禽呼肠孤病毒P17蛋白基因在大肠杆菌中的表达及其ELISA检测方法的建立

用设计合成的1对跨越禽呼肠孤病毒(ARV)P17非结构蛋白基因完整开放阅读框(ORF)的特异性引物,对ARV S1133株进行了RT-PCR扩增。扩增产物与pGEX-4T-1原核表达载体连接后,转化大肠杆菌BL21感受态细胞。经0.2 mmol/LIPTG诱导,表达的融合蛋白分子质量为42.4 ku,占菌体总蛋白的34%。表达产物P17蛋白经不同浓度尿素纯化后,纯度达到85%。Western-blotting显示,纯化的P17蛋白能与感染ARV的阳性血清反应,说明其具有抗原性。以此重组蛋白为包被抗原初步建立了用于鉴别检测ARV活病毒感染与灭活疫苗免疫的SPF鸡血清的ELISA。     

我党历次代表大会简介

胜利油田孤东采油厂三采中心党总支结合企业生产实际．成立了由工人党员组成的“党员议事会”。按照“拟定议题-党员调研-集中讨论-形成纪要-呈报党总支-反馈处理意见”的程序，每月由党小组列出议事议题，每季度召开会议集中讨论。这样，职工的意见就能在第一时间里反映到党总支。     

禽呼肠孤病毒实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

为建立禽呼肠孤病毒(ARV)实时荧光定量RT-PCR检测方法,将PCR扩增的σC基因片段克隆到pGM-T载体,重组质粒经筛选、鉴定、SalⅠ单酶切,得到线性化转录模板DNA,将体外转录的RNA梯度稀释后作为阳性模板,用于标准曲线的制定。根据S1基因σC结构蛋白基因保守区域序列设计了1对特异性引物,以体外转录的RNA作为标准品,应用SYBR GreenⅠ染料法建立了检测ARV的一步法实时荧光定量RT-PCR方法。特异性、敏感性和重复性试验结果表明,制作的标准曲线定量浓度范围宽,比常规的RT-PCR敏感1×103倍,可检测到5.2×102个拷贝的标准品RNA,与NDVI、BDV、MG均不反应;从攻毒鸡的关节组织中可以检测到病毒,病毒含量为1×105~1×107个拷贝/μL。表明,建立的实时荧光定量RT-PCR具有特异、敏感、快速、定量、重复性好等优点,可用于ARV的检测。     

禽呼肠孤病毒σB基因在杆状病毒表达系统中的表达与鉴定

本研究旨在通过Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达具有生物学活性的禽呼肠孤病毒σB蛋白。首先,根据NCBI中ARVσB基因序列,设计引物构建σB基因重组供体质粒pFast-σB。随后转化DH10bac感受态细胞,筛选获得重组穿梭质粒Bacmid-σB。通过脂质体介导法转化sf9细胞,获得重组杆状病毒rBac-σB。将重组病毒感染sf9细胞,表达重组蛋白。通过SDS-PAGE、Western-blot和间接免疫荧光(IFA)检测表明,ARVσB蛋白在sf9细胞中成功表达,分子量约为41 ku,并具有良好的生物学活性,为进一步研究ARVσB基因的功能及其基因工程亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

毛泽东喜欢津门三绝之一 “狗不理包子”

<正>据原天津市委书记黄火青回忆:毛泽东多次南巡,一路之上,他不要求吃什么好的东西,只要吃地方土特食品。比如:吃乐亭的小枣、泰安的三宝(白莱、豆腐、水)、德州的烧鸡,等等。1958年8月,毛泽东乘专列来天津视察,车停在河北区转盘村车辆厂后面的又道上。秘书通知河北     

大漠孤月

最爱大漠边关那轮孤月。每天生活在水泥钢筋铸造而成的高楼大厦中，穿梭于熙熙攘攘的车水马龙间，习惯了步履匆匆，习惯了浮躁不安，渐渐淡忘了头顶那轮皎洁明月。淡忘了内心深处那份独守的宁静超然，淡忘了原本属于自己的那片浩瀚苍穹。     

东汉西域屯田“三废三置”与西北边疆安全研究

东汉时期的西域屯田与国家西北边疆安全关系是历代中央王朝的典型时期。东汉政府与西域关系的“三绝”与“三通”导致了东汉长达100多年时间内出现在西域屯田的“三废”与“三置”的典型时期，由此引发的西北边疆或治或乱的安全问题，凸显了西域屯田与西北边疆安全之间紧密的内在逻辑关系及西域屯田的战略价值。由此，屯田西域成为历代中央王朝战略决策的重要历史参照。     

从"绝伪弃作"到"绝仁弃义"——浅析郭店竹简本《老子》反儒思想的强化

1993年在湖北荆门郭店村出土的珍贵竹简,共有804枚,大部分字迹清晰,保存完好.其中,郭店竹简本<老子>篇抄写时间比帛书<老子>早了将近一百年,从而否定了长期以来<老子>成书于战国中、晚期的观点.     

闲话“雨水”

<正>"正月中,天一生水。春始属木,然生木者必水也,故立春后继之雨水。且东风既解冻,则散而为雨矣。"是《月令七十二候集解》中对"雨水"这一节气的解释。古人云:"斗指壬为雨水,东风解冻,冰雪皆散而为水,化而为雨,故名雨水。"民谚也有云:"立春雨水到,早起晚睡觉",说的是雨水节气之后,冬小麦自南向北开始返青,这一时段是农家人小春管理、大春备耕的关键时期。"春雨贵如油",这一俗语既传达了春雨的稀缺,也透露出人们对春雨的渴望。古代的劳动人民在长期的生活实践中,总结出很多与"雨水"有关的谚语。例如像"一滴春水一滴油,一厘春水一厘金"、"雨水雨,水就匀;雨水晴,水不匀"、"雨打雨水节,二月落不歇"、"雨水下雨春水好,雨水无雨春水少"等。从中不难看出"雨     

20世纪三四十年代中文期刊文献中的“区位”术语源流考

经济区位论是关于人类社会经济活动空间法则的学说。1826年德国经济学家杜能《孤立国》一书的问世标志经济区位理论的产生,并在20世纪40年代发展成为一门独立、系统的学科(张文忠:《经济区位论》,