农业农村部关于印发《2021年国家动物疫病强制免疫计划》的通知(农牧发〔2021〕2号)

各省、自治区、直辖市及计划单列市农业农村(农牧、畜牧兽医)厅(局、委),新疆生产建设兵团农业农村局,有关直属单位:为切实做好2021年全国动物疫病强制免疫工作,根据《中华人民共和国动物防疫法》规定,结合当前动物防疫实际,我部组织制定了《2021年国家动物疫病强制免疫计划》。现印发你们,请遵照执行。     

报恩寺住持:疫情期间,我一直在救助流浪动物

救不完的是流浪动物,渡不了的是人。在上海奉贤青村镇,有一座年久失修的寺庙,名叫编报恩寺,有500年历史,即便是老上海人,可能也没多少人知道它的存在。3月初,疫情来临封控,寺庙静止,跟着静止的,还有庙里的住持和他救助的9000多只流浪动物。     

伪狂犬病病毒gM蛋白多抗的制备及功能探究

为获得免疫原性好的伪狂犬病病毒（PRV）gM蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于gM蛋白功能的初步研究,本试验截取gM蛋白优势抗原区的碱基序列并插入pET-21a（+）载体,构建原核表达质粒pET-21a-UL10,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过尿素法纯化蛋白,将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。使用PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染后的细胞样本进行间接免疫荧光、Western-blot和免疫沉淀试验检测其反应性和特异性。使用gM蛋白免疫C57BL/6小鼠后攻毒检测小鼠死亡率。结果显示,成功构建了表达PRV gM蛋白的重组质粒pET-21a-UL10,在37℃诱导6 h后主要以包涵体形式表达;制备的gM蛋白多克隆抗体具有良好的反应性和特异性,可特异性检测到PRV-UL10真核质粒转染和PRV感染细胞中的gM蛋白;小鼠免疫结果显示,gM蛋白诱导的免疫抗体对PRV感染的保护率低。研究表明制备的gM蛋白多克隆抗体具有较好的反应性和特异性,但其对小鼠的保护力较弱,为进一步解析gM蛋白的生物学功能奠定了必要的基础。     

尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

以截短的尼帕病毒（NiV）G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增,将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a（+）,并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后,在最佳诱导条件下表达目的蛋白。用Ni-NTA柱纯化截短的G蛋白,并进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的蛋白为抗原建立尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法,并对该方法的特异性、灵敏性、稳定性进行验证。结果显示：成功构建重组质粒pET-30a(+)-NiV-G;表达的尼帕病毒截短G蛋白分子质量为50 ku,与预期值相符;截短的G蛋白能被His-tag抗体、抗尼帕病毒G蛋白粗提IgG识别。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法检测已知阳性血清尼帕病毒抗体效价为1︰20 480,裂谷热病毒、西尼罗病毒及克里米亚-刚果出血热病毒阳性马血清的检测结果均为阴性,且该方法批内、批间试验变异系数均小于10%。结果表明,成功构建了重组质粒pET-30a(+)-NiV-G,并诱导表达尼帕病毒截短G蛋白。以该蛋白建立的尼帕病毒抗体...     

宿主蛋白Ambra 1介导非洲猪瘟病毒MGF360-9L抑制其复制的机制

MGF360-9L是非洲猪瘟病毒（African swine fever virus,ASFV）重要的毒力基因,本实验室前期使用免疫共沉淀和液相色谱-质谱（IP-MS）联合技术,明确了MGF360-9L和宿主蛋白自噬/苄氯素1调节因子1(autophagy/beclin-1 regulator 1,Ambra 1)具有相互作用,现有的研究已经证实宿主蛋白Ambra 1在病原感染中发挥重要作用。为明确Ambra 1介导MGF360-9L对ASFV复制的调控作用及其机制,本研究构建Ambra 1真核表达质粒,使用免疫共沉淀（Co-immunoprecipitation,Co-IP）和间接免疫荧光（indirect immunofluorescence assay,IFA）技术,验证了Ambra 1和MGF360-9L的互作及互作区域。设计并合成Ambra 1的RNA干扰（RNAi）序列,运用实时荧光定量PCR(real-time q PCR,RT-qPCR)和蛋白质免疫印迹（Western-blot）技术,证明了Ambra 1过表达抑制ASFV的复制,下调Ambra 1的表达则能够促进AS...     

我国动物福利立法价值初探

进入21世纪,动物福利立法已成为大势所趋,而我国的法律在这方面尚属空白,亟待弥补.关爱动物,进行动物福利立法,不仅有助于保护生物多样性、维护生态平衡,有利于人民的身体健康和我国科学技术的发展及科研成果的转换,同时,对于我国畜牧业及其产品贸易的发展、社会主义和谐社会的构建和社会文明进步的推进都具有非常重要的意义.     

着力培养跨世纪人才——扬州大学人才开发与引进侧记

日本岩手大学动物营养学博士赵国琦先生,本来已经买好了回长春老家的火车票,可是当他在人才市场上偶然接触了扬州大学人事处的同志以后,立即决定退掉火车票,“去扬州大学看一看”。这“看一看”,使赵国琦成为扬州大学畜牧兽医学院动物科学系的骨干教师,去年他被低职高聘为副教授。     

微小牛蜱Bm91基因的克隆及在毕赤酵母中的表达

从我国半饱血微小牛蜱雌性成蜱肠道和唾液腺中提取总RNA;参照GenBank中已发表的微小牛蜱Bin91基因的核苷酸序列,设计了1对特异性引物.采用RT-PCR技术扩增Bm91基因,测序正确后将其亚克隆到巴斯德毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K的EcoR I酶切位点,构建重组表达载体pPIC9K-Bm91.再次测序正确后将其用Sac Ⅰ内切酶线性化,电转化毕赤酵母GS115并经G418抗性筛选高拷贝重组菌株后用甲醇诱导表达.表达产物经SDS-PAGE和Western-blot分析,结果显示,Bm91基因获得了成功表达,诱导表达的培养上清液中表达出具有反应活性的83 ku的重组Bm91蛋白.     

猪生殖与呼吸综合征病毒CH-1a株GP5蛋白基因的表达及其单克隆抗体的制备

将猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)CH-1a株GP5蛋白基因信号肽部分删除后克隆于pGEX-6p-1载体上,并在大肠埃希氏菌中进行表达。经SDS-PAGE电泳分析发现,融合表达的rtGP5蛋白约42 ku,将融合蛋白rtGP5用PRRSV阳性血清进行Western-blotting分析,证实所表达的融合蛋白能被其特异性识别。收获融合表达产物rtGP5,按50μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以融合蛋白rtGP5和GST蛋白为抗原,通过间接ELISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆,结果得到了15株能稳定分泌抗rtGP5蛋白抗体的阳性细胞克隆株。经间接免疫荧光检测发现,获得的15株单克隆抗体都能与PRRSV感染细胞产生特异性荧光。15株单克隆抗体亚型鉴定结果显示均为IgG1型,且轻链均为κ链。     

胸膜肺炎放线杆菌apx I A基因在不同宿主系统中的表达及密码子偏好性分析

用PCR方法从胸膜肺炎放线杆菌(APP)血清1型参考株APP259的基因组DNA中,扩增了约954 bp的apx I A基因片段,分别构建了大肠杆菌表达栽体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A.对目的基因密码子偏好性进行了分析,发现其中有4个大肠杆菌稀有密码子,占1.2%;有49个毕赤酵母稀有密码子,占15.4%.利用所构建的大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1/apx I A和毕赤酵母表达载体pPICZαA/apx I A分别进行表达.结果显示,目的基因在大肠杆菌中能以包涵体形式进行高效表达,其融合蛋白占菌体总蛋白的32%;在毕赤酵母中则以较低水平分泌表达至培养基的上清液中,40倍浓缩后方能检测到少量目的蛋白.证实,目的基因序列中的密码子偏好性影响其在大肠杆菌和毕赤酵母中的表达.