牛病毒性腹泻病毒荧光标记单克隆抗体的制备及鉴定

为制备可以区分牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因型的荧光标记单克隆抗体,分别利用分泌抗牛病毒性腹泻Ⅰ型病毒(BVDV-Ⅰ)、牛病毒性腹泻Ⅱ型病毒(BVDV-Ⅱ)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV-Ⅰ和BVDV-Ⅱ)单克隆抗体的杂交瘤细胞株BV1、BV2、BV12,腹腔接种BALB/c小鼠,大量制备单克隆抗体,用辛酸-硫酸铵法提纯,经活性、浓度、纯度检测合格后,利用搅拌法与异硫氰酸荧光素(FITC)偶联,制备成3种荧光标记单抗。结果显示,3种标记单抗的F/P比值范围均在2.0～4.0之间;细胞DFA法测定其效价均≥1∶200;抗原交叉试验证实标记单抗的特异性良好;标记单抗可以检测到1TCID50的病毒粒子;临床初步应用表明,3种标记单抗的阳性检出率均≥95%,与进口BVDV荧光抗体的符合率为100%。3种荧光抗体的研制对BVDV基因分型鉴定、NCP型BVDV的鉴定以及BVDV与CSFV的鉴别诊断有很好的应用价值,值得进一步开发。     

沂蒙黑山羊发情周期不同阶段卵巢中FSHR和LHR基因表达规律的研究

选取健康未孕的成年沂蒙黑山羊,按发情周期(间情期、发情前期、发情期、发情后期)宰杀取卵巢,采用实时荧光定量差异显示PCR(real-time qRT-PCR)技术,以GAPDH为持家基因,对处于发情周期不同阶段的沂蒙黑山羊卵巢组织内的卵泡刺激素受体(FSHR)、黄体生成素受体(LHR)基因进行了mRNA水平上的相对定量分析。发现FSHR mRNA、LHR mRNA在黑山羊发情周期的卵巢中都有表达。FSHRmRNA的相对表达量依次为0.618 7±0.294 42、1.290 2±0.290 24、2.575 9±0.458 80、0.790 8±0.261 93,其中发情期最高,间情期最低,两者差异极显著(P<0.01)。LHR mRNA的相对表达量依次为2.284 0±0.146 22、0.508 9±0.0789 9、0.340 3±0.045 38、2.859 2±0.205 66,其中发情后期相对表达量最高,发情期最低,两者差异极显著(P<0.01)。结果表明,FSH、LH在黑山羊的整个发情周期中是相互作用、相互影响的。     

10个STR基因座荧光复合扩增体系的研制

目的建立10个STR基因座荧光标记复合扩增体系,并评价其法医学应用价值。方法在北京、山西、广东汉族,辽宁满族、西藏藏族群体中调查STR基因座遗传多态性,筛选出9个具有高度多态性和法医应用价值的STR基因座及性别基因座。构建四色荧光素标记复合扩增体系,制备等位基因分型标准物,编制分析软件,并对体系的种属特异性、灵敏度、稳定性、混合样本等检测能力进行考察。结果建立的复合扩增体系遗传稳定好,累积非父排除率可达0.999 96,累积个体识别率可达0.999 999 999 999 3;与CODIS系统均不存在连锁遗传;各基因座间布局合理、无杂峰、扩增结果清晰易辨,并可实现检测分析自动化。体系种属特异性较好,灵敏度为0.1ng,稳定性好,混合样本检出范围在2∶8～8∶2之间。实际案例检材检测结果好。结论本文建立的复合扩增体系在法医学实践中有较好的应用价值。     

Application of mist to fingermark detection: Misting with high-boiling-point liquid containing p-dimethylaminocinnamaldehyde and cyanoacrylate

In order to detect latent fingerprints that could be damaged by liquid or powder reagents, non-destructive processes such as gaseous reagents have been developed. In this report, we propose the use of fine mist generated when hot vapor of high-boiling-point liquids is rapidly cooled by surrounding air for fingermark detection. Octyl acetate (OA), 2-phenoxyethanol (2PE), and methyl decanoate (MD) were found to efficiently produce mist when heated to 230°C. By combining these liquids with p-dimethylaminocinnamaldehyde (DMAC) and cyanoacrylate (CN), our team demonstrated effective fluorescence staining of cyano-treated fingermarks using DMAC/OA misting or DMAC/2PE misting, and one-step fluorescence detection of latent fingermarks without cyanoacrylate treatment using DMAC/OA/CN misting or DMAC/MD/CN misting. Fingermark fluorescence was efficiently observed by excitation with a blue LED light (max. wavelength 470 nm) equipped with an interference filter and passing through a 520 nm long-pass filter. We successfully obtained fluorescent images from fingermarks on several substrate materials using the developed misting method.     

胶带粘面手印荧光显现剂的研发与应用

目的根据胶带粘面上潜在手印的特点,利用染料和潜手印的理化性质,研究开发胶带粘面手印荧光显现剂。方法在各种胶带粘面上显现潜在手印,并与常规的碳素墨水染色法进行比较。结果在长波紫外线照射下手印呈黄色明亮荧光,手印纹线清晰、连贯,基本不受手印遗留时间、客体表面颜色和性质的影响。结论胶带粘面上的汗潜手印和血潜手印用荧光显现剂显现效果优于碳素墨水染色法,在实际案件的侦破中有较好的应用前景。     

纳米二氧化钛荧光粉末显现潜在手印研究

目的使用荧光染料包覆纳米二氧化钛颗粒,制备具有荧光效果的纳米二氧化钛粉末材料,并探索应用纳米二氧化钛荧光粉末显现潜在手印的方法。方法使用实验室合成的二酰亚胺染料与纳米二氧化钛微粒按照一定质量比混合制备形成荧光粉末,通过扫描电子显微镜对其进行表征,观察颗粒结构特征。在玻璃、瓷砖、透明塑料片、彩色塑料包装、易拉罐5类非渗透性客体上捺印手印,观察纳米二氧化钛荧光粉末对不同非渗透性客体上新鲜潜手印的显现效果。分别在5种客体上制作遗留时间为1、4、7、15d的手印样本,考察遗留时间对纳米二氧化钛荧光粉末显现自然陈旧手印效果的影响。将新鲜手印置于标准大气压100℃条件下分别加热1~72h,使用纳米二氧化钛荧光粉末显现,考察其对高温老化手印的显现效果。结果纳米二氧化钛荧光粉末为粒径100~200nm的圆形颗粒;在蓝绿光激发下可发出较强的荧光,能显现多种非渗透性客体上的新鲜手印,与背景反差明显并且能显著降低复杂背景对手印纹线的影响;显出新鲜手印中80%以上具有鉴定条件。纳米二氧化钛荧光粉末对遗留15d以内的陈旧手印仍具有较好的显现效果。100℃高温环境对手印显现效果没有明显影响。结论纳米二氧化钛荧光粉末经济、环保,显现操作简单,易于推广。     

猪PD-1分子及其配体的实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

根据猪程序性死亡因子PD-I及其配体PD-LI和PD-L2的基因序列,分别设计了特异性引物和TaqMan探针,以10倍系列稀释的重组质粒pMD-PD-1、pMD-PD-L1和pMD-PD-L2为标准品,对实时荧光定量PCR的条件进行优化,以建立定量检测这3个基因的方法.结果表明,建立的方法在1×10~2～1×10~8copies/μL模板范围内具有良好的线性关系(r~2>0.99),扩增效率均高于96%,可检测至少100 copies的阳性标准品.利用该方法对猪外周血单核细胞中这3个基因的表达情况进行了检测,结果也表明该方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可应用于临床样品的检测.     

串联型黄色荧光蛋白表达载体的构建及其在柔嫩艾美球虫中的瞬时表达

为了探索黄色荧光蛋白(YFP)在柔嫩艾美球虫子孢子中的瞬时表达情况,以柔嫩艾美球虫的组蛋白4(Histone4,H4)上游启动序列和肌动蛋白(Actin)下游调控序列为元件构建了串联型YFP重组转染载体pH4-YFP-YFP-ACT。将构建的载体经电穿孔法转染柔嫩艾美球虫子孢子,并在MDBK细胞中进行培养。结果显示,在荧光显微镜下可以观察到黄色荧光。提示,串联型YFP可以在柔嫩艾美球虫中瞬时表达。     

不同培养系统牛体外受精囊胚的质量评价

采用双重荧光分染方法 ,结合免疫外科手术 ,对来自TCM 199和SOF培养系统的牛体外受精囊胚质量进行了评价。结果显示 ,TCM 199培养系统的囊胚发育率为 31.9% (335 / 10 74 ) ,平均细胞总数为 73.1,内胚团细胞数为 16 .8,其中生存细胞占 99.5 % ;SOF培养系统的囊胚发育率为 2 0 .9% (2 4 8/ 1186 ) ,平均细胞总数为 5 6 .2 ,内胚团细胞数为 11.3,其中生存细胞占 96 .5 %。证实 ,使用TCM 199生产的囊胚质量和囊胚发育率优于SOF培养系统。     

杭州地区猪Ⅱ型圆环病毒抗体的血清学调查

从浙江省杭州地区 2 8个猪场采集猪血清 1 6 77份 ,用间接荧光免疫试验进行了猪Ⅱ型圆环病毒 (PCV 2 )抗体检测。共检出抗体阳性血清 96 0份 ,总阳性率为 5 7.2 5 % ,其中经产母猪的阳性率为 6 2 .32 % ,后备母猪的阳性率为 5 5 .5 5 % ,断奶后仔猪的阳性率为 5 5 .4 8% ,断奶前仔猪的阳性率为 5 2 .98%。血清学调查结果显示 ,PCV 2在杭州地区猪场的感染较普遍