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应用比浊法、可溶性蛋白百分比、夹心ELISA及变性与非变性SDSPAGE等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含2mol/L尿素,160μmol/LPEG4000,1.0mmol/L0.1mmol/LGSHGSSG的pH9.0的TrisHCl缓冲液,蛋白浓度为2~5mg/mL,以静置缓慢透析为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体、多聚体明显增加;稀释法复性,复性液为上述透析液,蛋白浓度0.1mg/mL,以分步缓慢稀释为佳。透析法复性与稀释法复性最佳条件的实验结果无显著差别。透析法复性的重组蛋白进行Sepharose6FF分子筛凝胶层析,出现2个主峰,收集有免疫活性的第1峰进行DEAESepharose离子交换层析,用含50g/LNaCl、pH9.0的TrisHCl缓冲液洗脱,亦出现2个主峰,收集有免疫活性的第1峰。SDSPAGE显示该峰为单一蛋白条带,蛋白纯度大于90%。夹心ELISA检测免疫活性,每1mg蛋白的效价大于6×105。 相似文献
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自武汉城市圈被批准为国家"两型社会"综合配套改革试验区以来,圈内地方政府之间的交流与合作日益密切,交通、通信等基础设施的一体化取得了较为明显的成效,而产业发展与布局一体化及城乡建设一体化却举步维艰,圈内企业迁移中的地方保护主义、产业 相似文献
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张雪 《中共郑州市委党校学报》2012,(5):49-54
在现有压力型体制及行政组织系统背景下,我国地方政府环境规制失灵,表现为"智猪博弈"关系。只有在实践中坚持环境正义原则,处理好发展与环保的关系,逐步建立绿色政绩考核机制;合理分置环境治理事权财权,适当调整行政管理体制;倡导环境治理主体多元化,形成治理行为多样化格局,才能走出传统发展窠臼,真正实现人和自然的和谐发展。 相似文献