用反转录─聚合酶链反应快速鉴别新城疫病毒

根据新城疫病毒基因结构特点及强、弱毒株Ｆ０ 裂解位点的序列差异设计２ 对引物,建立了快速诊断新城疫并能鉴别诊断新城疫强、弱毒株的反转录聚合酶链反应（ ＲＴＰＣＲ） 技术。试验表明,该方法具有快速特异和操作简便等特点,不仅适用于对鸡胚毒的检测,也适用于对病鸡组织匀浆液的检测,是新城疫鉴别诊断和流行病学调查的颇具潜力的分子诊断方法。     

24个X-STR及7个Y-STR基因座复合扩增体系建立及法庭科学有效性验证

目的建立24个X-STR基因座及7个Y-STR基因座的复合扩增体系,进行24个X-STR基因座的遗传多态性调查,并评价该体系的法医学应用价值。方法采用六色荧光标记技术,对24个X-STR基因座(DXS6803,DXS10159,DXS10146,DXS7132,DXS10075,DXS8378,DXS7424,DXS101,DXS6795,HUMARA,DXS10074,DXS6801,DXS6789,DXS10135,GATA144D04,DXS7423,DXS10101,HPRTB,DXS10148,GATA165B12,DXS10103,DXS8377,DXS6797,DXS6810)进行复合扩增和毛细管电泳检测;调查山东汉族1057名无关男性个体24个X-STR基因座的遗传多态性,并对系统性能进行评价。结果本文建立的复合扩增体系中的24个X-STR基因座,在1057名个体中共检出1057种单倍型。方法特异性好,分型结果准确稳定,灵敏度达0.0625ng,实际案例常见生物检材的检验结果良好。结论该复合扩增检测体系可以用于实际案例检验,弥补商品化X-STR基因座复合扩增检测体系的不足,联合应用加入的Y-STR基因座适用于混合斑的鉴别。     

同时鉴定9种肉源种属的复合检测体系的建立及其应用

目的建立一种可以同时鉴定猪、牛、羊、鸡、鸭、猫、狗、鼠和鲤鱼的多重PCR检测方法,并测试其技术性能指标,评估其在法医学或食品安全事件中的应用价值。方法根据上述9种动物的线粒体细胞色素b基因,利用其片段中种间特异性强的序列设计引物,采用毛细管电泳检测平台对各种属PCR扩增产物进行检测,依据扩增片段长度的差异与标记的荧光对初始模板的肉源种属进行鉴别;并通过扩增特异性、实际样本测试、混合样本检测灵敏度等指标评价该方法在实际法医学或食品安全案件中的应用价值。结果经过验证,建立的同时鉴定9种肉源种属的复合检测体系对其中任意一个种属的检测特异性均较高,且灵敏度较强,能够满足绝大多数法医学或食品安全案件中的检测要求。结论本研究建立的肉源种属复合检测体系可以在法医学未知种属样本的鉴定及食品安全肉类掺假等案件中提供帮助。     

鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌(RA)1～19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法.结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10~(-5)g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10~4CFU/mL.证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定.     

2010年四川省黑热病疫区利什曼原虫家犬感染情况的调查

为了解四川省黑热病疫区黑水县、汶川县、九寨沟县、茂县和北川县2010年利什曼原虫的家犬感染情况,采用荧光定量PCR反应检测自上述地区采集的584头份犬前肢静脉血样本。结果显示,总阳性检出率为18.1%,其中黑水县25.3%、汶川县24.7%、九寨沟县24.6%、茂县12.3%、北川县8.3%。按照性别、年龄差异将样本分组后对检测结果进行数据统计分析、比较组间差异,结果显示性别组阳性检出率没有显著差异(P>0.05),雄性高于雌性;年龄组差异显著(P<0.05),1岁以上犬易感。检测结果对正确预测四川省黑热病疫区疾病流行趋势,保障人民健康安全和公共卫生安全具有指导意义。     

三个柔嫩艾美球虫虫株线粒体cox 1基因部分序列的比较分析

为研究柔嫩艾美球虫不同毒力株的线粒体细胞色素c氧化酶第1亚基(cox1)基因与球虫种群之间的遗传关系,应用聚合酶链反应扩增柔嫩艾美球虫3个不同毒力株的cox1序列,并与GenBank上登录的鸡柔嫩艾美球虫、巨型艾美球虫、毒害艾美球虫和堆形艾美球虫虫株的相应序列进行比对分析.结果显示,每个虫株都获得659 bp的cox1部分有效序列(pcox1).柔嫩艾美球虫不同虫株的pcox1序列完全相同,但与其他种的艾美球虫相应的pcox1序列有不同程度的差异.表明柔嫩艾美球虫的cox1序列可作为艾美球虫不同种虫株之间遗传变异研究的标记.     

DNATyper^(TM) 15试剂盒直接扩增检验纸质样本的研究

目的检验DNATyperTM15直接扩增系统的有效性。方法使用DNATyperTM15直接扩增系统对我国DNA数据库建库4种常见样本类型进行直接扩增检验。结果获得了血滤纸、公安部物证鉴定中心采血卡、博坤采血卡和FTA卡等样本类型的完整DNA分型。结论 DNATyperTM15直接扩增系统能够用于常见纸质样本的检验。     

联合应用多个DNA位点进行尸源鉴定

目的　研究联合应用多个DNA位点在尸源鉴定方面的应用价值。方法　应用聚合酶链反应(PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳分离及银染显带的方法通过对无名尸体的有关检材与可疑双亲或子女进行亲权鉴定。结果　在 80例刑事案件尸源鉴定中 ,38例无名尸体采用较新鲜肌肉 ,通过扩增VNTR、STR多个位点得以判明尸源 ;2 9例采用腐败肌肉、 6例采用骨骼和 2例采用牙齿 ,通过扩增多个STR位点判明了尸源。仅有 1例采用腐败肌肉、 2例采用骨骼未能确定尸源。结论　运用多个位点进行亲权方法可以准确地判明尸源鉴定 ,特别对高度腐败尸体、尸块不全等情况下的尸源鉴定具有很高的实用价值     

PEP-PCR法及其在法医学中应用的可行性研究

提高微量检材的利用率 ,建立PEP方法并对其法医学应用进行可行性研究。用 15个随机寡核苷酸的序列作为引物 ,低特异性下扩增出微量DNA ,以此扩增物作为模扳 ,进行特异基因座扩增。经PMCT118,GABAR ,DYS19,D18S849,D3S1744,D12S10 90 ,D8S1179,D2 1S11,D18S5 1,D5S818,D13S3 17,D7S82 0 ,D3S13 5 8,vWA ,FGA ,TH0 1,CSF1PO ,TPOX ,D16S5 3 9及Amelogene等 2 0个基因座的PEP PCR与直接的PCR分析比较 ,二者分型结果一致 ,即使 1ngDNA也能得到正确分型。PEP方法可用于法医学检验 ,有利于微量物证的利用 ,使物证检材提供尽可能多的信息