实时DNA定量技术的应用研究

通过应用TaqMan探针法和SYBR Green荧光染料法对常见的法医生物学检材进行DNA定量,对实时荧光定量PCR技术用于法庭科学样品定量检测的适用性进行研究。实验结果表明,该技术在DNA定量及抑制因素评估等方面具有重要的法医学应用价值。     

猪圆环病毒2型实时荧光定量PCR检测标准阳性模板的构建

采用PCR方法克隆了猪圆环病毒2型(PCV2)ORF2基因,将构建的重组质粒pMD-ORF2作为PCV2实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测的标准阳性模板,并对该模板进行了酶切及测序鉴定。结果显示,此模板特异性强,稳定性好,-20℃保存20 d无显著变化;对起始浓度为1.0×106、1.0×105、1.0×104拷贝/μL的pMD-ORF2标准品的最终实际测得值分别为1.000×106、0.935×105和0.987×104,其变异系数分别为2.527%、2.067%和2.092%。表明,以此模板进行FQ-PCR具有良好的准确性和重现性。该模板的检测线性范围宽,当稀释度为1.0×109~1.0×105拷贝/μL时,相关系数r=-0.989。     

犬产气荚膜梭菌的分离和PCR检测方法的建立

从 12头疑似产气荚膜梭菌感染的猝死警犬中分离获得了 18株病原菌 ,经生化试验及毒素中和试验 ,确定为A型和C型产气荚膜梭菌。参考GenBank中登录的基因序列 ,设计合成了针对产气荚膜梭菌α、β、ε、ι、CPE和 β2共 6对分型毒素基因的引物 ,对以前昆明地区分离的 1株产气荚膜梭菌进行了PCR扩增 ,结果扩增出了与预期大小相同的 6个基因片段 ,分别为 2 33、196、32 4、4 46、5 6 7和 6 6 5bp。建立的PCR方法能同时用于产气荚膜梭菌鉴定和毒素分型 ,较细菌毒素检测方法快速 ,与细菌分离鉴定的结果一致。     

西安汉人D1S80位点基因频率调查

利用PCR技术、小型聚丙烯酰胶凝胶电泳及银染法，检测D1S80位点的VNTR扩增片段长度多态性（Amp－FLP）。在175名无关的西安地区汉族人群中发现了22个等位基因，片段大小分布于320～750bp之间，频率分布为0．0057～03314，杂合度为82．3％，个人识别率（DP）为0.9588，非父排除率（EPP）为0．6704。对7个家系23名相关个体分析，证实DIS80位点的遗传符合孟德尔方式。已发现的64种基因型分布符合Hardg－Weinberg定律。     

荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性的研究

目的研究荧光染料掺入PCR检测STR基因座多态性。方法 利用荧光染料掺人PCR扩增技术,测定FABP、CYP19、FOLP23、MBP、DYS19五个基因座的梯阶片段长度,将带有荧光标记物的dCTP通过PCR反应加入到目的片段PCR产物中,通过PE 377 DNA测序仪分离和基因扫描软件分析。结果 获得了清晰、准确的图谱,计算出各基因座中核心序列的重复次数,并按照ISFH标准对各基因座命名。结论 该方法具有灵敏度高、结果客观准确、操作简便、产物定量等优点,在新基因座开发和法医鉴定实践中具有较理想的应用价值和发展前景。     

猪细小病毒Z株NS部分基因的扩增及序列分析

从猪细小病毒Z株提取基因组DNA ,利用PCR扩增部分基因 ,并对该扩增片段进行测序与分析。结果表明 ,扩增的NS基因长 330bp ,编码 10 9个氨基酸。氨基酸序列中含有猪细小病毒的重要保守序列 ,并有 1个潜在的糖基化位点NFSN。Z株NS基因与其他猪细小病毒Kresse、NADL2 2、NADL2 1株的核苷酸同源性分别为 99%、98%、98% ,氨基酸同源性均为 99%。     

生物检材中的PCR抑制物及其处理技术

DNA分型技术在刑事案件的侦破中已得到广泛应用,但不同来源的各种生物检材往往含有PCR抑制物,其对扩增反应的影响不容忽视。因此,DNA样本扩增前预处理就显得尤为重要。本文主要就PCR抑制物种类及其对PCR的抑制机制、PCR抑制物应对技术等相关研究进展进行简要综述,旨在为相关研究和应用提供参考。     

运用PCR技术对人骨组织和牙齿进行性别鉴定的应用研究

为了解决刑事案件中利用人骨组织和牙齿进行性别鉴定的问题，我们通过骨骼和牙齿中ＤＮＡ的提取床用Ｙ染色体特异ＤＮＭ列引物扩增Ｙ染色体的ＤＹＺＩ和ＳＲＹ基因序列．结果：１．骨组织中ＤＮＡ的提取可在１小时内完成；牙齿中ＤＮＡ的提取可在４小时内完成；２．牙齿中的ＤＮＡ保存的完好性大于骨组织；４．煮沸过的骨组织中的ＤＮＡ降解严重，无法用于实验．     

多花黄精多糖PcUER1基因的克隆与表达分析

目的探究安徽生产的多花黄精多糖3,5-异构酶/4-还原酶基因(PcUER1)的结构基因信息及其在多花黄精中单糖鼠李糖化合物生源路径中的表达调控机制。方法以多花黄精为研究对象,基于其转录组学数据,克隆PcUER1基因并针对该cDNA序列展开生物信息学分析,采用实时荧光定量PCR方法检测多花黄精不同组织中PcUER1基因的表达水平。结果多花黄精多糖PcUER1基因的cDNA序列长度为900 bp,编码299个氨基酸;序列分析表明多花黄精与百合科虎眼万年青的相似度达到92.03%;实时荧光定量PCR检测结果显示,PcUER1基因在多花黄精的根、须根、茎、叶中表达水平逐渐降低,茎和叶中PcUER1基因表达水平的差异无统计学意义。结论多花黄精多糖PcUER1基因的活性位点有辅因子结合基序和催化四分体基序,其蛋白表达产物理化性质稳定。