用ELISA和PCR检测异常妊娠妇女弓形虫感染

为了解兰州市妊娠妇女近年弓形虫感染情况 ,探讨异常妊娠与弓形虫感染的关系 ,分别采用ELISA和PCR检测了异常妊娠妇女血清中TOX IgM和TOX DNA。结果 ,1 3 5例异常妊娠妇女血清TOX IgM和TOX DNA阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 1 2 .5 9% (1 7/1 3 5 ) ,总阳性率为 1 3 .3 3 % (1 8/1 3 5 ) ,组间无显著差异 (P >0 .0 5 )。异常妊娠史妇女与妊娠期无异常孕妇的血清TOX IgM阳性率分别为 1 1 .1 1 % (1 5 /1 3 5 )和 6.0 2 % (3 2 /5 3 2 ) ,组间差异显著 (P <0 .0 5 ) ,相对危险度为1 .85。调查结果显示 ,兰州市弓形虫血清抗体阳性率较 1 994年略有上升 ,弓形虫感染的孕前检查应联合应用ELISA和PCR为宜。     

从聚丙烯酰胺凝胶中回收DNA片段直接PCR的简易方法

将聚丙烯酸胺凝胶中ＤＮＡ片段于ＰＣＲ缓冲液中电洗脱，加入ＰＣＲ反应试剂，直接扩增目的ＤＮＡ作进一步分析，ＤＮＡ片段回收效率为０．８９±０．０５，本方法简便、快速。     

应用降落PCR检测减蛋综合征病毒的研究

根据已发表的减蛋综合征病毒 (EDSV)核苷酸序列设计了 1对扩增长度为 1 .1kb左右的引物 ,采取降落PCR对EDSV gDNA进行扩增。结果 ,从 2份EDSV鸭胚尿囊液、3份人工感染鸡输卵管组织液的核酸抽提物中 ,均扩增出与设计大小完全一致的目的片段 ,而对照样品的扩增均为阴性 ,该方法最低可检测到 32pg的EDSV gDNA。表明该降落PCR用于检测EDSV特异性和敏感性均较强 ,可用于减蛋综合征的诊断     

猪胸膜肺炎放线杆菌PCR检测方法的建立

根据猪胸膜肺炎放线杆菌 (APP)外膜脂蛋白基因序列 ,设计合成了 1对特异性引物。经PCR扩增 ,APP 110标准血清型菌株均能扩增出大小为 980bp的DNA片段 ,而大肠埃希氏菌、猪多杀性巴氏杆菌、猪链球菌、猪肺炎霉形体和葡萄球菌等的扩增结果均为阴性。该方法检测APPDNA的敏感性可达 2pg。表明 ,此PCR方法特异性好 ,敏感性高 ,可用于猪传染性胸膜肺炎的快速诊断。     

检测987p+肠毒素性大肠埃希氏菌PCR方法的建立

以 98 7p菌毛结构基因保守序列为靶序列 ,设计合成了 1对可扩增 45 9bp目的片段的引物 ,建立了检测肠毒素性大肠埃希氏菌 987p菌毛基因的PCR方法。该方法对K 88 ( 为菌毛阳性 )、K 99 、F 41 参考菌株和链球菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的检测结果均为阴性 ;该方法的敏感度可达 10 2 CFU ,对 2 0株腹泻仔猪粪便分离物进行检测 ,有 1株为阳性 ,与血清学检测的结果一致。结果表明 ,此方法特异性和敏感性都很高 ,可用于临床 987p肠毒素性大肠埃希氏菌病的快速诊断和流行病学调查     

猪链球菌2型多重PCR快速检测方法的建立

根据猪链球菌16 S rDNA基因的种特异性基因序列和CPS基因的2型(1或/和2型)型特异基因序列设计了4条引物,建立了快速检测猪链球菌2型(1或/和2型)的多重PCR方法。利用保存的猪链球菌2型菌株和其他相关标准菌株作为参考菌株对该方法进行了敏感性和特异性试验。结果显示,所建立的多重PCR方法特异、敏感,对组织中的猪链球菌2型(1或/和2型)的最低检出水平为30 CFU/mL。用所建立的多重PCR方法对采自江西、北京、珠海、天津、四川等省市的猪扁桃体样品进行了检测,并通过细菌分离和玻片凝集试验对其检测结果进行了验证,结果显示,检出阳性符合率为100%,证实建立的多重PCR方法可用于猪链球菌2型的快速检测。     

Zimbabwe black population data on the six short tandem repeat loci – CSF1PO, TPOX, THO1, D3S1358, VWA and FGA

Allele frequencies for six tetrameric short tandem repeat (STR) loci CSF1PO, TPOX, THO1, D3S1358, VWA, and FGA were determined in a Black African sample population from Zimbabwe. All loci are highly polymorphic and meet Hardy-Weinberg expectations. An inter-class correlation test analysis detected only one departure from independence out of 15 pair-wise comparisons of the six loci (i.e., CSF1PO/VWA loci, P=0.026). The allele frequency data at four of the six STR loci in the Black African sample population are similar to African American data.     

猪圆环病毒2型套式PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登录的猪圆环病毒 2型 (PCV2 )的全基因组序列 ,设计了 2对引物 ,建立了检测PCV2的套式PCR方法。对该方法用序列分析、酶切等方法进行了鉴定。同时用该套式PCR方法对华南地区 2 87个猪场的 15 6 0份样品进行了检测 ,结果 ,983份为PCV2阳性 ,阳性率为6 3%。     

应用反转录-聚合酶链反应检测动物组织中的口蹄疫病毒

应用反转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术检测了猪和牛的扁桃体、淋巴结、脊髓、肌肉和蹄冠皮肤中的口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）。与接种乳鼠测毒法比较，该方法的灵敏度达０．１６ＬＤ５０～０．３２ＬＤ５０病毒量。检测人工感染后７～３５ｄ的猪组织样品７７份，２５份为阳性；接种乳鼠并盲传３代，乳鼠－间接血凝试验（ＩＨＡ）鉴定６份为阳性。检测人工感染后４～７ｄ的牛组织样品５２份，２０份为阳性；接种乳鼠－ＩＨＡ鉴定１２份为阳性。检测野外鲜肉样品４７份，１２份为阳性；任选其中８份样品接种细胞单层，盲传至第６～７代，先后有５份样品产生ＣＰＥ；其中６份样品同时接种乳鼠，盲传至第６～７代，３组乳鼠出现ＦＭＤＶ致病症状，ＩＨＡ鉴定为阳性。检测冻猪肉样品３７份，３份为阳性；冻牛肉样品９份、冻羊肉样品１０份，均为阴性     

全基因组扩增技术及其在法医遗传学中的应用前景

全基因组扩增技术是近年来发展起来的新型PCR技术,它提供了一种从微量基因组DNA获取大量遗传信息的途径,为法医处理微量检材提供了一个有用的工具。本文综述了全基因组技术及其种类和原理和其在法医遗传学方面的应用前景。