牛传染性鼻气管炎抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测

将无血清细胞培养的牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)抗原包被于硝酸纤维素膜,加入待检血清样品后,利用纳米胶体金标记的山羊抗牛IgG显色,建立了检测IBR抗体的纳米胶体金斑点免疫渗滤法检测试纸盒。整个试验过程仅需5min即可判断结果,与蓝舌病、牛赤羽病、牛地方流行性白血病、牛病毒性腹泻黏膜病、猪瘟、猪伪狂犬病和猪细小病毒病的阳性血清不发生交叉反应。将该法与用于IBR抗体检测的ELISA方法同时对300份临床牛血清样品进行IBR抗体检测,结果二者的阳性符合率达94.4%。结果表明,该法具有特异、敏感、快速可靠、效果直观、结果容易判断的特点,非常适用于IBR的早期诊断和流行病学调查。     

应用酶联免疫吸附试验检测猪生殖与呼吸综合征血清抗体的研究

建立的检测猪生殖与呼吸综合征(PRRS)酶联免疫吸附试验(ELISA),其抗原包被浓度为2.4μg/mL,血清稀释度为1100,酶标二抗的工作浓度为1500.应用该方法对陕西省9个地区采集的有疑似PRRS征候的250份猪血清进行检测,检出阳性血清32份,阳性率为12.8%,从而证实陕西省存在PRRS,也为该病的大面积血清学普查提供了一种简易、快速、准确的检测方法.     

伊氏锥虫PFR2蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备

为了探究伊氏锥虫副鞭毛杆蛋白2(paraflagellar rod protein 2,PFR2)的分子特征和免疫特征,利用PCR扩增伊氏锥虫PFR2基因,将扩增产物插入p QE-80L载体,经原核表达后,将纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,利用Western-blot鉴定反应原性。结果表明,PFR2基因大小为1 803 bp,编码含601个氨基酸残基的蛋白质,SDS-PAGE电泳显示该蛋白大小约为66 ku,主要以包涵体的形式表达。用间接ELISA方法检测小鼠抗PFR2多克隆抗体的效价为1∶25 600;Western-blot检测显示重组PFR2蛋白具有较好的反应原性。本研究为进一步研究伊氏锥虫PFR2蛋白的功能奠定了基础。     

蓝狐兔脑炎微孢子虫夹心ELISA检测方法的建立与应用

本试验旨在建立一种可用于大规模检测蓝狐兔脑炎微孢子虫的夹心 ELISA 方法,使其在疾病早期或隐性感染时,能及早地发现并确诊,从而采取措施。 首先,于病料中初步分离兔脑炎微孢子虫,随后通过革兰染色和 ITS 基因对比验证病原,通过接种犬肾细胞进行纯化。 制定免疫方案,将纯化的兔脑炎微孢子虫以 1×10⁷m L^-1免疫新西兰白兔制备多克隆抗体。 采用纯化后的多抗作为捕捉抗体,蓝狐 Ig G 作为识别抗体,家兔抗狐 Ig G- HRP 作为指示抗体,通过检测纯化后的微孢子虫建立夹心 ELISA。 研究表明,多抗最适包被质量浓度为 5 μg/ m L,50 g/ L 脱脂奶粉溶液 37 ℃封闭 1 h,待测样本孵育时间为 2 h(37 ℃),识别抗体质量浓度为 37.5 μg/ m L,反应时间为 1.5 h(37 ℃),家兔抗狐 Ig G- HRP 工作浓度为 1 ∶ 5 000,孵育时间为 1 h(37 ℃)。本研究建立的夹心 ELISA 对纯化孢子的最低检测浓度为 6.25×10⁵m L^-1,对人工...     

鼠抗人转铁蛋白抗体轻链与重链可变区基因库的制备

以纯化的人转铁蛋白免疫小鼠,测其血清效价,合乎要求后杀鼠取脾脏并以异硫氰酸胍和酚的混合溶液将其匀浆,再以氯仿抽提、异丙醇沉淀和乙醇洗涤,所得总RNA以oligo(dT)纤维素离心柱分离纯化制备mRNA,使mRNA达到eDNA合成所需的浓度后,反转录制备出eDNA,在合成的eDNA中加入轻、重链引物,扩增制备出小鼠抗人转铁蛋白抗体的轻、重链可变区基因库。     

抗人转铁蛋白单链抗体的研制及部分性能研究

研制人转铁蛋白的单链抗体。以纯化人转铁蛋白免疫小鼠,制备小鼠脾脏 mRNA,RT-PCR 扩增重轻链可变区基因;Linker 连接及引入 Sfi Ⅰ和 NotⅠ酶切位点构建单链抗体基因;同载体 pCANTAB 5E 连接,转化 E.coliTG1细胞,以 M13K07挽救制备噬菌体抗体呈现文库,筛选抗原阳性重组噬菌体粒子(Panning);感染 E.coliHB2151菌株,制备可溶抗体并检测其性质;测定抗体基因序列并分析同源性及结构特征。制备出4株分泌抗人转铁蛋白可溶抗体的 E.coli HB2151菌株。抗体基因只由小鼠抗体的轻重链可变区基因构成,开放读码,无终止子,并紧接一末尾为一琥珀终止密码的 E 末端序列,其对应氨基酸序列 V_H 和 V_L 部分均遵从抗体可变区特征。实验证明,可把基因工程抗体技术应用于法医血清学,以制备新型抗体试剂。     

蓝舌病病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立

用将纯化的蓝舌病病毒(BTV)免疫BALB/c小鼠,分离免疫鼠脾细胞,与SP2/0细胞融合,经间接ELISA筛选,得到了3株(1F5、4E5和6A1)可以稳定分泌抗BTV VP7特异性单抗的杂交瘤细胞株.用纯化的BTV免疫家兔,按常规方法制备BTV多抗.选用抗VP7单抗(1F5)包被ELISA板,用兔抗BTV多抗作为捕获抗体,建立了BTV双抗体夹心ELISA检测方法.用该ELISA方法分别检测BTV、鹿流行性出血病病毒、水疱性口炎病毒、赤羽病病毒、小反刍兽疫病毒阳性样品.结果表明,该ELISA方法具有良好的特异性.用该ELISA和RT-PCR同时检测259份临床样品,ELISA的特异性和敏感性分别为99.1%和85.7%,两种方法的符合率为97.7%.该方法的建立为BTV的检测及蓝舌病的流行病学调查提供了有效工具.     

水牛匈爱病毒结构蛋白VP1的截短表达及多克隆抗体的制备

为了制备水牛匈爱病毒（BufHuV）结构蛋白VP1截短基因的多克隆抗体,将病毒的VP1截短基因克隆至原核表达载体pET-32a（+）获得重组质粒pET-32a-BufHuV-VP1,重组质粒转化至BL21感受态细胞（DE3）后诱导表达,VP1截短蛋白的分子质量约为31.5 ku,主要以包涵体的形式表达。以纯化好的重组蛋白免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体,通过Western-blot与IFA鉴定其特异性。结果显示,制备的小鼠多克隆抗体能与纯化的VP1重组截短蛋白和感染BufHuV的细胞表达的VP1特异性结合,表明多克隆抗体具有良好的反应原性和特异性。水牛匈爱病毒VP1截短重组蛋白及其多克隆抗体的成功制备为研究BufHuV致病机制、VP1蛋白功能以及血清学检测方法的建立提供了材料基础。     

山羊莱姆病血清抗体的调查

１９９３年３～５月，对甘肃省迭部林区不同样点二类生境下活动的山羊随机采血清２７０份，用ＥＬＩＳＡ检测莱姆病血清抗体情况，其中森林草原山羊血清１１３份，检出阳性血清１３份，阳性率为１１．５０％；灌丛草原山羊血清１５７份，检出阳牲血清１５份，阳性率为９．５５％。总阳性率为１０．３７％（２８／２７０）。     

浙江省规模化猪场猪瘟免疫状况监测

应用正向间接血凝试验分别检测了46个规模化猪场1075头母猪、9个规模化猪场198头育肥猪、4个规模化猪场72头断奶前仔猪和13个规模化猪场296头断奶后仔猪血清的猪瘟抗体效价.结果,母猪、育肥猪、断奶前仔猪和断奶后仔猪分别有149、65、3和110份血清抗体效价≤1∶8,低于临界保护线;分别有926、133、69和186份血清抗体效价≥1∶16,视为免疫合格,免疫合格率分别为86.17%、67.17%、95.83%和62.84%,检测结果表明,断奶后仔猪和育肥猪免疫效果不理想.