电针对ApoE-/-小鼠肝脏PPARα与TNF-α蛋白表达的影响

目的 探讨电针对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha, PPARα)、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）蛋白表达的影响。方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、药物组及电针组,每组10只。采用高脂饲料喂养14周的方法复制高脂血症模型。电针组小鼠接受单侧神门、内关、足三里、三阴交电针,药物组小鼠每日接受40 mg/kg辛伐他汀灌胃。免疫组织化学法检测肝脏中PPARα、TNF-α的表达,采用Western blot检测肝脏PPARα的蛋白表达。结果 电针组小鼠肝脏中PPARα的蛋白表达水平高于模型组,但差异无统计学意义（P>0.05）,肝脏TNF-α表达水平显著低于模型组（P<0.05）。与模型组比较,电针组小鼠肝细胞内小颗粒脂滴减少,肝细胞凋亡和坏死减少,且肝细胞保存相对完整。结论 电针通过抑制炎性因子的表达而减少脂质沉积,治疗动脉硬化。     

电针对功能性消化不良大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6表达的影响

目的 观察电针对功能性消化不良（functional dyspepsia,FD）大鼠十二指肠促肾上腺皮质激素释放激素受体2（corticotropin-releasing hormone receptor 2,CRHR2）及NOD样受体家族pyrin结构域蛋白6（NOD-like receptor family pyrin domain containing 6,NLRP6）表达水平的影响。方法 将40只雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组10只。模型组和电针组均选用多因素干预法复制FD大鼠模型,空白组进行常规饲养。模型复制结束后,电针组大鼠电针“印堂”“内关”“足三里”,每次30 min,每日1次,连续14 d。观察各组大鼠干预前后的一般状态及体质量变化;干预结束后,采用半固体糊灌胃法检测各组大鼠胃排空率及小肠推进率;苏木精—伊红染色法观察大鼠胃窦组织形态变化;蛋白免疫印迹法检测大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平;阿利新蓝染色法观察大鼠十二指肠形态变化。结果 与空白组比较,模型组大鼠精神欠佳,体质量、胃排空率及小肠推进率明显降低(P<0.05);与模型组比较,电针组大鼠活泼好动,体质量、胃排空率及小肠推进率明显增加(P<0.05)。模型组大鼠胃窦黏膜排列疏松,有轻度水肿,存在少量淋巴细胞,十二指肠绒毛上皮细胞间隙增宽,肠绒毛结构破碎,可见散在分布的上皮细胞;电针组大鼠胃窦组织结构完整,固有层排列紧密,无明显炎症反应及病理改变,十二指肠绒毛上皮细胞间隙清晰,排列紧密,组织结构完整。与空白组比较,模型组大鼠十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与模型组比较,电针组CRHR2、NLRP6蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。结论 电针可改善FD大鼠消化不良症状,提高FD大鼠胃肠动力,降低FD大鼠十二指肠黏膜通透性,减轻大鼠胃肠炎症反应,其机制可能与提升十二指肠CRHR2、NLRP6蛋白表达水平有关。     

平喘宁调节TRPM8通道相关蛋白干预寒性哮喘大鼠气道炎症的机制研究

目的 探究冷刺激对哮喘大鼠气道炎症的影响以及平喘宁对寒性哮喘大鼠气道炎症的治疗作用及机制。方法 将72只大鼠随机分成正常组,卵清蛋白（ovalbumin,OVA）组,模型组（OVA+冷刺激）,平喘宁低、中、高剂量组,桂龙咳喘宁组以及地塞米松组,每组9只。除正常组外,其余各组大鼠采用OVA或OVA联合冷刺激建立哮喘及寒性哮喘大鼠模型,模型复制完成后,分别给予生理盐水及对应药液灌胃21 d。观察记录各组大鼠的一般行为学情况;采用HE染色检测大鼠肺组织病理变化;ELISA法检测支气管肺泡灌洗液（bronchoalveolar lavage fluid,BALF）中白细胞介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和胸腺基质淋巴细胞生成素（thymic stromal lymphopoietin,TSLP）水平;Western blot法检测瞬时受体电位美拉塔素8（transient receptor potential melastatin subtype 8,TRPM8）、粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子（granule macrophage-colony stimulating factor,GM-CSF）、TSLP蛋白表达水平。结果 与正常组比较,OVA组、模型组大鼠均出现呼吸急促、腹部收缩明显等行为学表现;病理结果显示支气管管壁增厚、肺组织及支气管周围可见大量炎症细胞浸润;BALF中IL-1β、IL-6、TSLP水平显著升高（P＜0.05）;肺组织TRPM8、GM-CSF、TSLP蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与模型组比较,平喘宁可改善大鼠的行为学表现,减轻支气管管壁增厚、肺组织及支气管周围炎症细胞浸润,显著降低大鼠BALF中IL-1β、IL-6、TSLP水平（P＜0.05）,显著降低肺组织TRPM8、GM-CSF、TSLP蛋白表达水平（P＜0.05）。结论 冷刺激会加重哮喘大鼠气道炎症反应,平喘宁可能通过调控寒性哮喘大鼠TRPM8及相关蛋白表达水平,减轻寒性哮喘大鼠气道炎症反应,进而达到治疗哮喘的作用。     

猪圆环病毒2型感染对猪肺泡巨噬细胞生物学活性的影响

将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康仔猪,在接种后不同时间宰杀,收集猪肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用FITC-Annexin V/PI双染色流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测PAM凋亡现象,通过EA花环试验测定Fc受体数目,通过吞噬鸡红细胞试验测定吞噬功能,分析PCV2感染对PAM生物学活性的影响。结果显示,在整个试验期内2种方法均没有检测到PAM凋亡,表明PCV2感染不会诱发PAM凋亡。PAM的Fc受体数和吞噬鸡红细胞数的变化规律一致,与对照组相比,两者数量在接种后第3 d明显下降,第7 d有所回升,之后基本恢复,表明PCV2感染后PAM吞噬和清除病原的功能出现短暂下降。     

柯萨奇病毒和腺病毒受体在VMC和DCM猝死者心肌组织中的表达

目的探讨病毒性心肌炎(VMC)和扩张性心肌病(DCM)的发病机制及相互关系。方法应用改良免疫组化技术检测病毒性心肌炎(28例)、扩张性心肌病(31例)和对照组19例。结果CAR阳性表达为棕色,主要表达于心肌细胞膜。在VMC心肌中均检测到较高水平的CAR表达(免疫组化面积积分为4.3975±0.0365);DCM组26例心肌组织中有较高水平的CAR表达(4.2064±0.0526),有5例几乎无表达(0.0723±0.0014),对照组心肌中几乎未检测到CAR的表达(0.0731±0.0362),VMC组及DCM组与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。结论VMC和DCM心肌组织中CAR表达明显高于对照组,提示VMC和DCM的发病都有病毒感染的参与,两者可能来自同一个病因。     

CCK受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠海马神经元CaMKⅡα mRNA及蛋白表达的影响

目的研究胆囊收缩素(CCK)受体拮抗剂对吗啡戒断大鼠海马神经元CaMKⅡαmRNA及蛋白表达的影响,进一步探讨CCK受体拮抗剂抑制吗啡戒断症状的作用机制。方法应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡,建立大鼠吗啡躯体依赖模型,将模型鼠的海马组织制成细胞悬液,体外给予不同剂量CCK-A及CCK-B受体拮抗剂,采用RT-PCR和western blot技术分别检测海马神经元CaMKⅡα的mRNA及蛋白表达。结果①慢性吗啡成瘾大鼠海马神经元CaMKⅡα mRNA及蛋白表达与对照组相比均显著增高;②成瘾大鼠海马神经元细胞在给予纳洛酮催促戒断后,与对照组及吗啡组相比,CaMKⅡα mRNA及蛋白均显著降低;③纳洛酮催促戒断组加入不同剂量的CCK-A受体拮抗剂(CR-1409)、CCK-B受体拮抗剂(CR-2945),CaMKⅡα mRNA及蛋白表达与纳洛酮组相比显著升高,并随浓度的升高而升高,两种拮抗剂的作用以CR-2945起主要作用。结论CCK-A、CCK-B受体拮抗剂可以有效地抑制因纳洛酮催促戒断所引起的CaMKⅡα mRNA及蛋白表达降低,并具有剂量依赖性。     

牛IgG2 Fc受体在COS-7细胞表面的稳定表达

将牛IgG2 Fc受体(boFcγ2R)编码区cDNA亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3bo2R;以重组质粒转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测boFcγ2R在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和连续克隆化,在转染细胞表面稳定表达了boFcγ2R受体分子,转染细胞的玫瑰花环形成率达90%。最后获得稳定表达boFcγ2R受体分子的COS-7转染细胞系,为受体的功能研究提供了良好的技术平台。     

鸡Toll样受体3胞外区片段的克隆表达及多克隆抗体的制备

以笔者所在课题组扩增测序的广西三黄鸡Toll样受体3(TLR3)基因为基础,采用降落PCR法从鸡外周血淋巴细胞中扩增其胞外功能区片段chTLR3-LRR,并构建该片段的原核表达重组质粒,通过优化蛋白表达条件,用获得的融合蛋白免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,通过Western-blot鉴定多克隆抗体的特异性。结果显示,该片段长度为834bp,与预测的片段大小、碱基序列相符;构建的原核表达重组质粒pET-chTLR3-LRR经IPTG诱导后,表达出预期的30ku的重组蛋白,所获得的鼠抗鸡TLR3多克隆抗体能够与经传染性法氏囊炎病毒(IBDV)刺激后的鸡胚成纤维细胞的TLR3蛋白发生特异性免疫反应。表明,所选择的区域片段具有很好的免疫原性,制备的鼠抗鸡TLR3多抗具有良好的特异性,这为进一步研究鸡TLR3的功能提供了重要材料。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒侵入介体的研究进展

为探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞的途径,介绍了PRRSV的细胞嗜性和其侵入的介体(硫酸乙酰肝素、唾液酸黏附素和CD163等),以及它在病毒侵入宿主细胞时所表现的生物学功能,提出了PRRSV入侵猪肺泡巨噬细胞的一般途径。     

Analysis of Dopamine D2 Receptor (DRD2) Gene Polymorphisms in Cannabinoid Addicts*

Abstract: The gene encoding the dopamine D2 receptor (DRD2) has been suggested as a candidate gene for substance dependence. In this study, the possible association between Taq1A and Taq1B DRD2 polymorphisms and cannabinoid dependence was investigated. One hundred and twelve cannabinoid addicted and 130 healthy control subjects were included in this study. The Taq1A and Taq1B genotypes were determined in all subjects by polymerase chain reaction. For each polymorphism (A or B), the subjects were categorized into three groups according to their genotype, that is, the subjects with alleles A1/A1, A1/A2, A2/A2; B1/B1, B1/B2, and B2/B2. A significant association was found between Taq1A gene polymorphism and cannabinoid addicts compared to the control subjects. This finding suggests that polymorphism of the Taq1A, but not the Taq1B, may be associated with the susceptibility to cannabinoid dependence. Further clinical studies are required to be carried out for confirmation and evaluation of these findings.