人类CCK-45C/T遗传多态性及与抑郁症的相关性

目的 调查胆囊收缩素-45C/T(CCK-45C/T)的遗传多态性,探讨其与抑郁症的遗传相关性.方法 采集111例中国健康汉族人和130例抑郁症患者全血样本,利用TaqMan荧光标记探针杂交技术,使用Prism@7900HT型荧光定量PCR仪,对CCK-45 C/T进行基因频率调查,并比较分析健康人群和抑郁症患病人群CCK-45C/T等位基因的分布差异.结果 CCK-45C/T等位基因T的频率在健康群体中为0.369 4,在抑郁症患者群体中为0.496 2,组间比较存在显著性差异(P＜0.05).结论 CCK-45C/T等位基因T的分布在健康和抑郁症患者中差异显著,该基因可能与抑郁症易感相关.     

禽呼肠孤病毒TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法的建立

为建立一种能够高效鉴别禽呼肠孤病毒（ARV）的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法,本研究根据NCBI数据库中ARV S1基因保守区的序列,设计了1对特异性检测引物和1条MGB探针,通过优化反应条件,建立了用于检测ARV的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法。结果显示,该方法特异性好,对鸡常见传染性疾病病原的检测结果均为阴性;灵敏度高,可以达到10 copies/μL;稳定性好,组间和组内试验的变异系数小。本研究首次建立了ARV TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR快速检测方法,该方法具有快速、简便和敏感性高等优点,为ARV的快速检测诊断提供了新的方法。     

猪圆环病毒2型TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

根据猪圆环病毒2型(PCV2)ORF1基因的保守序列,设计合成了1对特异引物和1条探针,以PCV2全基因阳性质粒作为标准品,经反应条件优化,建立了一种检测PCV2的荧光定量PCR方法。对该方法进行特异性、敏感性和重复性试验,结果显示,该方法可特异地检测PCV2,而与PCV1等猪病病毒不发生交叉反应;该方法的灵敏度可达1×102copies/μL,比常规PCR高100倍;3次重复检测的变异系数均小于5%。用建立的荧光定量PCR和常规PCR分别对94份临床样品进行检测,荧光定量PCR的阳性检出率为51.06%,而常规PCR的阳性检出率仅为38.30%。证实,建立的方法具有快速、特异、灵敏、重复性好、定量、安全等优点,可用于PCV2的临床检测。     

桑叶提取物对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”混合探针药物法,探究桑叶水提物（aqueous extract of mulberry leaves,AML）、桑叶醇提物（ethanol extract of mulberry leaves,EML）对大鼠体内细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）酶活性的影响,从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用,为临床合理用药提供参考。方法 选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9）的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d,第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物,根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱- 串联质谱测定各组血药浓度,用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果 连续灌胃桑叶提取物14 d后,与9.0 g/L氯化钠注射液相比,AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢,安非他酮则不明显;与羧甲基纤维素钠组相比,EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢,非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP2B6可能无显著性影响;EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP1A2可能无显著性影响。     

应用地高辛探针诊断猪细小病毒病

利用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记的ＰＵＰ重组质粒探针，分别对７株猪细小病毒（ＰＰＶ）分离毒及ＰＰＶＢＭ１株细胞培养物的ＤＮＡ抽提物进行斑点杂交，结果均为阳性，而对照的猪瘟病毒、伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）、乙型脑炎病毒及ＰＫ１５细胞为阴性；对７份ＰＰＶ自然感染病料进行处理，杂交结果为阳性反应，对照健康猪组织、猪瘟病料、猪伪狂犬病病料则为阴性。     

DNA纹印技术的初步研究——用PYNH24探针分析MspI的RFLP

应用 Southern 印迹杂交技术,分析了人体基因组 DNA MspI 酶解物与特异探针 PYNH24杂交的限制酶切片段长度多态性,获得清晰易读的杂交图谱。50个不相关个体血样中未发现相同图谱,显示了个体特异性,为法医生物物证检验工作提供了新的分析手段。     

生物素标记大肠杆菌热敏感和热稳定毒素基因探针对猪鸡分离株的检测

用特异的大肠杆菌热敏感毒素（ＬＴ）和热稳定毒素（ＳＴ）标记的基因探针，以硝酸纤维素薄膜为载体，对从猪、鸡分离的大肠杆菌进行杂交。结果表明，在从猪分离的４８株大肠杆菌中，分离自黄痢的３５株、分离自白痢的２株，分离自ＳＰＦ堵粪便的６株均产ＬＴ和５Ｔ；分离自长期拉稀的育成小僵猪粪便的５株中，只有４株产ＬＴ和ＳＴ，１株既不产ＬＴ也不产ＳＴ。从鸡分离的２８株大肠杆菌中，分离自雏鸡的１４株ＬＴ阳性率为８６％，ＳＴ阳性率为９３％；分离自中鸡的９株ＬＴ和ＳＴ阳ａ性率均为１００％；分离自蛋鸡的５株ＬＴ阳性率为４０％，ＳＴ阳性率为６０％。     

用寡核苷酸探针对近交系小鼠DNA指纹图谱的分析

应用DNA指纹技术 ,用非放射性标记的寡核苷酸探针 (GGAT) 4对 3个清洁级近交小鼠品系C5 7、DBA/ 2、BALB/c进行检测 ,分析其DNA指纹图谱。结果显示 ,不同品系近交系小鼠的DNA指纹图谱有明显差异 ,而品系内小鼠之间的DNA指纹图谱基本一致。证明DNA指纹技术能够较好地检测出近交系小鼠的基因纯合性 ,反映其遗传质量 ,可以应用于对近交系小鼠的遗传质量监测。     

改良菌落原位杂交技术快速筛选NDVF基因阳性克隆株

应用从表达型质粒载体构建的ＮＤＶＦ基因文库中筛选阳性克隆株的改良融合蛋白质抗体蛋白质原位杂交技术，可使菌落在硝酸纤维素薄膜上增殖，经适当处理后，即可用特异性抗体探针进行原位筛选，获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。     

国人六个高变DNA位点的基因频率分布

使用6个单位点探针，用Southern印迹杂交技术研究了国人的D2S44，D17S79，D14S13，D14S1，DXYS14及D18S27等位点的基因频率分布。发现它们的DNA指纹图均具高度多态性，等位基因数27～107个。非父排除率（EPP）分别为0．8407、0．7691、0．9792、0．9040、0．9400及0．8177，累积非父排除率为0．99999；个人识别能力（DP）分别为0.9880、0.9766，0.9996，0.9961，0.9973及0．9338，累积个人识别能力接近1，故可作为亲子鉴定及个人识别非常有力的工具。此外还对单位点探针的优缺点进行了讨论。