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以猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)TH98株N基因的重组质粒 pHN为模板 ,Li 15和Li 2为上、下游引物扩增出TGEVTH98/N基因。将N基因与真核表达载体pcDNA3.1(+)分别用BamHⅠ、XhoⅠ双酶切后连接 ,构建了重组真核表达载体 pcDNA N。将昆明鼠随机分为 2组 ,分别肌肉注射 pcDNA N和pcDNA3.1(+) ,每只鼠 10 0 μg ,共免疫 3次 ,每次间隔 2周。首次免疫后第 0、14、2 1、2 8、35、39、4 7和 5 4d采血分离血清 ,采用ELISA检测抗体动态变化。注射pcDNA N组小鼠在首次免疫后第 39d检测到针对TGEVN蛋白的阳性抗体。 相似文献
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利用PCR技术从环形泰勒虫裂殖体cDNA中扩增TaSDP(Theileria annulata schizont-derived protein)基因,用获得的基因片段构建原核表达载体pET-30a(+)-TaSDP,并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中进行表达,蛋白以包涵体的形式存在;融合蛋白经纯化后免疫家兔,制备多克隆抗体,并分别用ELISA和Western-blot测定抗体的效价及特异性。结果显示,获得的TaSDP基因的长度为552bp,制备的多克隆抗体不仅可与重组蛋白His-TaSDP发生反应,而且可以识别天然的虫体蛋白,效价高于1∶215。上述研究结果为开展TaSDP在细胞调控方面的研究奠定了基础。 相似文献
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优化并合成牛支原体的p48基因,将其克隆到pET-32a(+)表达载体上后,转化大肠杆菌BL21(DE3),16℃低温诱导表达,获得可溶性表达的大小约66ku的重组P48蛋白。将纯化后的重组P48蛋白致敏戊二醛和鞣酸处理过的绵羊红细胞,建立了检测牛支原体抗体的间接血凝试验。重组P48蛋白致敏红细胞的最佳质量浓度是20~40μg/mL,牛支原体超免疫血清抗体效价达1∶2 048~1∶4 096。该方法对牛肺疫、牛巴氏杆菌病、牛病毒性腹泻病、布氏杆菌病、结核病、口蹄疫、牛生殖道支原体感染、里奇氏支原体感染、大肠杆菌病阳性血清的检测结果均为阴性。该方法的特异性为100%,敏感性为93.33%。与国外商品化的牛支原体ELISA试剂盒相比,平均符合率为96.15%。对833份田间血清和1 084份乳清进行检测,阳性率分别是15.37%和19.56%。结果表明,该方法敏感性高、特异性强和重复性好,可用于牛支原体抗体水平检测、牛支原体病的辅助诊断和流行病学调查。 相似文献
135.
136.
旋毛形线虫P53重组蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立 总被引:2,自引:1,他引:1
以纯化的旋毛形线虫P53排泄分泌(ES)重组蛋白作为包被抗原,建立了检测旋毛形线虫P53 ES蛋白抗体的间接ELISA方法,并确定了间接ELISA的最适反应条件:抗原包被浓度为2/μg/mL(100 μL),血清稀释度为1∶200,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠IgG抗体稀释度为1∶10 000,抗原和血清于37℃反应1.5 h,血清和二抗于37℃反应1 h,底物于37℃显色10 min.应用该方法对试验小鼠血清进行检测,结果表明,建立的间接ELISA方法具有较好的特异性和重复性,适用于检测特异性P53血清抗体. 相似文献
137.
用差速离心结合不连续蔗糖密度梯度纯化的鸡传染性支气管炎病毒抗原免疫兔和鸡,获得高效价的多克隆免疫血情。经鸡胚胚体乳剂吸收和过DEAE-52纤维素柱提纯其IgG,建立了检测鸡传染性支气管炎病毒抗原的ELISA双抗体夹心法。应用本ELISA对人工感染鸡和传染性支气管炎病鸡群的气管样本的检测,其病毒抗原阳性检出率分别为10O%(20/20)和78%(39/50)。实验结果表明,ELISA双抗体夹心法对鸡传染性支气管炎的早期诊断具有简单、快速、敏感性高、特异性强和重复性好等优点。 相似文献
138.
139.
建立的检测猪生殖与呼吸综合征(PRRS)抗体的酶联免疫吸附试验(ELISA),其抗原包被浓度为1.7mg/L,血清的最适稀释度为1∶100,酶标兔抗猪IgG的工作浓度为1∶2000。比较试验表明,ELISA的敏感性优于间接免疫荧光试验(IFA)。用ELISA检测1991年从美国进口猪的血清76份,阳性率为零;1995年从加拿大进口猪的血清163份,阳性率为5.52%;北京地区甲猪场的血清121份,阳性率为47.1%;北京地区乙猪场的血清43份,阳性率为41.8% 相似文献
140.
我国自主研制的SARS灭活疫苗Ⅰ期临床试验已经顺利完成,取得了阶段性的重大进展。36位受试者均未出现异常反应,其中24位接种疫苗的受试者全部产生了抗体,表明我国自主研制的疫苗是安全的,初步证明是有效的。科技部、卫生部、国家食品药品监督管理局今天为此共同组织了SARS疫苗Ⅰ期临床研究结果 相似文献