髓T细胞表面CD28和CTLA4表达的影响

目的:研究血复生对再生障碍性贫血(aplastic anemia,AA)患者骨髓T细胞表面分化决定簇28(cluster of differentiation 28, CD28)和(或)细胞毒T细胞相关抗原4(cytotoxic T cell antigen 4, CTLA4)表达的影响,探讨血复生治疗AA的作用机制.方法:将2006年6月至2008年6月江苏省中医院血液科门诊及住院的30例重型AA患者随机分为两组,治疗组使用血复生加环孢菌素治疗,对照组单用环孢菌素治疗.10名自愿者骨髓为正常对照组.观察时间为3个月,双色免疫荧光法测定治疗组及对照组治疗前后及正常对照组骨髓T细胞表面CD28、CTLA4表达的变化.结果:AA患者治疗前CD28的水平较正常人显著升高,差异有显著性(P<0.05),CTLA4水平有所上升,但差异无显著性(P>0.05).治疗组及对照组CD28水平较用药前显著下降(P<0.05),治疗组较对照组下降更显著(P<0.05).结论:血复生可增强环孢菌素的免疫调节作用,对AA的治疗起到增效作用.     

鸡传染性腔上囊病病毒双夹心ELISA检测方法的建立

通过制备兔抗鸡传染性腔上囊病病毒(IBDV)、小鼠抗IBDV和绵羊抗兔免疫血清,并纯化绵羊抗兔辣根过氧化物酶标记抗体,采用方阵滴定法测定其最佳使用浓度,建立了IBDV双夹心ELISA检测方法.结果显示,包被抗体的最适稀释度为1160,兔抗IBDV的最佳稀释度为1200,酶标记抗体的最佳稀释度为1400.特异性和重复性试验结果表明,该方法特异性强,重复性好,与鸡新城疫、鸡传染性支气管炎和鸡减蛋综合征病毒抗原均不发生交叉反应.对人工感染病例的检测结果表明.建立的双夹心ELISA方法可用于临床快速诊断IBDV.     

伊氏锥虫抗原变异型及其优势代表变异体的分离鉴定

以连续克隆分离的方法,从1株水牛伊氏锥虫中分离到40个克隆群体,从中分离鉴定出18个抗原变异型.经间接免疫荧光试验检测,发现其中2个抗原变异型(即HbTatl.18和HbTatl.15)分别能与约80%和60%克隆群体的血清发生较强的阳性反应,初步确定这2个抗原变异型为该虫株的优势代表变异体.这为伊氏锥虫免疫预防、免疫诊断、分子诊断以及遗传进化等的研究奠定了良好的基础.     

用日本血吸虫重组抗原诊断牛血吸虫病的研究

为寻找可替代虫卵抗原(SEA)用于家畜血吸虫病血清学诊断的重组抗原,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)比较了日本血吸虫23ku膜蛋白大亲水区多肽重组蛋白LHD-Sj23和日本血吸虫SEA检测牛血吸虫病的敏感性和特异性.结果显示,SEA和LHD-Sj23作为诊断抗原对189例血吸虫病牛和92例健康牛的阳性检出率分别为87.8%和90.5%,阳性符合率分别为93.5%和92.4%.两种抗原之间敏感性和特异性均无显著性差异(P0.05).提示,LHD-Sj23重组抗原可替代SEA用于家畜血吸虫病的血清学诊断.     

山羊关节炎-脑炎的研究——琼扩抗原的制备与应用

以山羊关节滑膜细胞增殖CAEV75-G63,用PEG沉淀浓缩及乙醚处理制成琼扩抗原,其与美国CAE标准阳性血清、参考阳性血清均呈阳性反应;而与马传贫、白血病、蓝舌病和布病阳性血清均无交叉反应。经SDS-PAGE和PAS糖蛋白染色分析,与美国CAE标准抗原的蛋白带相同,其主要分子量为90kd的糖蛋白。抗原制备方法简单,效价稳定,重复性好。经过136份奶山羊血清的检测,两种抗原的符合率为97.8％。     

CELO病毒fiber1基因部分片段的原核表达及抗原性鉴定

根据鸡胚致死孤儿(CELO)病毒Phelps株的fiber1基因(GenBank序列号U46933)序列设计了1对引物,采用PCR扩增CELO病毒fiber1基因C端(包含Knobs区)的部分片段,并将其克隆到质粒表达载体pGEX6p1,获得的阳性克隆命名为pGEXAF807。序列分析表明,所获得的DNA片段核苷酸序列与CELO病毒Phelps株的fiber1基因序列完全一致。将pGEXAF807转化大肠埃希氏菌DH5α,经37℃、0.6mmol/LIPTG诱导表达5h,SDSPAGE分析超声裂解后的上清和沉淀。结果显示,目的蛋白以包涵体形式存在,蛋白分子质量约为54.6ku,目的蛋白量占菌体总蛋白的35.7%。用CELO病毒多克隆血清做Westernblotting试验,结果表明目的蛋白具有较好的抗原活性。     

金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖偶联抗原的制备及免疫原性分析

为建立金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖(CP5)纯化与偶联技术方法,获得具有免疫原性的CP5偶联抗原,采用高压破碎菌体的方法释放荚膜多糖,酶处理去除核酸和蛋白质,通过离子交换层析进一步纯化,得到纯化的CP5,并对其纯度和反应原性进行检测;采用己二酸二酰肼(ADH)间桥法制备CP5-牛血清白蛋白(CP5-BSA)偶联抗原,加佐剂免疫小鼠,进行抗体水平测定。结果表明,纯化的CP5纯度为675.1g/kg,经用免疫琼脂双扩散试验检测,纯化多糖仅与同型菌株抗血清发生沉淀反应,偶联抗原CP5-BSA可以刺激小鼠产生CP5免疫应答。此研究结果为奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌亚单位疫苗的研制提供了试验依据。     

利用放射免疫分析方法检测可疑吸毒者尿样

本文介绍利用放射免疫分析方法,对有吸食和注射吗啡嫌疑人员的尿液进行测定,证实该嫌疑人在某特定时间内,是否有吸食和注射吗啡的行为。     

三种绦虫蚴囊液抗原的SDS-PAGE分析

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ对绵羊棘球蚴囊液和原头节抗原分析结果表明，前者共有多肽带１９条，其中６６和５９ｋｕ多肽带为主带；后者共有多肽带２９条，缺乏主带成分。这两种抗原在多肽组成和含量方面差异明显。绵羊细颈囊尾蚴囊液和脑多头蚴囊液抗原的ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，前者共有多肽带１５条，其中主带成分为６６，５９，４０和１２．５ｋｕ多肽带；后者共有多肽带１３条，其中６６，４０和１２．５ｋｕ多肽带为主带。三种绦虫蚴囊液抗原之间的共有成分为９４，６６，５９，４３和４０ｋｕ多肽带。棘球蚴囊液的４２，３４．５，３３和２４．５ｋｕ多肽带组分也为细颈囊尾蚴所共有，而５５，５２，４１，３９，３８．５，１４ｋｕ以及１条分子质量小于１０ｋｕ的多肽带为棘球蚴囊液的特异性组分     

猪囊虫抗原基因TS21的真核表达

构建了猪囊虫抗原基因TS2 1的VR10 2 0真核表达载体 ,以菌落原位杂交法筛选获得正确插入的重组质粒 ,用RNA印迹 (Northernblotting)和ELISA检测插入片段的转录及其翻译表达产物。结果 ,VTS2 1在真核细胞中能够转录TS2 1基因的mRNA ;兔抗猪囊虫超免疫血清可识别其蛋白表达产物 ,表明VTS2 1能正确表达猪囊虫抗原蛋白