头孢喹肟对大肠杆菌防突变浓度的测定

采用标准琼脂二倍稀释法测定了头孢喹肟对大肠杆茵的最低抑茵浓度;用肉汤法富集了大肠杆菌;用琼脂稀释法测定了头孢喹肟对大肠杆菌的暂定防突变浓度(MPCpr)及防突变浓度(MPC).结果显示,头孢喹肟对大肠杆菌标准株(ATCC25922)的MIC和MIC99分别为0.125 μg/mL和0.1 μg/mL;MPCpr和MPC分别为0.5μg/mL和0.256μg/mL,MPC/MIC99比值为2.56.头孢喹肟对50株大肠杆茵临床分离株的MIC90和MPC9分别为0.2μg/mL和0.8μg/mL,MPC9/0MIC90比值为4.说明头孢喹肟限制大肠杆茵耐药突变的能力很强,ATCC25922的选择指数(SI)仅为2.56,临床分离株的SI为4.     

禽呼肠孤病毒99G株σB编码基因的克隆及其在大肠杆菌中的高效表达

采用RT-PCR方法扩增禽呼肠孤病毒(ARV)99G株σB编码基因,序列分析表明,99G株σB编码基因与其他禽呼肠孤病毒的同源性为90%～99 9%,而与我国番鸭呼肠孤病毒S12株的同源性仅有60%;用BarnH Ⅰ和Xho Ⅰ酶将σB编码基因切下并克隆到表达载体pGEX-6p-1中,构建了重组表达质粒pGEX-σB;鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,σB基因在大肠杆菌中得到了高效表达,表达的融合蛋白占总蛋白的41.46%,融合蛋白的分子质量为66 ku,主要以包涵体形式存在;Western-blot结果显示,该融合蛋白能与抗ARV阳性血清发生特异性反应,表明重组蛋白具有良好的反应原性,可用于禽呼肠孤病毒病诊断试剂盒和基因工程疫苗的研制.     

猪白细胞介素-6基因在大肠杆菌中的表达及其产物的促淋巴细胞增殖活性

为研究猪白细胞介素-6(IL-6)作为免疫佐剂的可行性,用IPTG诱导含有猪IL-6基因的BL21(DE3)LysS工程菌,表达的目的蛋白经超声波破碎,洗涤,8mol/L尿素变性溶解后,用固化金属亲和层析法纯化后用谷胱甘肽再氧化还原法进行复性,并用MTT法对复性的重组蛋白的生物学活性进行分析.结果显示,复性的重组猪IL-6具有良好的刺激淋巴细胞体外增殖的活性.说明重组猪IL-6在作为免疫佐剂方面有一定的应用价值.     

湖北省鸡大肠杆菌病流行情况调查及病原分离鉴定

湖北省２９个养鸡场的１３６８１０只鸡在１９９２～１９９６年大肠杆菌病的发病率为２６．４％，死亡率为８．７％（１．７％～３４．０％）。从病死鸡分离出１８株大肠埃希氏菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ），主要血清型Ｏ７８，Ｏ２和Ｏ１，分别占鉴定菌株的３８．８％，１６．７％和１１．０％。分离菌株肉汤培养物接种小白鼠和４日龄雏鸡，可使５０％以上小白鼠在２ｄ内死亡；３０％以上的雏鸡在７ｄ内死亡，剖检存活鸡可见典型的大肠杆菌病病变。     

认真办好代表议案 造就一方青山绿水

2003年以前，建水城市供给的自来水，采用机械从地下200多米深的机井直接提起，由于高压的吸冲力，地层中的钙、镁盐被冲刷成微粒溶入水体，经测试，其供给水硬度达到17度。据卫生部门查证，这成为居民结石性病变、影响健康的主要成因之一。因此，一些人便改用井水。随着城乡工农业生产的发展，井水污染严重，连誉满临安古城的西门大板井水，经检测，培养基上的大肠杆菌怵目惊心，这给人民群众的精神生活和物质生活都带来了极大的影响，     

不同动物源性大肠杆菌多重耐药调控基因rob的同源性分析

为研究大肠杆菌多重耐药调控基因rob与不同动物源性及多重耐药水平之间的关系,选取临床分离的不同动物源性大肠杆菌5株及大肠杆菌药敏质控株ATCC25922,在对其进行主要治疗药物耐药性检测的基础上,分别以其染色体DNA为模板,通过PCR反应扩增出大肠杆菌多重耐药调控基因rob,将该基因分别与克隆载体pMD18-T连接,连接产物转化至大肠杆菌JM109感受态细胞中,对经酶切与PCR反应鉴定为阳性的克隆质粒进行了核苷酸序列测定。测序结果表明:不同动物源性大肠杆菌的rob基因与Gen-Bank中该基因的核苷酸序列及所推导的氨基酸序列的同源性较高。不同源性大肠杆菌的rob基因的核苷酸序列与其动物源性有关,该基因的核苷酸序列的个别突变位点可能影响AcrAB外输泵的表达水平,进而影响其多重耐药水平。     

杜氏利什曼原虫NH36基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

应用RT-PCR技术扩增并克隆杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)NH36编码基因,经鉴定及序列分析,构建其原核重组表达载体,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western-blotting鉴定其表达产物。结果显示,获得的NH36开放阅读框为945 bp,编码314个氨基酸残基,与GenBank上发表的国际标准株NH36编码基因序列以及氨基酸序列同源性分别为88.57%(837/945)和89.17%(280/314)。表达蛋白为36 ku,经1 mol/L IPTG诱导6 h后的表达量最高;薄层扫描显示表达的蛋白占菌体蛋白总量的57%;该蛋白可被抗杜氏利什曼原虫的多克隆抗体血清识别。     

猪和野生动物源大肠杆菌及沙门菌中磺胺类药物耐药基因的检测

对从四川省10个规模化猪场和16种野生动物的粪样中分离鉴定出的67株大肠杆菌、57株沙门菌进行了药敏试验。结果,猪源和野生动物源分离菌对磺胺类药物的耐药率分别为72.0%(72/100)和29.2%(7/24)。根据GenBank中登录的序列,设计了3对特异性引物,对磺胺类药物的耐药基因Sul1、Sul2、Sul3进行了三重PCR检测。在这124株细菌中,Sul1基因的检出率最高,为47.6%(59/124),Sul2基因的检出率为17.7%(22/124),Sul3基因的检出率为18.5%(23/124)。药敏试验结果与基因检测结果的符合率为89.9%。     

禽致病性大肠杆菌强毒力岛摄铁功能与致病性关系的研究

采用PCR法检测强毒力岛主要结构基因irp1、irp2、fyuA在禽致病性大肠杆菌中的分布;铬苯胺醇法检测铁载体的合成;SDS-PAGE法检测耶尔森菌摄铁蛋白HMWP1和HMWP2的表达,以半数致死量试验测定禽致病性大肠杆菌致病性与强毒力岛摄铁功能的关系。结果表明,7株禽致病性大肠杆菌强毒力岛irp1、irp2和fyuA基因的检出率为100%;铬苯胺醇平板上都能产生橙色透明晕圈;缺铁条件下,能够表达与耶尔森菌相同的摄铁蛋白HMWP1和HMWP2且半数致死量试验验证禽致病性大肠杆菌的毒力与强毒力岛摄铁功能呈正相关。证实禽致病性大肠杆菌中强毒力岛的摄铁功能与其致病性有密切的联系。     

不同区域鸡大肠杆菌对抗菌药的耐药性比较

从山东省9个地区、河北省青县和辽宁省本溪市肉鸡病料中分离鉴定出了264株大肠杆菌,并测定了它们对29种抗菌药的耐药性.结果显示,3个区域中以山东省鸡大肠杆菌的耐药种类最多,为29种,辽宁省最少,为23种;3个地区的致病菌株对土霉素、酒石酸泰乐茵素、磺胺-6-甲氧嘧啶、氨苄西林钠、阿莫西林5种药物的耐药率均达到了90.0%以上;另外,山东和辽宁两地分离茵株对硫酸链霉素和盐酸金霉素、山东和河北分离株对甲砜霉素、河北和辽宁分离株对恩诺沙星和磷霉素钠,辽宁分离株对甲磺酸达氟沙星和延胡索酸泰妙茵素的耐药率几乎均达到了80.0%以上.表明,3个区域的鸡大肠杆茵时大部分临床常用抗茵药产生了耐药性,但耐药种类和耐药程度有一定的差异.