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91.
通过了解MDCK细胞感染犬细小病毒(CPV)后基因表达水平的差异,研究病毒对细胞的致病作用以及细胞抵御病毒感染的机制。利用表达谱基因芯片技术,分析持续感染犬细小病毒的MDCK细胞基因表达水平的变化情况,并用Real-Time PCR技术加以验证。结果显示,获得了359个差异大于1.5倍的表达基因(P0.05),占总基因数的1.53%,其中193个上调表达(0.84%),166个下调表达(0.69%)。对差异基因进行GO功能聚类分析,小部分涉及免疫应答、生长周期调控、信号转导和蛋白酶活性,其他大部分基因功能未知。利用Real-Time PCR随机验证5个基因在持续感染CPV后的差异表达,其结果和芯片杂交的结果一致。表明建立了MDCK细胞持续感染CPV后的差异表达谱,初步了解到CPV对宿主细胞的制约作用,引起部分细胞增殖调控相关基因发生了表达下调,以及细胞对感染的积极应答反应,部分免疫反应基因、肽链内切酶活性基因等发生了上调表达,从而为探索病毒的致病机理和宿主的抗病毒途径提供了试验基础。 相似文献
92.
目的建立15个常染色体和18个Y染色体STR基因座以及性别基因座的六色荧光标记复合PCR直扩检测体系,并评估其法医学应用价值。方法采用六色荧光标记技术,建立15个常染色体STR基因座(D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、D19S433、v WA、D21S11、D18S51、D8S1179、D5S818、FGA)和18个Y染色体STR基因座(DYS527a/b、DYS448、DYS456、DYS385a/b、DYS458、DYS391、DYS390、DYS19、DYS438、DYS393、DYS389Ⅰ、DYS439、DYS389Ⅱ、DYS392、GATA、DYS635)以及Amelogenin的复合扩增体系,收集800份无关人员血样进行基因座检测,评估所建复合扩增体系的稳定性、灵敏度、种属特异性、直扩可行性以及抗抑制性。结果本检测体系对800份无关人员血样复合扩增后,结果准确,灵敏度达0.125ng;种属特异性高;38份案件检材全部准确分型。在对照男性与女性的DNA浓度比值大于等于1:4时,男性DNA的所有基因座均能准确分型。若模板DNA中含一定浓度的已知抑制剂时,所有基因座也均准确分型。结论本文建立的复合扩增检测体系可同时检测15个常染色体和18个Y染色体基因座以及性别基因座,结果稳定准确,灵敏度高,可为法医DNA检测分析提供一个新选择。 相似文献
93.
目的建立30个中低突变Y-STR基因座的复合扩增体系,并对其性能进行评估。方法采用六色荧光标记技术,选择30个中低突变率、中高多态性的Y-STR基因座自行设计引物,进行复合扩增和毛细管电泳检测。检测该体系的准确性、特异性、灵敏度和耐受性,并观察其在混合检材的分型情况。结果采用本体系,分型结果准确稳定、特异性好、耐受性强,灵敏度达0.0625ng,混合检材在1:4的比例下,可获准确分型。结论本研究建立的30个Y-STR基因座的复合扩增体系分型结果良好,对于中国人群的法医Y-STR数据库建设和群体遗传学研究具有重要意义。 相似文献
94.
目的观察尸体胸大肌组织中rRNA各亚基表达水平的死后稳定性,探讨其在死亡时间推断中应用的价值。方法选取6例(3例成人、3例婴幼儿)外界温、湿度环境基本一致、死亡时间基本一致(24h以内)的个体,提取左侧胸大肌组织,在PBS缓冲液中低温冻存,分别在尸检即刻、2、3、4、5、6、7、8、9、10d提取微量组织保存于RNA固定液中,通过实时荧光定量RT-PCR技术检测rRNA 5srRNA、5.8srRNA、18srRNA、28srRNA亚基的表达水平。并分析年龄、死因对rRNA亚基表达水平的影响。结果死后各时间点rRNA各亚基的表达随死后经过时间延长无显著性降解,Ct值变化与死后经过时间无相关性(P值均大于0.05),其中5s rRNA在18.503±2.655~20.937±2.340之间,5.8s rRNA在17.687±3.011~20.617±2.204之间,18s rRNA在16.457±3.920~22.330±2.571之间,28s rRNA在15.077±6.051~22.207±2.685之间。结论人体胸肌组织中rRNA各亚基稳定性好,其各亚基的表达量与死因、年龄无关,适于作为晚期死亡的推断的内参基因。 相似文献
95.
目的建立SWP荧光剂熏显油脂手印的新方法。方法选取12中常见客体,根据试验需要分别捺印油脂手印144枚和油汗混合手印100枚,用多功能手印显现柜加热升华SWP荧光剂,熏显渗透性和非渗透性客体上的手印。结果油脂手印显现出了142枚,显出率达到98.6%;油汗混合手印,非渗透性客体共显出100枚,显出率达到100%,渗透性客体共显出95枚,显出率达到95%。结论SWP荧光剂对油脂手印的显现效果良好,可与“502”同时熏显,且不影响茚二酮等其他方法的进一步检验。 相似文献
96.
97.
LED光源作为一种新型光源,具有光度纯、强度高、光效率高等优点,现已广泛应用于照明、家居、装饰等领域。通过对民用LED光源与警用多波段光源激发指纹荧光效果的比较研究,探索民用LED光源作为荧光粉刷显指纹激发光源的可行性及其激发效果。 相似文献
98.
为探讨绵羊内源性反转录病毒(enJSRV)在绵羊胚胎发育过程中的作用,利用脂质体将pEGFP-C1空载体转入绵羊绒毛膜滋养层细胞中,测定其转染效率。同时构建抑制enJSRV env基因的RNA干扰质粒,并将其转染到能稳定表达enJSRV env基因的绵羊绒毛膜滋养层细胞中,通过荧光定量PCR检测其干扰效率。结果显示,重组干扰质粒enJRSV-env-shRNA-1、enJRSV-env-shRNA-2、enJRSV-env-shRNA-3、enJRSV-env-shRNA-4、Negative-shRNA构建成功。Lipofectamine LTX脂质体体积为6.0μL,转染混合物体积为100μL,转染48h组的转染效率最高,为42.37%。与正常对照组细胞的enJSRV-env mRNA表达量相比,转染靶基因干扰质粒的各组绵羊绒毛膜滋养层细胞中enJSRV-env mRNA表达量分别下调了73.56%、66.82%、33.66%和18.16%。筛选出了一个干扰效率最高的RNA干扰质粒enJRSV-env-shR-NA-1,为以后包装慢病毒及进行动物试验来揭示enJSRV的生殖生物学作用奠定了坚实的基础。 相似文献
99.
为建立鸡细胞因子SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测方法,根据GenBank中三种重要的鸡细胞因子即ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的基因序列,以鸡3-磷酸甘油脱氢酶(ChGAPDH)基因为内参,设计特异引物扩增目的基因。将四种基因克隆至pMD18-T载体上,得到各自阳性克隆质粒,以四种阳性质粒为标准品建立标准曲线并进行熔解曲线分析以及灵敏性、特异性和重复性试验。结果显示,当标准品稀释度为1×102~1×1010 copies/μL时,四种基因的Ct值与浓度间具有良好的线性关系,相关系数均大于0.985。熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好。应用建立的方法对堆型艾美耳球虫核酸疫苗pcDNA-Ea3-1E免疫的SPF雏鸡脾中ChIL-12mRNA和ChIL-18 mRNA的相对表达量进行检测,免疫组ChIL-12mRNA和ChIL-18mRNA的相对表达量均极显著高于空白对照组(P<0.01)。研究结果为ChIL-12、ChIL-15、ChIL-18的定量分析提供了技术平台。 相似文献
100.
目的:研究荧光桃红工作液显现非渗透表面潜血足迹技术;方法:荧光桃红溶解于酒精形成显现工作液,喷涂在遗留常见非渗透表面潜血足迹部位;结果:经荧光桃红酒精工作液处理后,常见非渗透表面潜血足迹产生强烈的亮红色。与传统的潜血显现试剂四甲基联苯胺比较,荧光桃红酒精溶液显现出的潜血印痕花纹更为反差明显,特征突出,且能够有效显现四甲基联苯胺处理后的潜血足迹;结论:荧光桃红酒精工作液能够有效显现出非渗透表面潜血足迹,且能够作为四甲基联苯胺的后增强试剂,若得到推广应用,将能够有效提高犯罪现场上潜血印痕的发现率、提取率和利用率。 相似文献