MTT比色分析法检测山羊白细胞介素-2方法的建立

以伴刀豆蛋白A(ConA)活化的山羊外周血单核细胞作为应答细胞,建立了检测山羊白细胞介素-2(IL-2)的MTT比色分析法.结果表明,以3 μg/mL的ConA浓度刺激,经过36 h活化所得的应答细胞活性最好;MTT的用量及作用时间分别以20μL(50 μg/μL)及4 h为最佳;IL-2与活化细胞的作用时间以18 h为最适.     

感动生活的100句话(15) 走出那片天

关键词跳出思维定势的怪圈,我们的思想会变得更自由。我的外甥女上小学五年级,她每天晚上都要给我来电话问作业。这缘于她最近报了一个奥数班。对于数学我一向是头痛的要紧,但在她这个小孩子的眼里舅舅是无所不知的,于是我成了百度知道的常客。     

万宁市组织省五届人大代表开展视察活动

本刊讯(通讯员李杨渊吴敏燕)2014年12月18日,万宁市人大常委会组织省五届人大代表,对万宁市重点项目建设推进情况开展视察活动。视察组一行先后实地视察了海南开泰东山羊养殖基地、乌场港建设用地使用情况和旅游公路建设情况。每到一处,代表们都认真查看,听取被视察单位关于项目推进情况的汇报,详细了解项目建设情况。实地视察后,召开座谈会,代     

小反刍兽疫病毒H基因或F基因重组山羊痘病毒活载体疫苗的研究

为构建能够表达小反刍兽疫病毒(PPRV)H基因或F基因的重组山羊痘病毒(GPV)并以此为活载体疫苗,在通用转移质粒pTKfpgigp的多克隆位点中插入PPRV的H基因或F基因,构建重组转移质粒pTKfpgigp-PPRV H和pTKfpgigp-PPRV F,并用Lipofectamine 2000转染已感染GPV的原代绵羊睾丸细胞,经同源重组产生重组GPV(rGPV)。用GFP和gpt选择标记筛选纯化rGPV,通过RT-PCR和免疫荧光技术检测rGPV在原代绵羊睾丸细胞中外源基因的表达情况。将获得的rGPV皮内接种山羊,检测抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体的变化情况。结果显示,获得了含有PPRV H基因或F基因的病毒株rGPV-PPRV H和rGPV-PPRV F;在原代绵羊睾丸细胞中rGPV所含的外源基因进行了正常转录和翻译,表达产物能与PPRV抗血清产生特异性反应,动物免疫试验表明,2株rGPV能诱导产生高水平的抗山羊痘病毒和小反刍兽疫病毒的特异性抗体。上述研究结果为PPRV重组标记疫苗的研制提供了参考。     

口疮病毒抗体间接ELISA检测方法的建立及初步应用

为建立检测口疮病毒(orf virus,ORFV)抗体的间接ELISA方法,原核表达口疮病毒B2L蛋白与6×组氨酸标签的重组蛋白;对纯化复性后的重组B2L蛋白进行Western-blot鉴定;用复性后的重组B2L蛋白作为包被抗原,优化反应条件,建立检测ORFV抗体的间接ELISA,并进行特异性、灵敏度和重复性评价,最后应用所建立的间接ELISA对来自四川部分地区的384份山羊血清样品进行检测。结果显示,成功原核表达出42 ku的重组ORFV B2L蛋白。Western-blot结果表明,重组蛋白具有良好的抗原反应性。间接ELISA最佳反应条件为:包被抗原质量浓度为5μg/m L,1∶100稀释血清作用2 h,酶标二抗以1∶2000稀释作用30 min,TMB显色时间为15 min。在该优化条件下,D450≥0.31为阳性。该方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性。临床样品的间接ELISA检测结果显示,总阳性率为66.67%(256/384),其中未接种过疫苗的羊只抗体阳性率为34.81%(55/158)。上述结果表明,建立的间接ELISA可用于ORFV抗体的检测,四川部分地区山羊场羊只感染野毒的概率较大,疫苗免疫效果不佳。     

山羊关节炎脑炎病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立及应用

为建立检测山羊关节炎脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus,CAEV)的快速诊断方法,本研究根据CAEV甘肃株Gag基因设计1对引物,并以含有CAEV甘肃株全基因组序列的质粒pUC57-CAEV为模板,建立CAEV的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并验证其特异性、灵敏性和重复性。结果显示,本研究所建立的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法的Ct值与标准品模板在1.19×109~1.19×10^1 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.997,斜率为-3.74,检测下限为1.19×10^1 copies/μL,且对痘苗病毒、山羊痘病毒均无扩增。重复性试验结果显示,批间与批内变异系数均小于1%,重复性好。本研究首次建立了CAEVGag基因的SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为CAEV的快速检测和病毒感染预防提供了技术手段。     

山羊附红细胞体病的流行病学调查

对河南省豫东 6个县的山羊附红细胞体病进行了流行病学调查。结果表明 ,山羊附红细胞体病的感染传播没有季节差异 ;集约化养羊的感染率比散养羊的感染率明显 (P <0 .0 1)高 ;隐性感染附红细胞体病的母山羊所产羔羊绝大多数发病 ,波尔山羊新生羔羊发病率明显 (P <0 .0 5 )高于杂交羊 ,极显著 (P <0 .0 1)高于槐山羊 ;长期在低洼潮湿环境中放牧的山羊感染率和发病率明显 (P <0 .0 1)高于在干燥环境中放牧的山羊 ;带毒针头可以传染山羊附红细胞体病 ;天气骤冷、阴雨连绵、羔羊断奶、过度拥挤等应激因子可促使本病的发生     

“绵(山)羊吐草病”病因调查及防治的研究

阿拉善左旗绵(山)羊吐草病流行严重,1984年以来危害加剧,发病率可达10％～15％。骆驼、牛和人也常发生类似疾病。在病区采集牧草、饮水、土壤和患羊血液、毛、骨骼等样品共51份,分析测定常量和微量元素,发现环境氟、钼含量较高,铜、硒较低。临床观察170例,患羊呈现一种综合征。病初不易被发现,轻者消化紊乱、贫血和运动障碍;重者翻胃吐草,可见齿斑和臼齿磨灭不整,羔羊常见瘫痪。病理学检查20例,以骨、肌肉、心肌、肝、肾营养不良和皱胃慢性炎症为主。用自制的绵山羊吐草防治散治疗170例,有效率1O0％;治愈153例,治愈率90％;预防1500例,仅8只发病,发病率控制在0.6％以下。试验证明,该病为地方性慢性氟中毒,并继发缺铜和缺硒。还探讨了发病机理。     

吡喹酮肌肉注射液治疗山羊实验感染日本血吸虫病研究

本研究以二种吡喹酮肌肉注射液治疗山羊人工感染血吸虫病，剂量３０ｍｇ／ｋｇ，减虫率分别为９７．９％和９８．６％，减雌率分别为９７．９％和１００％；剂量２０ｍｇ／ｋｇ，减虫率分别为９６．３％和９８．１％，减雌率分别为９６．９％和９８．４％，显示了良好的疗效。二种吡喹酮肌肉注射液药剂稳定性好，放置二年，未见有毒性反应，建议可在现场试用。     

波尔卡跳进世博会

2010年上海世博会即将开幕，她将向世界展示“城市，让生活更美好”的主题。美好的民间事物也能走向城市、走向世博会。实际上世博会一开始也是这么做的。