鸡传染性腔上囊病卵黄抗体制备工艺中最佳沉降脱脂条件的确定

采用沉降脱脂分离技术 ,从鸡超免疫卵黄中提取传染性腔上囊病卵黄抗体免疫球蛋白 (IgY)。通过正交试验 ,确定乙酸乙酸钠缓冲液为最佳沉降脱脂缓冲液。用 pH值为 5 .2 ,浓度为 0 .12mol L的乙酸 乙酸钠缓冲液 9倍稀释卵黄液 ,在约 30 0r min下搅拌 10min后 ,置于 4℃下沉降 34h ,沉降上清液中IgY含量占卵黄中蛋白总量的 2 5 %左右 ,脱脂率>98%,活性损失可忽略不计。     

ENGLISH ABSTRACTS OF ORIGINAL ARTICLES

We produced the animal model of the early myocardial infaretion (5min to 24 h) by ligating the left anterior descending coronary artery ofrats. The immunohistochemical methods (PAP) of myoglobia antibody were performed to observe the myoglohin defects of myocytes in infarcting area of rat hearts. The results demonstrated that：Slight imcomplete myoglobin defects in few myocytes of infarcting area were noted at 30 min after coroaary ligation. At 2-6h after coronary ligatioa,the limits of the myoglobin defects was extended and become ribbon strip or sheet in shape. At 10-24h after ligation, the myoglobin defects of myocytes in infarcting area attain total layer of myocardium,the majority of myoglobin defects was complete and could be clearly differentieted from the non-infarcting area.     

改良菌落原位杂交技术快速筛选NDVF基因阳性克隆株

应用从表达型质粒载体构建的ＮＤＶＦ基因文库中筛选阳性克隆株的改良融合蛋白质抗体蛋白质原位杂交技术，可使菌落在硝酸纤维素薄膜上增殖，经适当处理后，即可用特异性抗体探针进行原位筛选，获得含目的基因编码的特异抗原蛋白的阳性克隆株。     

斑点免疫金渗滤法检测猪生殖与呼吸综合征抗体的研究

应用提纯的猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗原包被硝酸纤维素膜,然后用胶体金标记的金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)建立了检测PRRS抗体水平的斑点免疫金渗滤法(DIGFA)。该法通过胶体金标记SPA直接显色,阳性者出现红色斑点,整个试验过程仅需5min即可判断结果;与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒病阳性血清不发生交叉反应;纯化PRRSV抗原的最低检测量为0.0553mg mL,即55.3ng 点。对200份猪血清用该法与ELISA同时进行PRRS抗体检测,两种方法的符合率达98%。     

猪瘟ELISA抗体与免疫保护力的相关性研究

用攻毒试验对猪瘟ELISA抗体与免疫保护力的相关性进行了研究,结果表明,80倍稀释血清ELISA OD值>0.3的疫苗注射猪,攻毒100％保护;0.30≥OD值>0.20的疫苗注射猪,攻毒75％保护;OD值≤0.20时,若为非疫苗注射猪(母源抗体),则攻毒不保护;若为疫苗注射猪,则仍有少数可以保护。从而进一步证实,应用HRP-SPA-ELISA不仅可以评价疫苗免疫效果,而且可以监测群体免疫水平,估测群体保护率。     

牛种布氏杆菌抗独特型抗体苗的研究

在筛选出能产生效价高、特异性强的抗牛种布氏杆菌单克隆抗体细胞株A_7及其对患病奶牛有一定疗效的基础上,将提纯的该单克隆抗体免疫家兔,使产生高效价的抗独特型抗体,后者经提纯和加以适当佐剂免疫豚鼠和牛。检测结果表明:免疫豚鼠和牛产生了布氏杆菌凝集抗体;免疫豚鼠强毒菌株攻击后有较好的免疫保护力,证明该抗独特型抗体具有抗原“内影像”和布病疫苗的作用。     

应用λgt11载体系统克隆与表达禽源巴氏杆菌的抗原蛋白基因

本研究应用λgt11载体系统构建了禽源巴氏杆菌P1059菌株DNA的表达型基因文库。P1059DNA被机械剪切刀随机剪切成2～8kb大小的片段,其内部EcoRⅠ位点被甲基化后再在片段的两端连接上EcoRⅠ“接头”。然后将用EcoRⅠ酶消化的上述片段连接到λgt11载体臂上,在体外包装成重组噬菌体。将重组噬菌体感染大肠杆菌Y1090,用抗P1059高免家兔血清作为第一抗体,酶标羊抗兔IgG作为第二抗体对噬菌斑进行原位筛选。用筛选出来的7个抗原基因阳性克隆株分别溶原化于大肠杆菌Y1089,在IPTG诱导下使溶原菌表达出β半乳糖苷酶——外源性多肽链融合蛋白质。用惠斯顿免疫吸附试验检测从上述7株溶原菌所获得的融合蛋白质,均显示出特异性的抗原抗体反应。用小鼠作进一步的免疫保护试验证明,有一株溶原菌(PaC_1株)的粗制裂解物能使小鼠对P1059强毒菌的攻击具有较强的抵抗力。     

禽腺病毒T型琼脂扩散抗原的研制及应用

研制了禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原,检测了该抗原的效价和特异性,并用该抗原对人工感染鸡沉淀抗体的变化以及现地血清样本进行了检测.结果显示,该抗原不与其他主要禽类病原体阳性血清反应,可与1:8稀释的禽腺病毒工型阳性血清反应.对3月龄SPF鸡进行人工感染后,第7 d可检测到沉淀抗体,血清中的沉淀抗体可持续3个月以上.抗原在-20℃条件下可保存2年.经对现地38个鸡场进行检测,其中阳性场14个,阳性率为36.84%,表明我国的禽腺病毒感染率很高.结果证实,研制的禽腺病毒Ⅰ型琼脂扩散抗原敏感、特异,可用于禽腺病毒感染的血清学检测.     

鸡传染性法氏囊病灭活疫苗免疫鸡中和抗体效价与攻毒保护力的相关关系

为了探讨鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护力的相关关系,以不同剂量的鸡新城疫、传染性法氏囊病二联灭活疫苗免疫21日龄的SPF鸡,免疫后采血测定鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体,并用传染性法氏囊病病毒强毒攻击,攻毒后第72小时,剖检所有试验鸡,观察鸡法氏囊等器官病变。将每只试验鸡的传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护情况进行一一对照。结果显示,当传染性法氏囊病病毒的中和抗体效价≥1∶16 384(214)时,可获得100%的保护;效价为1∶8 192(213)时,保护率为95.5%;效价为1∶4 096(212)时,保护率为92.9%;效价为1∶2 048(211)时,保护率为86.1%;效价为1∶1 024(210)时,保护率为76.5%;效价为1∶512(29)时,保护率为53.3%;效价为1∶256(28)时,保护率为33.3%,效价≤1∶128(27)时,保护率为0。试验证明,鸡传染性法氏囊病病毒中和抗体效价与攻毒保护力密切相关。