猪源嗜麦芽窄食单胞菌16 S rRNA基因的克隆和序列分析

从临床病猪无菌采集抗凝血 ,抽提全血基因组DNA ,用能够扩增大多数真细菌 16SrRNA基因的通用引物 ,扩增出长度为 15 0 2bp的嗜麦芽窄食单胞菌的 16SrRNA基因 ;该基因与国外报道的嗜麦芽窄食单胞菌部分临床和环境分离株核苷酸序列的同源性达 99%以上。证实嗜麦芽窄食单胞菌可感染猪。     

甘肃省家畜棘球蚴病综合防治效果调查

以甘肃省的天祝县、环县和漳县的９个乡为家畜棘球蝴病综合防治试点。在完成流行病学基线调查的基础上，采用单相灭绝病原模式，用毗喳酮药饵对试验区的所有犬每月进行一次高密反无污染性驱虫，并在年对防治效果进行监测。经过两年半（２９个月）的综合防治，使三县试，点内大的细粒棘球绦虫平均后来率由１９９１年的３４．３２％下降到１９９３年的０１家畜（牛、羊、猪）棘球蚴病的平均感染率由５６．８１％降为９．２５％；绵羊的间接血凝（ＩＨＡ）阳性率由７９．４７％降为３５．５６％；天祝县１岁绵羊的棘球蝴病感染率由１９９１年的９８．４６％下降到１９９３年的２８．５７％，脱感率达７０．９８％；２岁羊的感来率由８５．８７％下降为３３．３３％，脱感率为６１．１９％。     

猪早期胚胎显微注射方法的研究

共超排了22头初情期前青年母猪,平均每头排卵24.72个。从输卵管 内取得257枚早期胚胎,选择出159枚1细胞和2细胞胚胎进行离心和注射。离心后有155枚(83.78％,155/185)可以清楚地见到原核。174枚胚胎注射外源基因后,移植给7头受体猪,结果有5头妊娠(71.43％,5/7),其中有2头流产,3头共产仔23头。所产仔猪中,死胎4头,木乃伊10头,活仔9头。     

猪心室间隔的静脉构筑

用血管Ｘ线造影、ＡＢＳ共聚树酯血管铸型、血管墨汁灌注组织切片等多种血管显示方法，观察了６２例猪心室间隔的静脉构筑。室间隔前１／３～１／２区域多注入心大静脉，以须根状静脉为主；后１／２～２／３区域多注入心中静脉，以直根状静脉为主，两者之间有吻合支交通。室间隔内微静脉汇聚形状似萝卜根样。室间隔存在丰富的心最小静脉，主要位于室间隔的右侧     

猪生殖与呼吸综合征病毒广东株ORF3和ORF5基因的克隆与分析

采用RT PCR方法扩增了猪生殖与呼吸综合征病毒广东株的糖蛋白基因ORF3、ORF5 ,并对其进行了克隆和序列分析。用Blast分析软件比较分析了其与VR 2 332株以及流行的欧洲株之间的同源性 ,并对其编码氨基酸序列的分子质量、等电点、穿膜区、糖基化位点进行了分析。结果显示 ,PRRSV广东株ORF3与美洲株的同源性达 90 % ,而与欧洲株只是在 318～ 393bp、5 0 2～ 6 97bp之间有 77%左右的同源性 ;ORF5与美洲株的同源性为 88% ,与欧洲株仅在 133～ 2 0 9bp区间有 77%左右的同源性。     

中草药添加剂对断奶猪肠道菌群与生产性能的影响

用杜仲叶、山楂、黄芪等中草药研制猪用饲料添加剂 ,对 4 0日龄断奶仔猪进行饲喂试验 ,观察其对断奶仔猪肠道菌群和生产性能的影响。试验结果表明 ,服用中药的 3组试验猪肠道中的乳酸菌和双歧杆菌均比对照组明显增高 (P <0 .0 5 ) ,而大肠埃希氏菌和肠球菌指数以及腹泻发生率则明显降低 ;日增重分别比对照组提高了 9.2 0 %、5 .5 0 %和 13.32 % ;料肉比分别比对照组降低了 9.80 %、6 .6 4%和 15 .0 3%。结果显示 ,该中草药饲料添加剂常规粉剂和提取物制剂均能促进仔猪肠道中有益菌的增殖 ,提高猪的生产性能。     

猪生殖与呼吸综合征病毒5''''非翻译区序列的反向遗传操作

以猪生殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)北美株感染性克隆pCBC2为平台进行反向遗传操作,利用突变PCR获得在病毒基因组5'非编码区(5'UTR)和ORF1起始密码子之间插入Nde Ⅰ的全长克隆pTLNd4,并以此为基础将5'UTR替换为欧洲株的5'UTR,获得全长克隆pTLV8.以体外转录的RNA转染MARC-145细胞.结果显示,pTLNd4产生了细胞病变(CPE),而pTLV8未产生.通过RT-PCR和Northern blot试验,分别对这2株突变病毒的基因组RNA复制和亚基因组mRNA转录水平进行了分析,同时还对pTLNd4进行了病毒学试验.证实,它们与亲本病毒无论从分子生物学水平或病毒学水平都无明显差异;pTLV8虽未产生CPE,但在病毒传代细胞中检测到了基因组RNA,说明替换不同基因型5'UTR的突变病毒虽然丧失了复制能力和感染性,但仍然能够提供病毒RNA合成所需要的顺式调控因子.     

广东省瘦肉型种猪场猪萎缩性鼻炎痢疾支原体肺炎的调查

应用病原分离、直接涂片镜检和间接血凝试验法对广东省26个瘦肉型种猪场的4086头种猪分别进行猪传染性萎缩性鼻炎(AR)、痢疾(SD)和支原体肺炎(MPS)的调查,结果AR、SD、MPS的阳性率分别为:1.05％、1.64％和70.04％,AR、SD各有18个场检出带菌猪,MRS检25个场全部为阳性场。这表明,广东省种猪场普遍感染AR、SD和MPS,而MPS感染最为严重,但上述三种疫病在种猪群中极少表现明显临床症状,呈一种隐性带菌状态。检验结果还说明,AR、SD和MPS感染率的高低与猪场的兽医卫生管理水平、猪群密度及通风条件有关。     

猪流行性腹泻病毒抗原捕获ELISA抗体检测方法的建立与应用

用猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白单克隆抗体IgG包被酶标板,以纯化的PEDV作为捕获抗原,建立了PEDV抗原捕获ELISA抗体检测方法。优化后该方法的反应条件为:单克隆抗体包被浓度为2μg/mL,37℃包被2h加4℃过夜;含50g/L脱脂奶粉的磷酸盐缓冲液作为封闭液,37℃封闭3h;捕获抗原的质量浓度为5μg/mL,37℃作用3h;被检猪血清做1∶50稀释,37℃作用1h;山羊抗猪IgG-HRP稀释度为1∶2 000,37℃作用45min;底物最佳作用时间为37℃10min。设定阴阳性血清抗体对照,计算血清样品的S/P值,S/P值≥0.37判为阳性,S/P值0.323判为阴性,介于两者之间为可疑。用建立的ELISA检测猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒和口蹄疫病毒等阳性血清,结果均无交叉反应性。该方法的批间和批内变异系数均小于10%。相对国产商品化抗体检测试剂盒,其敏感性、特异性和符合率分别为94.6%、91.3%和93.3%。应用本方法检测山东、浙江和江苏省的308份猪血清样品,结果 PEDV抗体阳性率达89.29%。结果表明,建立的抗原捕获ELISA敏感性、特异性和重复性良好,可用于PEDV抗体检测和流行病学调查。     

猪带绦虫烯醇化酶基因的原核表达及鉴定

为了探索猪带绦虫烯醇化酶基因的生物学功能,以猪带绦虫幼虫cDNA为模板,PCR扩增获得烯醇化酶基因的ORF,并将其克隆至原核表达载体pET-30a(+),构建重组表达质粒。经IPTG诱导表达后,纯化表达产物,采用免疫印迹法分析表达产物的免疫反应性,并测定它与纤溶酶原的结合特性及酶活力。结果显示,该基因的ORF大小为1 302bp,表达大小约为53ku的重组蛋白;表达产物可被猪囊尾蚴病阳性血清识别;该重组蛋白具有纤溶酶原结合特性及酶活力。据此推测,猪带绦虫烯醇化酶可能在寄生虫入侵宿主过程中发挥作用,有作为药物靶标或疫苗候选分子的潜力。