复方五仁醇胶囊主要含量质量控制的研究

目的:建立复方五仁醇胶囊中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的RP-HPLC含量测定方法。方法:Lichrosphere C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 m l/m in,柱温30℃,检测波长203 nm。结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1分别在0.216~1.080μg(r=0.999 5)、0.820~4.100μg(r=0.999 9)和0.816~4.080μg(r=0.999 5)范围内线性关系良好,平均回收率分别为97.38%、96.41%和96.91%。结论:该法简便、准确、分离效果好、专属性强,可用于复方五仁醇胶囊的质量控制。     

平喘宁对寒性哮喘大鼠PI3K/Akt信号通路相关信号分子表达的影响

目的 探讨平喘宁调节PI3K/Akt信号通路相关蛋白干预寒性哮喘大鼠的作用机制。方法 随机将105只SD健康雄性大鼠分为正常组、模型组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组、桂龙咳喘宁组、地塞米松组,每组15只。除正常组外其余各组以卵蛋白进行致敏,并予以哮喘诱导及寒冷刺激。模型复制后,平喘宁高、中、低剂量组（14.6、7.3、3.7 g/kg）和地塞米松组（0.4 mg/kg）、桂龙咳喘宁组（0.4 g/kg）按相应剂量灌胃治疗,正常组和模型组用生理盐水代替。取肺组织,用苏木素-伊红染色法检测病理变化,实时荧光定量PCR法检测Bad、叉头蛋白O1（forkhead box protein O1,FKHR）、蛋白激酶C（protein kinase C,PKC） mRNA的表达水平。结果 与正常组比较,模型组大鼠肺组织管壁明显增厚,支气管结构明显紊乱,有炎症细胞浸润等现象;与模型组比较,药物治疗组大鼠肺组织的病理变化均有所改善。与正常组比较,模型组大鼠肺组织Bad mRNA、FKHR mRNA、PKC mRNA表达差异均有统计学意义（P＜0.05）;与模型组比较,药物组Bad mRNA、FKHR mRNA、PKC mRNA表达差异均有统计学意义（P＜0.05）,并且平喘宁对PKC、Bad、FKHR mRNA表达的效应具有剂量依赖性,平喘宁高剂量组作用优于其他药物组。结论 平喘宁可以通过调控PI3K/Akt信号传导通路中PKC、FKHR、Bad的表达水平,减缓寒哮大鼠肺组织气道重塑,减轻炎症反应,改善哮喘症状。     

黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的 观察黄连水煎液微粒体系对大鼠小肠上皮细胞紧密连接结构与紧密连接蛋白-1（zonula occludens-1,ZO-1）表达的影响。方法 通过常规煎煮获得黄连水煎液,经高速离心得黄连水煎液微粒及去微粒水煎液。采用大鼠肠循环灌注模型,分别用空白Kreb-Ringers（K-R）液、黄连水煎液、微粒重悬液和去微粒水煎液对大鼠空肠段进行循环灌注。2 h后取下肠段,以透射电子显微镜观察细胞紧密连接结构的变化,采用免疫组织化学法检测空肠黏膜中ZO-1的表达水平。结果 空白K-R液组与去微粒水煎液组小肠上皮细胞间连接紧密无明显间隙,ZO-1蛋白呈蜂窝或点状聚集于上皮细胞周围;黄连水煎液组与微粒重悬液组小肠上皮细胞间隙增大,且ZO-1表达水平显著降低（P<0.05）。结论 黄连汤剂中活性成分肠吸收与黄连水煎液微粒体系调节小肠紧密连接结构和ZO-1表达水平有关。     

平喘宁调节ERK信号通路干预哮喘气道重塑的机制

目的 通过观察平喘宁干预后哮喘模型大鼠ERK信号转导通路相关蛋白以及基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase-9, MMP-9）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1）的表达,探讨平喘宁调节寒性哮喘大鼠气道重塑的机制。方法 采用SPF级雄性SD大鼠复制寒性哮喘模型。将大鼠随机分成正常对照组,模型组,地塞米松组,桂龙咳喘宁组以及平喘宁高、中、低剂量组。连续给药4周后,光镜下观察肺组织病理形态学变化,采用免疫组织化学法检测肺组织中TIMP-1、MMP-9表达水平;采用Western blot法检测大鼠肺组织血小板源性生长因子（platelet derived growth factor, PDGF）、细胞外信号调节激酶-1（extracellular signal-regulated kinase 1,ERK1）、磷酸化细胞外信号调节激酶-1（phosphorylated ERK1, p-ERK1）的表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组有明显炎性细胞浸润、气管上皮脱落增多、气管平滑肌增厚等气道重塑现象;与模型组比较,各治疗组炎性细胞浸润减少,气管上皮脱落减少,平滑肌增厚情况改善,气道重塑均得到适当缓解。与正常对照组比较,模型组MMP-9、TIMP-1的表达水平显著升高（P<0.05）;而与模型组比较,平喘宁各剂量组MMP-9、TIMP-1表达水平均显著下降（P<0.05）,尤其是平喘宁高剂量组下降最为明显。与正常对照组比较,模型组PDGF以及ERK1、p-ERK1蛋白的表达水平显著升高（P<0.05）;而与模型组比较,药物治疗组PDGF以及ERK1、p-ERK1蛋白的表达水平均显著下降（P<0.05）。结论 平喘宁可通过调节ERK信号通路减轻哮喘大鼠气道炎性反应,延缓气道重塑。     

人参皂苷Rg1抑制小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎的作用及免疫机制

目的观察人参皂苷Rg1对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)的抑制作用及其对脾淋巴细胞T细胞亚群和外周血细胞因子水平的影响。方法采用C57BL/6小鼠皮下多点注射MOG35-55、百日咳毒素的方法复制EAE模型。将EAE小鼠随机分为模型组,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组,同时设置正常对照组,每组6只。首次免疫后第10天予以不同剂量Rg1腹腔注射,连续给药14 d。第35天处死小鼠后取脊髓,观察各组小鼠脊髓炎症细胞浸润和脱髓鞘等病理变化,采用流式细胞仪检测小鼠脾淋巴细胞Th1、Th17、Treg细胞亚群,采用ELISA法检测外周血白细胞介素(interleukin,IL)-17A、干扰素γ(interferon gamma,IFN-γ)、IL-6、IL-10水平。结果与模型组比较,人参皂苷Rg1低、中、高剂量组小鼠神经症状评分显著下降(P<0.05),脊髓炎症细胞浸润评分和脱髓鞘评分显著降低(P<0.05),脾淋巴细胞CD4+、CD8+、Th1、Th17 T细胞亚群比例显著降低(P<0.05),Treg(CD4+CD25+FoxP3+)比例显著升高(P<0.05),外周血IFN-γ、IL-17A、IL-16水平显著降低(P<0.05),IL-10水平显著升高(P<0.05),人参皂苷Rg1的作用呈现明显的剂量依赖性。结论人参皂苷Rg1可显著改善EAE小鼠的临床症状,减轻中枢神经系统脱髓鞘和炎症细胞浸润,其作用可能与调控Th17、Th1、Treg细胞亚群失衡,抑制炎症细胞因子表达相关。     

健脾化瘀方通过调节RASSF1A激活p38 MAPK信号通路治疗肝细胞癌的机制研究

目的 探讨健脾化瘀方治疗肝细胞癌的作用机制。方法 将SD大鼠随机分为对照组,健脾化瘀方含药血清低、中、高剂量组,每组10只;健脾化瘀方低、中、高剂量组大鼠分别灌胃健脾化瘀方4.32、8.64、17.28 g/kg,对照组灌胃等容积生理盐水。观察健脾化瘀方含药血清对肝癌细胞株HepG2和Huh7中Ras相关结构域家族1亚型A（Ras association domain family 1 isoform A, RASSF1A）、p38丝裂原激活的蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、细胞凋亡率、细胞增殖相关蛋白（p21、cyclin D1）、细胞凋亡相关蛋白［半胱天冬酶（cysteinyl aspartate specific proteinase,caspase）-3、caspase-8、caspase-9］的影响。采用RASSF1A小干扰RNA（RASSF1A siRNA）干扰RASSF1A的表达,将细胞分为对照组、阴性血清组、含药血清组、含药血清＋对照siRNA组、含药血清＋RASSF1A siRNA组,通过CCK-8、EdU、TUNEL、Western blot实验验证健脾化瘀方是否通过RASSF1A发挥抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用;采用p38 MAPK信号通路抑制剂SB203580抑制p38 MAPK信号通路,将细胞分为对照组、阴性血清组、含药血清组、含药血清＋SB203580组,通过CCK8、EdU、TUNEL、Western blot实验验证健脾化瘀方是否通过p38 MAPK信号通路发挥抑制肝癌细胞增殖、促进肝癌细胞凋亡的作用。结果 健脾化瘀方含药血清干预48 h后,RASSF1A mRNA和蛋白表达水平随着含药血清浓度的增加而升高,细胞凋亡率及p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）。与含药血清组比较,含药血清+RASSF1A siRNA组细胞中RASSF1A、p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平和细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。与含药血清组比较,含药血清+SB203580组细胞中p-p38、p21、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达水平和细胞凋亡率显著降低（P＜0.05）,细胞存活率及cyclin D1蛋白表达水平显著升高（P＜0.05）。结论 健脾化瘀方可通过调节RASSF1A的表达,激活p38 MAPK信号通路抑制肝细胞癌细胞的过度增殖,并促进凋亡。     

中西医结合治疗甲型H1N1流感26例

目的 观察痰热清注射液联合奥司他韦治疗甲型H1N1流感的临床疗效.方法 将确诊的50例甲型H1N1流感患者随机分为治疗组与对照组,两组均采用奥司他韦抗病毒治疗,治疗组加用痰热清注射液静脉滴注,治疗3～10 d.观察并比较两组咳嗽消失时间及临床疗效.结果 治疗组和对照组总有效率分别为80.77%、54.17%,两组临床总...     

活血通脉汤对术前骨折患者血管性血友病因子和血小板颗粒膜蛋白140的影响

目的 探讨术前应用活血通脉汤对骨折患者血管性血友病因子（Von Willebrand factor, vWF）和血小板颗粒膜蛋白140（granular membrane protein 140,GMP-140）的影响。方法 将60例闭合性股骨颈骨折（Garden Ⅳ型）患者随机分成对照组和实验组,每组各30例。所有患者入院后给予相同的骨科常规处理,即口服三七化瘀口服液及外敷伤科黄水纱,实验组加用活血通脉汤口服。所有治疗均至术前1 d。于入院当天及术前1 d分别检测vWF和GMP-140含量及行患肢血管超声检查。记录术中出血量及术后12、24 h伤口引流量。结果 入院当天,两组患者vWF和GMP-140水平均高于正常值,差异无统计学意义（P>0.05）;与术前1 d的对照组比较,实验组vWF和GMP-140水平显著降低（P<0.05）。两组术中出血量及术后12、24 h伤口引流量比较,差异无统计学意义（P>0.05）。术前1 d血管彩色超声检查,实验组未见深静脉血栓形成,而对照组有6例深静脉血栓形成,两组差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 活血通脉汤能降低骨折患者的vWF和GMP-140水平,降低血小板活化,减轻内皮细胞损伤,降低深静脉血栓的发生率。     

高效液相色谱法测定山核桃外蒲壳中4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量

目的 采用高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC）测定山核桃外蒲壳中4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量。方法 采用HPLC,色谱柱为Shim-pack 18 (250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-水-(40∶60)为流动相,流速为0.8 ml/min,检测波长为333 nm,柱温为25 ℃。结果 4,8-二羟基-1-四氢萘酮在1.13～20.34 μg/ml范围内与峰面积呈良好线性关系,r=0.999 9,平均回收率为101.8%,相对标准偏差为1.21%(n=6)。结论 所建立的HPLC准确可靠、结果稳定、重现性好,可用于山核桃外蒲壳4,8-二羟基-1-四氢萘酮的含量测定。     

天麻素通过下调ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞

目的 研究天麻素（gastrodin,Gas）通过调控ERK1/2-p38信号通路保护谷氨酸损伤的PC12细胞。方法 建立谷氨酸损伤的PC12细胞模型;甲基噻唑基四唑比色法测定细胞活力;Hochest 33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态;罗丹明123染色流式细胞术检测细胞线粒体膜电位;Western blot法检测细胞内p38、ERK1/2、p-p38、p-ERK1/2蛋白表达。结果 天麻素明显抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,在0.1~10 μmol/L剂量范围内呈一定的量效关系;天麻素升高谷氨酸损伤引起的细胞线粒体膜电位的降低,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白的表达。结论 天麻素对谷氨酸损伤的PC12细胞具有保护作用,其机制可能与升高线粒体膜电位水平,下调p-p38、p-ERK1/2蛋白表达,抑制细胞凋亡有关。