HRP标记α—珠蛋白—3‘HVR探针进行DNA指纹分析的法医学应用研究

用ＨＲＰ标记α－珠蛋白－３ＨＶＲ ＤＮＡ探针，化学光增强法检测，获得清晰易读的ＤＮＡ指纹图，分析２１名广东地区无关个体的ＤＮＡ指纹图，平均每个个体有１９．７条谱带，灵敏度接近同位素＾３２Ｐ标记探针的水平，两个我关个体间出现同一谱带的相关 率为０．２１９。将此方法用于亲子鉴定，取得了令人满意的结果。     

SNPlex系统检测方法及在法医遗传学中的应用前景

被称为第三代遗传标记的SNP是近年来的研究热点,对SNP检验检测方法很多,例如引物延伸结合时间飞行质谱分析法,微矩阵基因分型法,SNPlex基因分型系统等,本文重点介绍的就是SNPlex基因分型系统,及其法医学应用前景.这种系统是利用DNA模板直接与等位基因特异探针和位点特异性探针结合,连接产物经扩增之后与特异探针杂交结合,最后通过毛细管电泳检测特异探针进行SNP分型.     

HLA-A位点DNA分型及其法医学应用

应用聚合酶链反应0寡核苷酸探针（PCR－SSO）斑点杂交技术，对222名辽宁地区汉族人群无关个体进行HLA－A基因检测，研究中国辽宁地区汉族群体的HLA－A座位基因分布状况。共检出HLA－A等位基因24个，其中以等位基因HLA－A0201最为常见，频率为0．2635；依次是2402101和1101，等位基因频率分别为0．1847和0．1262.理论杂合度为87％，个人鉴别机率为92％，非父排除率为73．3％。在中国辽宁汉族中检出73种基因型，对观察值和期望值进行X2检验，符合Hardy－Weinberg平衡定律（x2＝6．28，df＝9，0．5＜P＜0．75）。家系分析结果表明按照孟德尔方式遗传。提出的中国辽宁汉族HLA－A等位基因的遗传基因情况，可用于法医学个人识别和亲子鉴定。人类学，HLA相关疾病，及器官移植研究。     

分子生物学技术在弓形虫病诊断中应用的研究进展

综述了限制性片段长度多态性技术(RFLP)在刚地弓形虫虫株分类方面的应用情况,从PCR、DNA探针技术和基因重组技术方面介绍了用于检测弓形虫DNA的分子生物学技术的研究进展,叙述了编码弓形虫主要蛋白基因的克隆及其表达产物在ELISA诊断中的应用。     

不同方式标记非放射性探针原位杂交效果评价

目的比较不同方式标记非放射性探针的原位杂交效果。方法通过两种方法标记地高辛随机引物DNA探针和反意RNA探针,在大鼠损伤模型的皮肤组织上进行原位杂交。结果两种探针均可满足要求,以反意RNA探针在阳性染色深度和背景方面效果更佳。结论RNA探针在杂交效果方面优于DNA探针。     

32例父权鉴定DNA指纹图结果与血型血清学方法检测结果的比较

32例父权鉴定案例,应用‘Myo’小卫星DNA探针,以Southern印迹杂交技术进行DNA分析,所得结果与血型血清学检测方法(15～24种红细胞抗原、血清蛋白型及红细胞酶型系统)的结果比较,获得一致性结论。其中8例排除父权,24例肯定父权。并就两种检测方法的内部联系进行了讨论。     

禽多瘤病毒TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为建立检测禽多瘤病毒(avian polyomavirus,APV)的快速诊断方法,根据APV VP4基因的保守序列设计并合成引物和探针,建立了TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法,验证了其特异性、敏感性和重复性,并利用建立的方法对采集的临床样本组织进行检测。结果显示,建立的TaqMan探针实时荧光定量PCR检测方法的C_t值与标准品在1.0×10⁹～1.0×10²copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996,斜率为-3.021,检测下限为1.0×10¹copies/μL,与其他禽源病毒未发生交叉反应,重复性试验的变异系数均小于2%,重复性好,并且该方法在实际临床检测中可行。上述结果表明,建立的方法可用于禽多瘤病的早期诊断和APV快速检测。     

用于检测仔猪致病菌的23S rRNA基因芯片的研制

以副猪嗜血杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、肠道沙门氏菌、猪链球菌等12种仔猪致病菌为目标细菌,23SrRNA基因为靶基因,从GenBank中下载其23SrDNA全序列,在其变异区设计特异性探针,在保守区设计通用引物。通过序列分析、PCR靶标与探针杂交试验,建立了有13条寡核苷酸探针和2对通用引物的仔猪常见致病菌基因芯片检测方法。以参考菌株粗提基因组DNA的10倍系列稀释模板做PCR,扩增产物与探针杂交,检出芯片的灵敏度为100fg。对33个参考菌株用芯片检测,结果有1例不正确,只鉴定到属;在61个野外分离株中,55株的芯片检测结果与生化或测序结果一致,有6例不一致,符合率为90%。初步研究证明,该检测方法能快速、有效地鉴定多种仔猪常见致病菌,但要区分某些细菌的致病株与非致病株,还要检测毒力/毒素基因。     

牛副流感病毒3型TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

根据牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)膜蛋白M基因设计引物及探针,以体外转录法制备的cDNA标准品为模板,建立了TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法,对其特异性、敏感性、重复性进行了测定,并对人工感染BPIV3的牛群临床样本进行了检测。结果显示,建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR的最低检测限为17.6copies/μL,同时进行批内、批间5次重复性试验,变异系数均小于2.5%。应用建立的方法检测牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻-黏膜病病毒1型,结果均为阴性,说明建立的方法特异性较强。用建立的方法检测人工感染BPIV3的犊牛鼻拭子样本,检测结果与样本TCID50的测定结果相符合,但比其更敏感。结果表明,本试验中建立的TaqMan实时荧光定量RT-PCR可以作为BPIV3早期诊断及定量分析的有效技术手段。     

应用地高辛探针诊断猪细小病毒病

利用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记的ＰＵＰ重组质粒探针，分别对７株猪细小病毒（ＰＰＶ）分离毒及ＰＰＶＢＭ１株细胞培养物的ＤＮＡ抽提物进行斑点杂交，结果均为阳性，而对照的猪瘟病毒、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、乙型脑炎病毒及ＰＫ１５细胞为阴性；对７份ＰＰＶ自然感染病料进行处理，杂交结果为阳性反应，对照健康猪组织、猪瘟病料、猪伪狂犬病病料则为阴性。