传染性支气管炎病毒TY1株结构蛋白基因部分片段的表达

根据已报道的传染性支气管炎病毒S基因序列设计了1对引物,利用从传染性支气管炎病毒TY1株中提取的RNA,经PCR扩增获得了300 bp的产物;序列测定与分析表明,所扩增产物是传染性支气管炎病毒结构蛋白基因的部分片段。将扩增片段插入pET32a构建表达载体,并于大肠埃希氏菌BL21中进行表达;结果表明,该片段在大肠埃希氏菌中成功表达,产物为30 ku、以可溶性形式存在的蛋白。Western-blotting分析表明,该蛋白可与传染性支气管炎病毒TY1株阳性血清发生反应。     

用SDS-PAGE分析鸡毒霉形体广西分离株的结构蛋白

应用SDS PAGE对鸡毒霉形体 (Mycoplasmagallisepticum ,MG) 4个标准株和 5个广西分离株的结构蛋白进行了比较分析。结果 ,在凝胶电泳图谱中 10～ 10 0ku蛋白分子质量之间 ,F株缺少 87ku蛋白带 ,Y3株在最靠近 87ku蛋白带的上方和下方各缺少 1条蛋白带 ,H2株和Y2株缺少 6 4ku蛋白带 ,CH株缺少 2 9ku蛋白带 ,97、75、4 3ku处的蛋白带为 4个MG标准株和 5个MG分离株所共有。表明 9个MG供试菌株的结构蛋白都存在一定的差异 ,广西MG分离株的结构蛋白呈现多样性。     

番鸭呼肠孤病毒ZJ99株σC蛋白基因的克隆与序列分析

参考已发表的番鸭呼肠孤病毒(mDRV)的S4序列设计了1对扩增σC蛋白基因的引物,对mDRVZJ99株的RNA抽提物进行RTPCR扩增,获得了特异性的扩增片段。将PCR产物克隆测序,序列经同源性比较,发现mDRVZJ99株σC蛋白基因序列与福建MW9710株对应基因的同源性为99.5%,与法国89026株对应基因的同源性为94.2%,与法国89330株对应基因的同源性为95.0%;相应的氨基酸序列同源性分别为98.9%、94.1%、93.7%。基于σC基因及其推导氨基酸序列的蛋白质结构及物理化学性质预测结果,与国外学者对mDRVσC蛋白的报道相似。     

迟发性外伤性脑内血肿脑组织GFAP、S-100和NSE的免疫组织化学研究

应用免疫组织化学ABC法和S－P法，对6例伤后1．5天至2年发生的迟发性外伤性脑内血肿（DTICH）脑组织标本进行神经胶质细胞内胶质纤维酸性蛋白（GFAP）、S－100蛋白（S－100）和神经元细胞内特异性烯醇化酶（NSE）变化和应用价值的研究。尸检和组织学检查发现有脑挫伤等病变。6例DTICH脑组织挫伤及周围区均有明显的GFAP、S－100阳性的细胞变化，细胞数目增多，胞体肥大、增生，免疫组化反应产物增多、深染；神经元细胞NSE免疫组化染色均呈阴性改变。结果表明：6例DTICH脑组织中GFAP、S－100的NSE的免疫组织化学变化是有一定时间间隔的外伤性陈旧性改变，在DTICH的病理诊断上具有重要价值，可作为DTICH法医学鉴定的一个辅助手段。     

不喝牛奶行不行?

<正>自2008年,中国乳品安全问题被曝光后,国产奶制品在消费者心中的信任度极剧下降。喝还是不喝?成为两难。有消费者将目光转向进口奶制品,然而,进口奶制品也并非绝对安全。2011年12月6日,据日本媒体报道,明治奶粉被查出含有放射性铯。随后,美赞臣奶粉被查出含有细菌,并导致一名新生儿死亡。抛开这些安全问题,牛奶就真的是中国人必不可少的饮品吗?每天喝牛奶就可以补充流失的钙吗?或者像     

大鼠弥漫性轴索损伤后Homer1蛋白表达的研究

目的:观察大鼠弥漫性轴索损伤(DAI)后Homer1蛋白的表达规律。方法:将45只SD大鼠随机分为对照组及DAI组,后者按DAI后处死大鼠的时间不同分为30min、1h、3h、6h、12h、24h、72h、7d组。建立大鼠DAI动物模型,运用免疫组织化学技术及图像分析方法观察脑组织Homer1蛋白的表达。结果:损伤后30min,Homer1蛋白染色阳性细胞数增多,染色增强(P<0.05),随着损伤时间的延长,阳性细胞数及阳性表达范围逐渐扩大,于伤后24h达到高峰(P<0.01),随后逐渐下降。对照组可见少量Homer1蛋白表达。结论:Homer1蛋白是大鼠DAI后的灵敏指标,在不同时间段表达具有时序性变化规律,对于早期诊断DAI及损伤时间的推断具有一定的参考价值。     

尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

以截短的尼帕病毒（NiV）G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增,将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a（+）,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后,在最佳诱导条件下表达目的蛋白。用Ni-NTA柱纯化截短的G蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的蛋白为抗原建立尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、稳定性进行验证。结果显示：成功构建重组质粒pET-30a(+)-NiV-G;表达的尼帕病毒截短G蛋白分子质量为50 ku,与预期值相符;截短的G蛋白能被His-tag抗体、抗尼帕病毒G蛋白粗提IgG识别。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法检测已知阳性血清尼帕病毒抗体效价为1︰20 480,裂谷热病毒、西尼罗病毒及克里米亚-刚果出血热病毒阳性马血清的检测结果均为阴性,且该方法批内、批间试验变异系数均小于10%。结果表明,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-NiV-G,并诱导表达尼帕病毒截短G蛋白。以该蛋白建立的尼帕病毒抗体...     

宿主蛋白Ambra 1介导非洲猪瘟病毒MGF360-9L抑制其复制的机制

MGF360-9L是非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）重要的毒力基因,本实验室前期使用免疫共沉淀和液相色谱-质谱（IP-MS）联合技术,明确了MGF360-9L和宿主蛋白自噬/苄氯素1调节因子1(autophagy/beclin-1 regulator 1,Ambra 1)具有相互作用,现有的研究已经证实宿主蛋白Ambra 1在病原感染中发挥重要作用。为明确Ambra 1介导MGF360-9L对ASFV复制的调控作用及其机制,本研究构建Ambra 1真核表达质粒,使用免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）和间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay,IFA）技术,验证了Ambra 1和MGF360-9L的互作及互作区域。设计并合成Ambra 1的RNA干扰（RNAi）序列,运用实时荧光定量PCR(real-time q PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹（Western-blot）技术,证明了Ambra 1过表达抑制ASFV的复制,下调Ambra 1的表达则能够促进AS...     

伪狂犬病病毒gM蛋白多抗的制备及功能探究

为获得免疫原性好的伪狂犬病病毒（PRV）gM蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于gM蛋白功能的初步研究,本试验截取gM蛋白优势抗原区的碱基序列并插入pET-21a（+）载体,构建原核表达质粒pET-21a-UL10,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过尿素法纯化蛋白,将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染后的细胞样本进行间接免疫荧光、Western-blot和免疫沉淀试验检测其反应性和特异性。使用gM蛋白免疫C57BL/6小鼠后攻毒检测小鼠死亡率。结果显示,成功构建了表达PRV gM蛋白的重组质粒pET-21a-UL10,在37℃诱导6 h后主要以包涵体形式表达;制备的gM蛋白多克隆抗体具有良好的反应性和特异性,可特异性检测到PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染细胞中的gM蛋白;小鼠免疫结果显示,gM蛋白诱导的免疫抗体对PRV感染的保护率低。研究表明制备的gM蛋白多克隆抗体具有较好的反应性和特异性,但其对小鼠的保护力较弱,为进一步解析gM蛋白的生物学功能奠定了必要的基础。     

重组CFP10-ESAT6蛋白通过TLR信号介导A549细胞抗BCG感染

本研究旨在探究重组CFP10-ESAT6蛋白在结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染肺泡上皮细胞过程中对肺泡上皮细胞TLR信号途径及其介导的炎症反应的影响.利用原核表达系统表达纯化Mtb重组蛋白CFP10-ESAT6,使用重组蛋白处理A549细胞,利用CCK-8试剂盒检测重组C...