5个Y-STR基因座复合扩增及其单倍型

多个Y STR基因座复合扩增在国内外已得到应用[1、2 ] 。本文作者报道用银染法复合扩增DYS389II、DYS389I、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个Y STR基因座 ,并对广东汉族 4 15名无关男性个体进行基因分型调查。1　材料和方法1 1　材料4 15份广东汉族无关男性个体血样来自本室日常检案标本 ,用Chelex 10 0法提取DNA。1 2　引物序列DYS389Ⅱ、DYS389Ⅰ、DYS390、GATA A7 2和DYS393等 5个基因座引物序列见文献 [3、 4 ],由上海生物工程有限公司合成。1 3　PCR扩增条件总体积 2 5 μl,内含dNTP 4 2 0 μmol/L ,MgCl23 0mm…     

山西汉族人群DYS460基因座遗传多态性

本文对山西地区汉族群体的DYS460基因座遗传多态性进行了调查,现报道如下。1材料与方法1.1样品100名无关男性个体和20名女性个体来自山西汉族人群,取外周血1ml,用EDTA抗凝,DNA提取采用TKM法[1]并做相应调整:TKM破坏红细胞,白细胞用2×蛋白酶K消化液(20 mmol/L Tris-HCl,pH7.6;20 mmol/L EDTA,pH8.0;300 mmol/L NaCl;1%SDS)和蛋白酶K(100μg/ml)55℃水浴3~5h。酚-氯仿抽提,无水乙醇沉淀,最后溶于无菌去离子水中。1.2方法引物引物序列参照基因库GDB,由大连TaKa-La公司合成。PCR扩增及电泳检测50μl反应体系,含50~100ng基因…     

闽南地区汉族人群12个Y-STR基因座遗传多态性

近年来,Y染色体短串联重复序列作为常用的Y染色体特异性遗传标记在法医学个人识别和亲子鉴定以及人类进化研究中具有独特的作用[1,2]。本文调查了闽南地区汉族人群109名无关男性个体12个Y-STR基因座,现报道如下。1材料与方法1.1样本109份无关男性个体,血样采自调查证实3代以上居住于福建省安溪县与南安市的汉族群体。1.2 DNA提取常规chelex-100快速提取法或盐析法提取基因组DNA。1.3 PCR复合扩增采用PowerPlex Y System试剂盒(美国Promega公司),总反应体系为10μl,其中Gold STR 10×Buffer1μl,PowerPlex Y 10×Primer PairM i…     

3个Y-STR的复合扩增及其单倍型

目的 建立复合扩增Y-STR基因座的体系,获得广东汉族人的单倍型频率。方法 复合扩增DYS439、DYS437和DYS434三个基因座,用聚丙烯酰胺凝胶电泳银染法进行基因分型,检测广东汉族327名无关男性个体的单倍型。结果 3个基因座分别检出6个、4个和4个等位基因,共38种单倍型,其单倍型的个体识别率为0.8796。结论 Y-STR基因座复合扩增体系和建立的Y染色体STR数据库,在法医学鉴定中有应用意义。     

人类Y-染色体STR研究进展

人类Y -染色体STR(shorttandemrepeat)是指存在于Y -染色体上特异碱基短串联重复片段 ,又称微卫星DNA(microsatelliteDNA)。人类Y -染色体约有 5 0Mb个核苷酸 ,其中包括STR在内的重复序列约占 40 % ,不同个体的重复次数不同 ,具有个体差异性。 1976年CookeH等[1 ] 首先报道了存在于人类Y -染色体上的串联重复序列 ,为人类遗传学和法医学的研究开辟了一条新途径。继而 ,学者们[2～ 7] 对其重复序列进行了进一步的研究 ,并应用于实际工作中。WolfU等[8] 还对其分子生物学特征进行了研究。研究表明Y -染色体的串联重复序列 ,尤其是ST…     

Y染色体微缺失和突变的全同胞关系鉴定

目的探讨Y染色体微缺失和突变时,两男性个体间的全同胞关系鉴定。方法提取两样本DNA,检测Y-STR分型及常染色体STR分型,通过IBS法、ITO法及全同胞-无关个体判别函数法计算两个体间的全同胞关系。结果 33个Y-STR基因座中有2个基因座存在突变,其中一样本存在19个基因座的缺失。两样本IBS为53,大于阈值42;累积全同胞关系指数为1.36×10~(16),远远大于19;全同胞-无关个体判别函数D_(FS2)D_(R2)。因此倾向于认为两个体为全同胞。结论对于Y染色体微缺失和突变需要进行父系鉴定的情况,可以综合应用IBS法、ITO法以及全同胞-无关个体判别函数法以得出更为可靠的鉴定意见。     

基于thyA基因的大肠杆菌染色体-质粒平衡致死系统的构建与应用

将大肠杆菌DH5α在含胸腺嘧啶核苷和三甲氧苄二氨嘧啶的琼脂平板上培养,获得了遗传稳定的ThyA-大肠杆菌DH5α21株。用PCR扩增野生菌和ThyA-大肠杆菌的thyA基因,将测定的序列与野生型thyA基因相比,6号突变株的thyA基因第92位碱基发生G→A转换,导致第31位甘氨酸被天冬氨酸替换,4、7和13号突变株的thyA基因从第73位连续缺失6个碱基,导致第25位甘氨酸和第26位苏氨酸缺失。经PCR扩增的包括启动子在内的鼠伤寒沙门菌thyA基因与野生型大肠杆菌DH5αthyA基因的同源性为86%。以鼠伤寒沙门菌thyA基因为选择标记,构建了含人溶菌酶基因的真核表达载体pDTALYZ,以ThyA-大肠杆菌为受体菌,构建了染色体-质粒平衡致死系统。在相同条件下,pDTALYZ转化ThyA-大肠杆菌的效率高于以卡那霉素抗性基因为选择标记的pcDNAKLYZ转化野生大肠杆菌的效率;在发酵培养过程中,两种重组菌的生长速率相似,质粒丢失率分别为25%和10%,湿菌重分别为57.68 g/L和51.00g/L,重组质粒产量分别为134.9 mg/L和135.0 mg/L。     

增加检测STR和引入参考样本对叔侄关系鉴定的效能分析

目的 基于模拟数据和真实样本的检测结果,探讨增加STR数量及引入不同参考样本对叔侄关系鉴定模型系统效能的影响,为叔侄关系鉴定选择适宜的STR数量和参考样本提供参考。方法 针对引入不同的参考样本构建5种常见的叔侄关系鉴定模型,每种模型分别模拟10 000对叔侄关系与10 000对对应的无关个体在检测19、39、55个STR时的似然比及不同阈值下的系统效能。收集浙江汉族家系样本,使用SiFaSTR^TM23plex身份鉴定系统、Goldeneye^?DNA身份鉴定系统22NC和AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒进行55个常染色体STR分型,计算每种模型在检测19、39、55个STR时的似然比及不同阈值下的系统效能,并与模拟结果进行比较。结果 在同一检测系统下,模拟数据与对应的真实样本的计算结果基本一致。在同一模型中,叔侄关系鉴定的系统效能与检测STR数量呈正相关关系,且引入亲属时的系统效能均较仅对叔侄两个体进行鉴定时有不同程度的提高。引入亲属的优先顺序为叔的全同胞(或母亲)、侄的全同胞(或母亲)。结论 增加检测STR数量和引入已知亲属均可提高叔...     

DNA鉴定工作中的特殊STR分型

<正>DNA数据库是将分子遗传学技术、计算机网络技术和数据库管理技术相结合,实现DNA信息数字化存储、管理和检索的系统[1]。STR由于具有良好的多态性,现已成为法庭科学实践中所使用的重要遗传标记[2]。常染色体STR基因座是目前亲权鉴定和个体识别中运用最广泛的遗传标记,性染色体STR基因座以其独特的遗传特点在个体识别、亲子鉴定、