表达狂犬病病毒CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒在犬体内的免疫效果

为研制一种新型有效的狂犬病重组活载体疫苗,将EGFP-rgp的表达框克隆入p8-AA载体的Sph Ⅰ/Nde Ⅰ酶切位点处,将酶切鉴定为正向连接的阳性重组子命名为p8AA-EGFP-rgp.在质脂体介导下将该质粒与Bartha-K61共转染PK-15细胞,获得能够表达狂犬病病毒(RV)CVS-11株糖蛋白的重组伪狂犬病病毒rPRV/EGFP-rgp,经RT-PCR和Western-blot鉴定后对犬进行肌肉注射免疫,并测定相应试验指标,研究重组病毒对犬的免疫诱导情况.结果显示,重组病毒可以有效地刺激机体产生体液免疫和细胞免疫;产生的针对RV的中和抗体水平[(0.95±0.21)U/mL]在14周时还保持相对国际最低保护标准(0.5U/mL)较高的水平;且产生的针对RV和PRV的中和抗体水平均达到了相应灭活疫苗和减毒活疫苗的水平,抗体效价均维持在14周以上.     

化瘀通络灸对血管性痴呆大鼠髓鞘再生相关蛋白表达的影响

目的 观察化瘀通络灸对血管性痴呆（vascular dementia,VD）大鼠胼胝体髓鞘相关蛋白表达的影响,为艾灸治疗VD提供依据。方法 Wistar大鼠经Morris水迷宫筛选后随机分为假手术组、模型组、艾灸组、西药组,每组12只。采用双侧颈总动脉永久结扎法制备VD大鼠模型。假手术组和模型组不作其他任何处理;艾灸组取“百会”“大椎”“神庭”悬灸20 min,每日1次;西药组用氯马斯汀（H1受体拮抗剂）溶液灌胃,每日2次。以上4组干预7 d为1个疗程,共3个疗程。采用Morris水迷宫检测干预前后大鼠学习记忆能力;免疫荧光染色和Western blot法检测大鼠胼胝体区髓鞘相关糖蛋白（myelin associated glycoprotein,MAG）、髓鞘碱性蛋白（myelin basic protein,MBP）表达水平。结果 与假手术组比较,模型组大鼠逃避潜伏期延长（P＜0.05）;与模型组比较,艾灸组、西药组逃避潜伏期均显著缩短（P＜0.05）。与假手术组比较,模型组胼胝体区MAG、MBP平均荧光强度显著降低（P＜0.05）;与模型组比较,艾灸组MAG、MBP平均荧光强度显著增强（P＜0.05）;与西药组比较,艾灸组MAG平均荧光强度显著增强（P＜0.05）,MBP平均荧光强度差异无统计学意义（P＞0.05）。与假手术组比较,模型组胼胝体区MAG、MBP表达水平下降（P＜0.05）;与模型组比较,艾灸组MAG、MBP表达水平增加（P＜0.05）;与西药组比较,艾灸组MAG表达水平增加（P＜0.05）,MBP表达水平差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 化瘀通络灸可改善VD大鼠的学习记忆能力,促进VD大鼠髓鞘相关蛋白MAG、MBP的合成,促使髓鞘再生。     

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨化瘀通络灸促血管性痴呆大鼠髓鞘再生的作用机制

目的 观察化瘀通络灸对血管性痴呆(vascular dementia, VD)大鼠胼胝体磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinositol 3 kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin, mTOR)信号通路的影响,探讨化瘀通络灸促VD大鼠髓鞘再生的作用机制。方法 经Morris水迷宫筛选后,随机选取12只大鼠纳入假手术组,剩余大鼠复制VD模型成功后,随机分为模型组、艾灸组、艾灸+LY294002组,每组12只。艾灸组予以化瘀通络灸干预,艾灸+LY294002组在化瘀通络灸干预的基础上予以PI3K抑制剂LY294002腹腔注射,采用Longa评分法评价各组大鼠神经功能损伤程度,Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力,Western blot法检测各组大鼠PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白的表达水平,神经髓鞘固蓝染色法观察各组大鼠胼胝体髓鞘的形态,透射电子显微镜观察各组大鼠髓鞘超微结构。结果 与假手术组比较,模型组和艾灸+LY294002组大...     

加味通腑汤对胃癌术后早期患者胃肠功能和营养状况的影响

目的 观察加味通腑汤联合肠内外营养对胃癌术后早期患者胃肠功能恢复和营养状况的改善作用。方法 将62例胃癌术后患者随机分为对照组与观察组,每组31例。在术后常规处理基础上,对照组给予肠内外营养支持,观察组在肠内外营养支持基础上给予加味通腑汤经鼻空肠营养管滴注。比较两组患者术后首次排气时间和首次排便时间,术前1 d、术后3 d和术后7 d前白蛋白（prealbumin,PA）、白蛋白（albumin,Alb）、血清总蛋白（total serum protein,TP）及血红蛋白（hemoglobin,Hb）水平,同时观察患者术后腹胀、恶心呕吐、肺部感染、腹腔感染、吻合口瘘等并发症发生情况。结果 与对照组比较,观察组患者术后首次排气时间和首次排便时间显著缩短（P＜0.05）;术后3 d,两组患者PA、Alb、TP、Hb均较术前1 d显著降低（P＜0.05）;术后7 d,两组患者PA、Alb、TP、Hb均较术后3 d显著升高（P＜0.05）,且观察组患者PA、Alb、TP、Hb均明显高于对照组（P＜0.05）;观察组患者术后并发症的发生率明显低于对照组（P＜0.05）。结论 胃癌术后早期肠内外营养支持联合加味通腑汤小肠内滴注,可以促进胃肠功能恢复,改善营养状况,降低术后并发症的发生率。     

芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变的影响

目的 观察芪归糖痛宁颗粒对大鼠糖尿病周围神经病变(diabetic peripheral neuropathy, DPN)的疗效,并探讨其作用机制。方法 以链脲佐菌素(streptozotocin, STZ)一次性腹腔注射复制DPN大鼠模型。于模型复制第3天起,各治疗组分别灌胃给予相应的受试药物,正常组和模型组灌胃给予等容量溶媒,疗程8周。实验结束后,测定大鼠热痛阈值、血液流变学指标、血清神经生长因子(nerve growth factor, NGF)、髓磷脂碱性蛋白(myelin basic protein, MBP)的含量,同时取固定部位坐骨神经,用苏木精 伊红染色观察坐骨神经组织病理学变化。结果 与模型组比较,芪归糖痛宁颗粒组能明显改善DPN大鼠坐骨神经病理组织学损伤程度,同时降低大鼠热痛阈（P＜0.05）,降低大鼠全血黏度低切、中切、高切,血浆黏度,红细胞聚集指数及MBP含量（P＜0.05,或P＜0.01）,升高血清NGF含量（P<0.05）。结论 芪归糖痛宁颗粒对大鼠DPN具有一定的治疗作用。     

用酶免疫斑点法快速检测精浆特异蛋白P_(30)鉴定人精斑

作者用自制的辣根过氧化物酶标记的抗精浆特异蛋白P_(30) 单克隆抗体,建立了简便快速检测精斑中P_(30) 鉴定人精斑的斑点法。通过颜色变化判定结果,阳性为紫蓝色斑点,阴性为无色。结果表明,仅人类精斑和前列腺浸液出现阳性斑点,人体其他体液及组织器官浸液均为阴性。对动物血、精斑也无交叉反应。标定精斑稀释到1600倍亦可得到阳性结果。     

灯盏花注射液对脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：研究灯盏花注射液对避灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,观察灯盏花注射液对血清胞浆酶及fos蛋白表达的影响。结果：脑缺血现后血清胞浆酶含量及foa蛋白表达显增加（P＜0．01）;灯花注射液可明显降低脑缺血再灌注后血清胞浆酶含量,下调fos蛋白的高表达（P＜0．01）,结论：灯盏花注射液对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与其犯罪 清胞浆酶及下调fos蛋白高表达有关。     

寨卡病毒NS1蛋白在杆状病毒系统中的表达及免疫原性分析

本研究旨在采用杆状病毒表达系统表达并纯化寨卡病毒(Zika virus,ZIKV)NS1蛋白,并对其免疫原性进行鉴定。将ZIKV NS1基因克隆至杆状病毒载体pFastBac1中,构建重组转移载体,将其转化DH10Bac感受态细胞进行蓝白斑筛选。将鉴定正确的重组杆粒转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDSPAGE和Western-blot鉴定蛋白正确表达后,将其感染High5细胞,大量表达重组蛋白,并用镍柱亲和层析法进行纯化,将纯化后的ZIKV NS1蛋白免疫BALB/c小鼠,进行血清特异性抗体效价检测。最终结果显示,获得了纯度较高分泌表达的ZIKV NS1蛋白,并且血清特异性抗体效价实验表明,纯化的ZIKV NS1蛋白能够诱导小鼠产生特异性免疫反应,有很好的免疫原性。本研究为ZIKV疫苗和诊断试剂盒的研发奠定了重要的基础。     

Axonal injury in young pediatric head trauma: a comparison study of β-amyloid precursor protein (β-APP) immunohistochemical staining in traumatic and nontraumatic deaths

We tested the independent utility of β-amyloid precursor protein (β-APP) immunohistochemical staining as evidence of brain trauma in the deaths of young children. Blinded reviewers retrospectively reviewed immunostained brain tissues from homicidal deaths, age-matched control cases without evidence of trauma, as well as cases of sudden infant death syndrome (SIDS). The reviewers correctly identified five of the seven cases with documented inflicted head trauma. However, one of seven age-matched control cases and one of 10 SIDS/sudden unexplained death in infancy (SUDI) cases demonstrated staining patterns similar to those seen in cases of inflicted trauma. We discuss these cases and the circumstances surrounding them with the intent to explain the difficulties associated with immunohistological interpretation of axonal injury. Although the utility of β-APP is quite powerful if not confounded by global hypoxic-ischemic injury, ultimately, β-APP studies should be only one piece of information in the determination of cause and manner of death.     

小反刍兽疫病毒非结构蛋白V基因的克隆及其编码蛋白的结构与功能

采用RT-PCR技术从小反刍兽疫病毒总RNA中扩增到P基因一段896bp序列,克隆至pET-30a(+)载体中,对其进行最大开放阅读框691位定点突变(插入一个G碱基),获得小反刍兽疫病毒V基因,利用生物信息学软件对麻疹病毒属V蛋白氨基酸序列进行比对,同时使用I-TASSER服务器对小反刍兽疫病毒V蛋白三级结构进行同源建模,分析其结构与功能。结果显示,小反刍兽疫病毒V蛋白氨基酸序列与麻疹病毒、犬瘟热病毒、牛瘟病毒和海豹瘟病毒V蛋白的相似性分别为61.1%、56.0%、61.7%和51.7%,三级结构预测显示V蛋白由多α-螺旋的N-端结构域、中间结构域和含锌指结构的C-端结构域组成。本研究成功克隆了小反刍兽疫病毒V基因,预测分析了V蛋白结构和功能的关系,为其分子生物学和功能的进一步研究奠定了基础。