Alternative direct-to-amplification cell lysis techniques for forensically relevant non-sperm cells

While efforts have been made to reduce the pervasive backlog of sexual assault evidence collection kits, the actual laboratory process remains very time-consuming due to the requirement of a differential lysis step before DNA purification, as well as intricate mixture analysis towards the end of the DNA workflow. Recently, an alternative, direct-to-amplification sperm lysis method (using 1 M NaOH) was identified. However, a direct cell lysis method for non-sperm cells has not been identified yet. Thus, the primary objective of this work was to find an alternative method that is quick, inexpensive, and does not require multiple purification steps for the lysis of non-sperm cells in sexual assault samples. In this study, vaginal swab samples were lysed with the control method, prepGEM™, as well as six alternative reagents: alkaline buffer with 25–200 mM NaOH, high-salt stain extraction buffer, modified radioimmunoprecipitation assay (RIPA) buffer, mammalian protein extraction reagent (M-PER™), digitonin buffer, and urea/thiourea buffer. Quantification using Quantifiler® Trio of vaginal and semen lysates revealed that the alkaline (25 mM NaOH) and M-PER™ methods were efficient for the lysis of vaginal epithelial cells without substantial sperm cell lysis. Following quantification, analysis of STR profiles from vaginal lysates revealed that the M-PER™ method showed promising results across all metrics examined, including the percentage of detected STR alleles, mean peak heights, peak height ratio, and interlocus balance. Thus, this method was recommended as an alternative to the traditional differential lysis method for non-sperm cells given its ability to produce amplification-ready lysates without any DNA purification step.     

刺血拔罐联合蛇伤冲剂治疗蝮蛇咬伤临床观察

目的 观察刺血拔罐联合蛇伤冲剂治疗蛇咬伤患者的临床疗效。方法 采用随机数字表法将60例蛇咬伤患者分为对照组和观察组各30例,对照组给予西医基础治疗,观察组在对照组基础上加用刺血拔罐和内服蛇伤冲剂,评估患肢肿胀、疼痛消失时间并检测治疗前后血清超敏C反应蛋白（high-sensitive C-reactive protein,hs-CRP）、白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平。结果 观察组患者治疗后肿胀、疼痛症状的改善程度优于对照组（P<0.05）;与治疗前比较,两组治疗后hs-CRP、IL-6均显著降低（P<0.05）。两组治疗后hs-CRP降低值比较,差异无统计学意义（P>0.05）,观察组IL-6降低值显著大于对照组（P<0.05）。结论 刺血拔罐联合蛇伤冲剂内服可以改善蛇咬伤后肿胀、疼痛的症状,降低血清hs-CRP、IL-6水平。     

平喘宁对寒性哮喘大鼠PI3K/Akt信号通路相关信号分子表达的影响

目的 探讨平喘宁调节PI3K/Akt信号通路相关蛋白干预寒性哮喘大鼠的作用机制。方法 随机将105只SD健康雄性大鼠分为正常组、模型组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组,每组15只。除正常组外其余各组以卵蛋白进行致敏,并予以哮喘诱导及寒冷刺激。模型复制后,平喘宁高、中、低剂量组（14.6、7.3、3.7 g/kg）和地塞米松组（0.4 mg/kg）、桂龙咳喘宁组（0.4 g/kg）按相应剂量灌胃治疗,正常组和模型组用生理盐水代替。取肺组织,用苏木素-伊红染色法检测病理变化,实时荧光定量PCR法检测Bad、叉头蛋白O1（forkhead box protein O1,FKHR）、蛋白激酶C（protein kinase C,PKC） mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织管壁明显增厚,支气管结构明显紊乱,有炎症细胞浸润等现象;与模型组比较,药物治疗组大鼠肺组织的病理变化均有所改善。与正常组比较,模型组大鼠肺组织Bad mRNA、FKHR mRNA、PKC mRNA表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,药物组Bad mRNA、FKHR mRNA、PKC mRNA表达差异均有统计学意义（P＜0.05）,并且平喘宁对PKC、Bad、FKHR mRNA表达的效应具有剂量依赖性,平喘宁高剂量组作用优于其他药物组。结论 平喘宁可以通过调控PI3K/Akt信号传导通路中PKC、FKHR、Bad的表达水平,减缓寒哮大鼠肺组织气道重塑,减轻炎症反应,改善哮喘症状。     

桃红四物汤保护2型糖尿病模型大鼠血管损伤的实验研究

目的 观察桃红四物汤对2型糖尿病模型大鼠胸主动脉的保护作用,并探究其作用机制。方法 采用高糖高脂饲料联合链脲佐菌素复制2型糖尿病大鼠模型,桃红四物汤连续干预模型大鼠8周,观察模型大鼠胸主动脉的病理学变化,Western blot法检测胸主动脉核因子κB（nuclear factor κB,NF-κB）蛋白表达,RT-qPCR技术检测单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1）和血管细胞黏附分子-1（vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1）mRNA表达,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）和转化生长因子-β1（transforming growth factor-β1,TGF-β1）的含量。结果 桃红四物汤可显著改善模型大鼠胸主动脉损伤;显著抑制模型大鼠胸主动脉NF-κBp65蛋白和MCP-1、VCAM-1 mRNA的表达（P<0.05）,显著降低血清TNF-α、TGF-β1的含量（P<0.05）。结论 桃红四物汤可有效保护模型大鼠胸主动脉病理损伤,其作用机制与干预NF-κB信号通路,抑制MCP-1、VCAM-1、TNF-α和TGF-β1表达有关。     

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的 观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）表达的影响。方法 通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers（K-R）液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2 h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果 空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低（P<0.05）。结论 黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。     

黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的 研究黄芩苷对高糖环境下肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell, GMC)中缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43）表达的影响。方法 将体外培养的大鼠GMC分为6组：低糖组,高糖组,黄芩苷低、中、高剂量组,蛋白激酶C（protein kinase C, PKC）抑制剂组。培养72 h后,收集细胞并提取细胞总蛋白,Western-blot法检测黄芩苷对高糖环境下GMC中PKC和Cx43表达的影响,用划痕标记染料示踪技术检测黄芩苷对GMC缝隙链接通讯功能(gap junction intercellular communication,GJIC)的影响。〖JP〗结果 Western-blot结果显示,与低糖组比较,高糖组中PKC蛋白表达量显著增加（P<0.01）,Cx43蛋白表达量显著减少（P<0.01）;黄芩苷呈剂量依赖性降低PKC蛋白表达水平,升高Cx43蛋白表达水平。划痕标记染料示踪实验结果显示：与低糖组比较,高糖组GMC的GJIC功能缺乏,未向邻近细胞传输;与高糖组比较,PKC抑制剂组罗氏黄荧光染料向划痕两侧邻近细胞传输的层数较黄芩苷各剂量组明显增多,黄芩苷各剂量组呈剂量依赖性地增加传递的层数。结论 黄芩苷可剂量依赖性地抑制高糖环境下GMC中PKC的异常活化,从而上调Cx43表达,恢复GJIC的功能。     

通督调神针灸疗法治疗遗忘型轻度认知功能障碍临床观察

目的 观察通督调神针灸疗法对遗忘型轻度认知功能障碍（amnestic mild cognitive impairment,aMCI）患者认知功能的改善作用,探究其部分作用机制。方法 将60例aMCI患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组患者接受通督调神针灸疗法,对照组患者口服尼莫地平,两组疗程均为8周。治疗前后分别采用简易精神状态量表（mini-mental state examination,MMSE）、蒙特利尔认知评估（Montreal cognitive assessment,MoCA）量表和血管性痴呆辨证量表（the syndrome differentiation scale of vascular dementia,SDSVD）评估认知功能,并检测血清超敏C-反应蛋白（high sensitivity C-reactive protein,hs-CRP）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）水平。结果 两组治疗后MMSE、MoCA评分均较治疗前显著升高（P<0.05）,血清hs-CRP和IL-6水平均较治疗前显著降低（P<0.05）,且治疗组治疗后SDSVD评分较治疗前显著降低（P<0.05）。治疗组治疗后MMSE升高值和SDSVD、IL-6降低值均显著大于对照组（P<0.05）。结论 通督调神针灸疗法可明显改善aMCI患者的认知功能,其部分机制与降低血清IL-6有关。     

桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障通透性的保护作用及机制

目的 观察桃红四物汤对脑缺血再灌注损伤的治疗作用,以及其对血脑屏障的保护作用和机制。方法 建立左侧大脑中动脉阻塞模型,将大鼠随机分为假手术组、模型组、桃红四物汤组和尼莫地平组。采用Longa评分法观察大鼠神经功能损伤程度,行为学实验观察大鼠的运动神经功能,2,3,5-氯化三苯基四氮唑（triphenyltetrazolium chloride,TTC）染色法观察大鼠脑梗死面积,苏木精—伊红染色观察大鼠缺血侧脑部皮质组织病理变化,干湿法测定脑含水率,伊文思蓝（Evans blue,EB）灌注染色法检测血脑屏障通透性,透射电子显微镜观察血脑屏障紧密连接超微结构,免疫组织化学法检测脑组织紧密连接蛋白occludin、胞质附着蛋白-1(zona occludens-1, ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotein-9, MMP-9)表达水平。结果 大鼠神经功能损伤程度与运动神经功能经桃红四物汤给药后呈现改善的趋势。TTC结果显示,与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑梗死面积明显减少（P＜0.05）。苏木精—伊红染色显示,与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑皮质组织神经元细胞质浓缩,核固缩、分裂或溶解,细胞排列紊乱,层次不清晰的情况得到改善。与模型组比较,桃红四物汤与尼莫地平组大鼠脑含水率、脑出血性转化程度以及EB渗出量显著降低（P＜0.05）。免疫组织化学检测结果显示,与模型组比较,桃红四物汤组大鼠脑梗死区occludin、ZO-1蛋白表达水平显著升高,MMP-9表达水平显著降低（P＜0.05）。透射电子显微镜观察发现,模型组大鼠血脑屏障紧密连接明显受损,桃红四物汤组和尼莫地平组大鼠血脑屏障紧密连接损伤明显改善。结论 桃红四物汤可改善脑缺血再灌注损伤大鼠神经功能,缩小梗死面积及减轻脑水肿。其作用机制可能与改善血脑屏障紧密连接超微结构,减少紧密连接相关蛋白表达,进而降低血脑屏障通透性有关。     

单核细胞趋化蛋白1及其受体在冠心病猝死中的表达

目的：探讨单核细胞趋化蛋白1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）及其受体CC类趋化蛋白受体2（CC chemokine receptor-2,CCR-2）在冠心病猝死（sudden coronary death,SCD）和非SCD冠状动脉粥样硬化斑块中的差异表达。方法应用免疫组织化学方法检测MCP-1和CCR-2在SCD组、动脉粥样硬化组（冠状动脉粥样硬化但非SCD）、对照组（冠状动脉正常）的差异表达。结果 MCP-1在三组间的阳性细胞表达率分别是78%、47%、0%,两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05）;CCR-2在三组间的阳性细胞表达率分别是72%、47%、0%,在SCD组和动脉粥样硬化组、SCD组与对照组表达差异均有统计学意义（P〉0.05）,而在对照组和动脉粥样硬化组差异无统计学意义（P〉0.05）。结论冠状动脉粥样硬化斑块中的MCP-1及其受体CCR-2的表达增加与SCD密切相关。     

口蹄疫病毒非结构蛋白3A单克隆抗体的制备和鉴定

以原核表达并纯化的口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3A免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行融合,用间接ELISA方法筛选杂交瘤细胞,有限稀释法进行亚克隆,获得3株能稳定分泌抗3A蛋白单抗的杂交瘤细胞,分别命名为3H2、4B1、7F5,并对这3株单抗进行了生物学鉴定。结果显示,单抗3H2和4B1为IgG2a亚型,7F5为IgG2b亚型。单抗7F5针对的表位与3H2和4B1两株单抗的表位不一致;这3株单抗均能够与FMDV特异性结合,且单抗4B1与所有3A相关蛋白均反应。稳定性鉴定结果表明,获得的3株杂交瘤细胞均能稳定分泌单克隆抗体。研究结果为进一步探索3A蛋白的结构和功能以及建立诊断方法奠定了基础。