鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA PCR快速检测方法的建立

根据GenBank中的鸭疫里默氏杆菌(RA)1～19型16 S rRNA基因序列,分别与大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌的16 S rRNA基因序列对比,设计特异性引物,建立了基于鸭疫里默氏杆菌16 SrRNA的PCR检测方法.结果表明,用该方法对鸭疫里默氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌、葡萄球菌、巴氏杆菌进行检测,只有鸭疫里默氏杆菌的DNA能扩增出680 bp的特异条带,其他细菌的DNA不能扩增出任何条带;测序结果与GenBank中鸭疫里默氏杆菌相应序列完全一致;同时分别将鸭疫里默氏杆菌基因组DNA和菌液10倍稀释进行PCR扩增,对鸭疫里默氏杆菌DNA的最小检出量为1.907×10~(-5)g/L,对鸭疫里默氏杆菌菌液的最小检出量为1.5×10~4CFU/mL.证实,建立的基于鸭疫里默氏杆菌16 S rRNA的PCR检测方法具有快速、灵敏、特异的优点,可用于鸭疫里默氏杆菌感染的检测、分子流行病学调查和分离菌株的快速鉴定.     

鸭瘟病毒UL26.5基因的克隆和编码蛋白的亚细胞定位

对鸭瘟病毒(DPV)UL26.5基因(GenBank登录号EF643564)的分子特征分析表明,其具有疱疹病毒支架蛋白的典型特征,含有6个保守的结构功能域和1个丝氨酸蛋白酶水解位点(M位点),且具有与其功能相关的磷酸化位点;编码的多肽链是一种膜外蛋白.DPV UL26.5与α-亚科禽类疱疹病毒属的进化关系最近.将UL26.5基因扩增产物亚克隆至pET-32a(+)原核表达载体,并转化至E. coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导表达,获得一约59 ku的表达蛋白,与预期大小一致.将重组蛋白纯化后,制备兔抗血清,经间接ELISA检测,效价达1:204 800.DPV UL26.5基因编码蛋白亚细胞定位检测结果显示,最早可在感染后10 h的细胞核中检测到该蛋白,12 h后细胞核中出现较多绿色荧光,48 h时细胞质中也出现少量荧光.试验结果为进一步开展DPV UL26.5基因功能的研究提供了重要数据和材料.     

介导鸭疫里默氏杆菌耐β-内酰胺类药物发生的研究

采用平板二倍稀释法检测了临床分离的54株耐β-内酰胺类药的鸭疫里默氏杆菌(RA)的最低抑菌浓度(MIC值),进一步开展了耐药泵表型检测、β-内酰胺酶表型和基因型检测以及脉冲电泳指纹图谱和耐药泵相关性研究.结果显示,54株RA临床分离株对苯唑西林、青霉素、头孢噻肟和头孢吡肟的耐药率分别为100%、100%、66.7%和98.15%;耐药泵抑制剂氰氯苯腙可使53株RA对β-内酰胺类药物MIC值显著下降(P＜0.01),MIC下降倍数最高达到2048倍,耐药率依次下降为88.89%、46.30%、22.22%和38.89%;54株RA的β-内酰胺酶表型和基因型检测结果均为阴性;54株RA基因组经Sma Ⅰ酶切后以82%相似性系数为界,可分为13个脉冲电泳群,同一群的不同菌株可以认为是同一菌株不同克隆亚体或突变体.Ⅱ群、Ⅲ群、Ⅶ群、Ⅷ群、Ⅺ群和Ⅻ群对头孢吡肟和V群对头孢噻肟的耐药是由耐药泵介导的,而其他群的菌株则出现了其他机制.说明,耐药泵只是介导RA对β-内酰胺类药物耐药的主要因素之一.     

鸭瘟病毒gB基因B细胞和T细胞表位的预测及其主要抗原域基因的原核表达

应用生物信息学工具对本实验室鉴定的鸭瘟病毒(DPV)CHv毒株gB基因(GenBank登录号:EF608147)编码蛋白进行了B、T细胞表位预测,对其主要抗原域基因进行了PCR扩增,构建了原核表达载体pET-28a-gBM,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达.结果表明,重组菌可表达分子质量约46 ku的重组融合蛋白,表达蛋白以包涵体形式存在,约占菌体总蛋白的30%.Western-blot分析显示,表达蛋白能够被兔抗DPV多克隆血清特异识别,证实该氨基酸片段具有较强的免疫原性.     

贵州省家禽减蛋综合征的调查

自贵州省的家禽中采集血清或卵黄样本７０５份，用微量血凝抑制试验检测减蛋综合征（ＥＤＳ－７６）的抗体水平。结果表明，在６个健康鸡群中，阳性率为４．３％；在４个偏僻村寨农户散养的土种鸡群中，阳性率仅为０．９％；而在３个出现产蛋下降等症状的患病鸡群中，阳性率高达９１．８％，大多数阳性血清的效价为１∶３２～１∶５１２，最高达到１∶４０９６。同时，在健康鸭群中ＥＤＳ－７６的自然感染率较高，而这种隐性感染对鸭群的产蛋率并未发生任何影响。     

云南省雏鸭鸭疫里氏杆菌病病原的分离鉴定

云南省红河地区的鸭群中流行一种以鼻分泌物增多、腹泻、头颈歪斜、角弓反张及脚肢无力或麻痹为特征的传染病.对现场数十只病死鸭剖检,可见纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎及脑膜充血等较为一致的病理变化;从大多数病死鸭的脑、肝、脾等组织中分离出形态一致的革兰氏阴性球杆菌,经对分离菌进行培养特性、形态特征观察和生化试验,鉴定为鸭疫里氏杆菌(Remerella anatipestifer);用分离株人工感染7日龄健康雏鸭,复制出与自然发病雏鸭相同的病例.证明该地区的雏鸭群中存在鸭疫里氏杆菌病.     

JB-茚三酮雾化熏显血指印

某年6月13日11时许,一家服装店店主李某被发现死在店内,身上多处刀伤。经现场勘查,在被翻动过的抽屉内,技术人员发现一只塑料文件自封袋上有微量血迹,经用JB-茚三酮雾化熏显成功显现出一枚潜血指印,经甄别确定为犯罪分子所留,     

留三分空地 植一片优雅

单位有食堂,偶尔也出好菜。所谓好菜,就是我喜欢吃的菜,例如熏鸭肉、红烧土豆、油焖茄子等。一般情况下,我只吃一碗饭,但碰上好菜,就一发而不可收了,吃完第一碗后又去盛了一碗,我觉得饭少对不起好菜。吃完后,我一脸满足地走出餐厅。反应随即就来,没走出多远,肚子就开始难受,紧绷绷的,像     

浅析“大黄鸭”的国内版权问题

因荷兰艺术家霍夫曼(Florentijn Hofman)制作的"大黄鸭"(Rubber Duck)在国内各地巡展,故有关其依据我国《著作权法》能否享有版权的讨论日益显得重要与紧迫。毕竟,这关系到众多国内"山寨大黄鸭"们是否合法的问题。本文拟从目前国内艺术界与知识产权界关于"大黄鸭"版权的争议入手,以司法视野来探析"大黄鸭"依据我国《著作权法》能否享有版权,并最终得出其因系该法所规定的模型作品而享有版权,理应得到法律保护的结论。     

新型碘熏法显现纸张潜在手印技术研究

利用恒温加热超声雾化器促进碘晶体升华,形成水蒸气与碘蒸气混合物共同熏显纸张上新鲜和陈旧、纯汗液和皮脂汗潜在手印,并与传统的碘晶体直接升华显现法比较,得到和传统的碘晶体直接升华显现法比较,新型碘熏潜在手印显现技术能有效显现出纸张上的新鲜和陈旧、纯汗液和皮脂汗潜在手印,显现出的手印纹线更为清晰连贯、反差更为突出,颜色基本不消退,可以长期保存的结果,得出新型碘熏显现法可以作为显现纸张表面潜在手印一种新型方法的结论。