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51.
为建立同时检测猫细小病毒(FPV)和猫疱疹病毒1型(FHV-1)的双重荧光定量PCR方法,针对FPV的VP2基因、FHV-1的UL21基因设计特异性引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了双重荧光定量PCR方法,并绘制了标准曲线,其相关系数(R2)均为0.999,具有良好的线性关系。结果显示,FPV、FHV-1最低检测限分别为4.87和2.21 copies/μL;对猫的常见病毒及细菌均无非特异反应;批内、批间试验的变异系数均小于2%。证明该方法灵敏度高、特异性强、重复性好。用建立的方法对178份样本进行检测,结果,FPV和FHV-1的阳性检出率分别为73.65%和16.85%,二者混感阳性率为15.73%,与临床确诊结果一致。上述结果表明,本研究建立的方法可用于FPV、FHV-1感染的早期诊断、定量检测和流行病学调查等。 相似文献
52.
TaqMan探针技术用于X-SNP位点的分型 总被引:1,自引:1,他引:0
目的建立一种基于TaqMan探针技术的快速、准确且经济的实时荧光PCR方法,用于检测X染色体上的单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)。方法选择X染色体上的13个SNP位点(X-SNP),针对每个位点分别设计1对PCR引物和TaqMan探针,进行实时荧光PCR扩增,对X-SNP位点进行分型。结果13个位点均符合Hardy-Weinberg平衡;多态信息含量分布为0.3497~0.3750,杂合度为0.4537~0.5021。建立的方法能够用于X-SNP位点的基因分型,检测结果与DNA测序结果完全一致。结论基于TaqMan探针技术的等位基因特异的实时荧光PCR方法灵敏、简单、快速,可实现对X-SNP位点的分型检测;所选择的13个X-SNP位点具有高信息量,在法医遗传学中具有潜在的应用价值。 相似文献
53.
目的 采用“Cocktail”混合探针药物法,探究桑叶水提物(aqueous extract of mulberry leaves,AML)、桑叶醇提物(ethanol extract of mulberry leaves,EML)对大鼠体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶活性的影响,从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用,为临床合理用药提供参考。方法 选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9)的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d,第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物,根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱- 串联质谱测定各组血药浓度,用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果 连续灌胃桑叶提取物14 d后,与9.0 g/L氯化钠注射液相比,AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢,安非他酮则不明显;与羧甲基纤维素钠组相比,EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢,非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP2B6可能无显著性影响;EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP1A2可能无显著性影响。 相似文献
54.
单位点DNA探针在早孕期亲子鉴定中的应用研究 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究利用限制性片段长度多态性分析技术,从3O例早孕期绒毛组织及其父母血液中提取DNA,以两种单位点DNA探针PAC255及PAC256进行检测,根据所获等位基因的大小,查国人此二位点基因频率及每一家系三组合中该基因传递相对机会,计算出相应的亲子关系指数和亲子关系概率。结果.累积条子关系指数和累积亲子关系概率的范围分别是56.80~8333.50和98.27~99.99%、按照国际通用标准,这30个家系中,可以肯定亲手关系者20例(66.7%),极可能有亲子关系者8例(26.7%),非常可能有亲子关系者2例(6.7)。说明同时使用此二单位点探针,在早孕期亲子鉴定中有很高的应用价值。 相似文献
55.
56.
O157:H7型大肠杆菌荧光定量PCR检测方法的建立 总被引:3,自引:0,他引:3
根据GenBank中登录的肠出血性大肠杆菌保守基因序列Stx1、Stx2设计合成荧光定量PCR引物和探针,对荧光定量PCR的反应条件进行优化,建立了TaqMan荧光定量PCR检测方法.用建立的检测方法对临床分离病料进行了检测,并与常规PCR方法的检测结果做了对比.结果显示,建立的TaqMan荧光定量PCR方法的灵敏度达7.06×103CFU/mL,比常规PCR方法的灵敏度高106倍.用该方法和常规PCR对8种样品进行了检测,证实,该方法与常规PCR的阳性符合率为100%,具有较好的重复性. 相似文献
57.
猪IFN-γ mRNA TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立 总被引:3,自引:1,他引:2
为建立一种检测猪γ-干扰素(IFN-γ)的荧光定量RT-PCR方法,针对猪IFN-γ基因和管家基因cyclophilin A(CyPA)的核苷酸序列分别设计了特异性引物和TaqMan荧光探针,以重组质粒pMD18-T-IFN-γ和pMD18-T-CyPA为标准品,进行实时荧光定量RT-PCR检测,并构建猪IFN一γ mRNA和CyPA的荧光定量RT-PCR标准曲线.结果表明,建立的方法在1×101~1×107copies/μL模板范围内具有良好的线性关系,相关系数r2均高达0.999,扩增效率均高于99.0%;可检测至少为100 copies的阳性标准品.该方法具有快速、敏感性高、特异性强和重复性好等特点,可应用于临床样品的检测. 相似文献
58.
59.
目的统计用33.15及33.6探针对中国人进行DNA指纹图检验的群体调查资料,为实际案件的检验提供理论依据。方法应用33.15及33.6探针为中国北京地区无关群体的血液进行DNA指纹图分析。结果应用33.15探针检验15人的DNA指纹图,无关个体间相关机率为1.03×10-15,两无关个体间出现同一谱带的平均概率0.176;应用33.6探针检验19人的DNA指纹图,无关个体间相关机率为1.53×11-11,两无关个体间出现同一港带的平均概率为0.187;两探针均符合孟德尔遗传规律,均具有组织同一性。结论本研究结果可应用于法医物证检验的亲子鉴定及个体识别。 相似文献
60.