同卵双生子甄别策略探讨

同卵双生子(MZ)之间存在抗体库差异、甲基化修饰差异和基因突变体差异,甲基化修饰差异的比较可望成为甄别MZ的手段之一,抗体库差异和基因突变体差异比较的方法在甄别MZ方面亦有潜在价值.当前,对MZ的表现遗传以及基因突变等领域的研究还很有限,而抗体库技术的应用方法也有待探讨,因此MZ识别技术的应用前景和发展空间需要进一步摸索与完善.     

鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因的构建

目的为了得到可经载体连接表达、并只由抗体可变区构成的单链抗体基因而进行本实验.方法经扩增得到的鼠抗人转铁蛋白抗体轻、重链可变区基因经凝胶电泳分离、离心柱纯化及定量,同能柔性折叠的一段短连接肽基因一起进行扩增拼接反应,而后在含限切酶位点的引物指导下扩增引入限切酶SfiI和NotI的酶切位点识别序列,产物以电泳鉴定、纯化和定量,再分别用SfiI和NotI酶切消化,最后再柱纯化.结果得到了携带可与载体连接的粘性末端的鼠抗人转铁蛋白单链抗体基因.结论两个不同的基因通过两端含互补序列的第三个基因片断可只经过扩增而无需DNA连接酶的作用而连接起来.对于抗体基因可由此而产生新的轻重链基因的组合,有可能产生性能更优异的抗体.     

猪瘟疫苗免疫母猪所产仔猪的母源抗体检测

采用间接血凝试验 (IHA)和斑点酶联免疫吸附试验 (DotELISA)检测仔猪血清猪瘟母源抗体 ,其在 10、2 0、30和 40日龄的抗体阳性率分别为 94.1%、96 .9%、70 .4%、31.0 %和 82 .4%、96 .9%、74.1%、34.5 %,表明IHA用于仔猪早期的母源抗体检测比DotELISA更敏感。在此基础上用IHA检测了 10、15、2 0、2 5、30、35、40和 45日龄仔猪血清母源抗体 ,其群体抗体阳性率分别为 97.1%、95 .1%、93.9%、80 .0 %、74.3%、38.2 %、36 .7%和 33.3%,抗体平均效价分别为1∶10 9、1∶70、1∶47、1∶2 9、1∶2 3、1∶10、1∶9和 1∶8。     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗弓形虫独特型抗体免疫效果的观察

用抗弓形虫McAb(3C_1)经纯化处理,免疫兔,制备多克隆抗-Id抗体(Ab_2)。用M-206佐剂制得抗-Id疫苗,免疫猪和小白鼠;Ab_2免疫剂量:猪31.75mg/头,鼠2.5mg/只。免疫后7天测抗体效价1:4、28天1:64(IHA)。28天用弓形虫强毒(GJS)按10~7/头(猪),10~3/只(鼠)活虫攻毒,结果免疫猪无明显临床症状,体温呈—过性反应(41.2～40.2℃,3天或不明显低烧);对照猪(未免疫)持续7天高温(41.8～40.4℃),表现废食,静卧无神。攻毒30天后剖杀,分离病原,分虫率2/5(免疫猪)、1/1(对照猪)。免疫小鼠攻毒后存活率40％(4/10),检虫率100％; 对照鼠全部死亡(5/5)。证明抗-Id抗体作为无弓形虫病原替代物,具有一定的免疫原性和免疫保护力,可保护猪、鼠经受强毒攻击的免疫效果。     

鸡减蛋综合征蜂胶佐剂灭活苗免疫期的试验研究

用三批减蛋综合征（ＥＤＳ）蜂胶佐剂灭活苗（９４０９１２、９４１０２４、９４１１２１）分别免疫成年产蛋母鸡，定期采血，连续检测ＨＩ抗体动态变化，这三批苗６个月的平均ＨＩ抗体滴度分别为７．７、８和７．７（Ｌｏｇ＿２）；用鸭胚做ＥＤＳＶ血清中和试验，其保护率均为１００％（５／５，５／５，５／５）；用ＥＤＳ２０６油苗和ＥＤＳ白油苗同时分别免疫蛋鸡，做平行对比ＨＩ抗体检测，其６个月的平均ＨＩ抗体效价分别为７．７和７（Ｌｏｇ＿２）。说明ＥＤＳ蜂胶苗的免疫期不短于ＥＤＳ油苗的。     

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性支气管炎抗体的研究

建立了辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记兔抗鸡ＩｇＧ检测鸡传染性支气管炎（ＩＢ）抗体的间接ＥＬＩＳＡ法，其抗原包被浓度为４ｍｇ／Ｌ，待检血清与酶结合物的最佳稀释度各为１８０，酶结合物、抗原抗体的作用时间分别为６０ｍｉｎ，３０ｍｉｎ，封闭液的浓度和作用时间分别为１％和６０ｍｉｎ，ＯＤ值大于０．２８７的判为阳性。用此法检测经ＩＢＶ灭活苗免疫鸡所产蛋孵出的雏鸡的母源抗体，ＯＤ值的Ｐ／Ｎ值为６．０，１５ｄ后降至２．０以下。检测１１日龄经ＩＢＶＨ１２０弱毒苗免疫雏鸡的抗体，其Ｐ／Ｎ值于免疫后第１８ｄ达峰值（３．７）。调查的５４群发病鸡，其抗体阳性率为１００％，Ｐ／Ｎ值为４．０～７．５     

抗弓形虫独特型抗体的研究——抗独特型抗体的制备及其免疫原性测试

用抗弓形虫单克隆杂交瘤细胞株(3C_2)扩大培养,于腹腔注射BALB/C小鼠诱生腹水,经3次饱和硫酸铵盐析,透析,DEAE-Sephadex-A_(50)离子交换层析,除菌,制得纯化McAb(Ab_1),蛋白含量2mg/ml,用福氏佐剂乳化后免疫健康家兔4次,放血分离血清,再经盐析和层析处理,制得多克隆抗弓形虫独特型抗体(Ab_2),用佐剂制备疫苗,3次免疫绵羊(5～10mg/只)2只。共采集4次血清,制得抗抗弓形虫独特型抗体(Ab_3),用IHA法检测抗体效价为1:64～1024。证实抗独特型抗体(Ab_2)是特异的,是能模拟弓形虫抗原,具有类似弓形虫免疫原性,并可激发宿主免疫应答产生抗体,进而证实独特型和抗独特型的免疫网络学说在弓形虫病免疫中的应用价值。     

黑龙江省鸭肝炎病毒HD-Ⅰ株的分离与鉴定

从黑龙江省某鸭场疑似鸭病毒性肝炎 (DVH )的发病雏鸭肝等组织中分离到 1株病毒HD Ⅰ株。经病理学检查、电镜观察、鸭胚中和试验、雏鸭保护试验、动物回归试验等鉴定为血清Ⅰ型鸭肝炎病毒 (DHV)。证实引起该鸭场雏鸭发病和死亡的主要原因为DVH所致。用DHV标准R85 95 2毒株多次强化免疫健康鸡 ,获得高效价的鸡抗鸭肝炎超免疫抗体。     

小熊猫接种犬瘟热疫苗后的抗体检

以犬用犬瘟热（ＣＤ）弱毒疫苗接种从产地新引入南京市玄武湖动物园的２只小熊猫（Ａ组），在接种后１１个月内每月采血１次，用微量中和试验检测其体内抗犬瘟热病毒（ＣＤＶ）抗体效价。结果显示，小熊猫接种后１个月时抗体效价已达１∶１０００左右，２个月时效价最高，达１∶２０００左右，而后缓慢下降，至７和１１个月时分别约为１∶１００和１∶２０。同时检测了以前接种过同一疫苗的３只该动物园自己繁育的小熊猫（Ｂ组）和福州市动物园内的６只小熊猫（Ｃ组）的ＣＤＶ中和抗体效价，其效价变化类似于Ａ组。这些小熊猫在接种前均确认健康，在试验期间同样的饲养条件下未发生ＣＤ，提示犬用ＣＤ疫苗可用于小熊猫的ＣＤ预防，其产生的有效免疫力至少可持续６个月。     

规模化猪场4种猪瘟免疫程序的免疫效果比较

采用Dot-ELISA检测猪瘟母源抗体消长规律和4种猪瘟免疫程序的免疫效果.结果,在7、14、21、28和35日龄时,猪瘟母源抗体阳性率分别为80.0%、60.0%、33.3%、13.4%和6.7%,其抗体效价几何平均值(GMT)分别为188、169、159、140和135.4种免疫程序的猪瘟抗体检测结果为,超前一次免疫和超前二次免疫2倍量猪瘟单价苗,在6月龄时,其抗体阳性率分别为85%和80%,GMT分别为1105和185.20日龄首免2倍量猪瘟单价苗后,60日龄二免2倍量猪瘟-猪肺疫-猪丹毒三联苗,在60日龄和6月龄时,抗体阳性率分别为90.0%和87.0%,GMT分别为1135和1103.28日龄首免猪瘟单价苗,70日龄加免三联苗,免疫1和2头份组在65日龄时,阳性率分别为78.0%和92.0%,6月龄时分别为73.0%和86.0%.结果表明,免疫2头份比1头份的效果好,4种免疫程序的效果都较理想.